專利名稱：提高小麥花藥培養(yǎng)的綠苗分化比率的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物學研究技術領域，特指一種提高小麥花藥培養(yǎng)的綠苗分化比率的方法。
小麥花藥培養(yǎng)是培育小麥單倍體，創(chuàng)建小麥雙單倍體群體(Double haploid population)進行細胞遺傳學研究和小麥倍性育種的關鍵技術。目前通用的小麥花藥培養(yǎng)方法是用C17或W14誘導培養(yǎng)基在32℃左右的條件下進行培養(yǎng)。常用的C17誘導培養(yǎng)基的主要成份和配比為(毫克/升)大量元素化合物KNO31400KH2PO4400NH4NO3300MgSO4·7H2O 150CaCl2·2H2O 150微量元素化合物MnSO4·4H2O 11.2ZnSO4·7H2O 8.6H3BO36.2KI 0.83CuSO4·5H2O 0.025CoCl2·6H2O 0.025鐵鹽Na2EDTA 37.25FeSO4·7H2O 27.85有機物甘氨酸(Glycine)2.0D-生物素(D-Biotin) 1.5維生素B1 1.0維生素B6 0.5煙酸 0.5激素細胞激動素(2,4-D) 2.0細胞激動素(KT) 0.5填充物蔗糖 90000瓊脂糖 7000常用W14誘導培養(yǎng)基的主要成份和配比為(毫克/升)大量元素化合物KNO31400MgSO4·7H2O 150(NH4)H2PO4380
MgSO4·7H2O 200CaCl2·2H2O 140微量元素化合物MnSO4·H2O 8.0H3BO33.0ZnSO4·7H2O 3.0KI0.5CuSO4·5H2O 0.025CoCl26H2O 0.025Na2MoO4·2H2O 0.005鐵鹽Na2EDTA 37.3FeSO4·7H2O 27.8有機物水解乳蛋白300天冬素15甘氨酸2.0煙酸 0.5激素細胞激動素(2,4-D) 2.0細胞激動素(KT)0.5填充物蔗糖 90000瓊脂糖4000其主要缺陷在于1．用常用誘導培養(yǎng)基進行小麥花藥培養(yǎng)過程中其出愈率、綠苗數(shù)、綠苗分化率和綠苗產(chǎn)率都較低，分化出80％以上無意義的白化苗。
2．其培養(yǎng)溫度在32℃左右，因培養(yǎng)溫度較高，消耗能源較多。
針對上述缺陷，本發(fā)明人進行了長期的研究和試驗，創(chuàng)造出本發(fā)明的技術方案。
本發(fā)明的目的在于提供一種提高小麥花藥培養(yǎng)的綠苗分化比率的方法，通過改進培養(yǎng)基的成份和培養(yǎng)條件，克服現(xiàn)有技術的弊端，達到增加出愈率、降低白化苗、提高綠苗分化比率和節(jié)約能源的目的。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種提高小麥花藥培養(yǎng)的綠苗分化比率的方法，其特征在于該方法包括如下步驟(一)制備馬鈴薯滲提液選新鮮馬鈴薯剝皮后，切成1cm的小方塊，取100克放入100克蒸餾水中燒煮，保持沸騰2-3分鐘，冷卻至室溫，白紗布過濾制得馬鈴薯滲提液備用。
(二)制備鐵鹽母液在100克蒸餾水中溶入0.557克的FeSO4·7H2O和7.45克的Na2EDTA，制成鐵鹽母液備用。
(三)配制誘導培養(yǎng)基在常用的C17或W14培養(yǎng)中加入上述制備的馬鈴薯滲提液5ml和鐵鹽母液5-15ml，定容為1000ml，調(diào)pH5-6，并進行高壓滅菌處理，配制成本發(fā)明的誘導培養(yǎng)基。
(四)接種花藥培養(yǎng)在上述配制的誘導培養(yǎng)基中接種花藥，控制高溫誘導時間5天以下，保持培養(yǎng)溫度28-30℃左右，避光暗培養(yǎng)50天以內(nèi)，出愈后延長光照時間10-15小時/日。
本發(fā)明的主要優(yōu)點是1、通過在誘導培養(yǎng)基中加入馬鈴薯的滲提液和提高鐵鹽含量，及改變培養(yǎng)條件，顯著地提高了出愈率、綠苗分化率和綠苗產(chǎn)率，同時降低了白化苗率，為小麥花藥培養(yǎng)，創(chuàng)建小麥雙單倍體群體進行細胞遺傳學研究和小麥倍性育種研究開創(chuàng)了新方法。
2、改變培養(yǎng)條件包括縮短高溫誘導時間，降低培養(yǎng)溫度在30℃以下，長期避光暗培養(yǎng)、出愈后延長光照時間等，同樣有利于提高綠苗分化率和降低白化苗率，且減少了能源消耗和降低了成本。
下面結(jié)合較佳實施例對本發(fā)明進一步說明本發(fā)明的方法包括如下步驟(一)制備馬鈴薯滲提液選新鮮馬鈴薯剝皮后，切成1cm的小方塊，取100克放入100克蒸餾水中燒煮，保持沸騰2-3分鐘，冷卻至室溫，白紗布過濾制得馬鈴薯滲提液備用。
(二)制備鐵鹽母液在100克蒸餾水中溶入0.557克的FeSO4·7H2O和7.45克的Na2EDTA，制成鐵鹽母液備用。
(三)配制誘導培養(yǎng)基在常用的C17或W14培養(yǎng)中加入上述制備的馬鈴薯滲提液10ml和鐵鹽母液10ml，定容為1000ml，調(diào)pH5-6，并進行高壓滅菌處理，配制成本發(fā)明的誘導培養(yǎng)基。
(四)接種花藥培養(yǎng)在上述配制的誘導培養(yǎng)基中接種花藥，控制高溫誘導時間5天以下，比原來縮短一半時間，降低培養(yǎng)溫度29℃左右，隨后在25℃左右避光暗培養(yǎng)50天以內(nèi)，出愈后延長光照時間12小時/日。
下面通過本發(fā)明的方法分別與常用的C17和W14培養(yǎng)基的對比實驗，進一步說明本發(fā)明的積極效果，試驗結(jié)果見下表<
<p>注1．*為本發(fā)明的培養(yǎng)基2．出愈率(％)=出愈數(shù)/接種花藥數(shù)×100％3．綠苗分化率(％)=綠苗數(shù)/(綠苗數(shù)+白化苗數(shù))×100％4．綠苗分化率(％)=綠苗數(shù)/接種花藥數(shù)×100％5．白化苗率(％)=白化苗數(shù)/(綠苗數(shù)+白化苗數(shù))×100％從上述對比試驗結(jié)果可以清楚的看出如下效果(一)本發(fā)明的方法與常規(guī)C17培養(yǎng)基對比試驗，其出愈率增加0.9％、綠苗分化率增加6.37％、綠苗產(chǎn)率增加0.09％、白化苗率降低6.37％。
(二)本發(fā)明的方法與常規(guī)W14培養(yǎng)基對比試驗，其出愈率增加1.29％、綠苗分化率增加19.30％、綠苗產(chǎn)率增加0.10％、白化苗率降低21.93％。
本發(fā)明的方法取得上述顯著效果，是經(jīng)過長期的反復研究和實驗的結(jié)果，目前已處于世界的領先水平，通過在常用的培養(yǎng)基C17或W14中加入馬鈴薯滲提液和鐵鹽母液及改變培養(yǎng)條件包括縮短高溫誘導時間5天以內(nèi)、降低培養(yǎng)溫度在30℃以下、長期避光暗培養(yǎng)、出愈后延長光照時間等，顯著地提高了出愈率、綠苗分化率和綠苗產(chǎn)率，同時降低了白化苗率，從而解決了長期以來小麥花藥培養(yǎng)中綠苗分化率低的難題，為小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建小麥雙單倍體群體進行細胞遺傳學研究和小表倍性育種研究開創(chuàng)了新方法。
權利要求
1.一種提高小麥花藥培養(yǎng)的綠苗分化比率的方法，其特征在于該方法包括如下步驟(一)制備馬鈴薯滲提液選新鮮馬鈴薯剝皮后，切成1cm的小方塊，取100克放入100克蒸餾水中燒煮，保持沸騰2-3分鐘，冷卻至室溫，白紗布過濾制得馬鈴薯滲提液備用。(二)制備鐵鹽母液在100克蒸餾水中溶入0.557克的FeSO4·7H2O和7.45克的Na2EDTA，制成鐵鹽母液備用。(三)配制誘導培養(yǎng)基在常用的C17或W14培養(yǎng)基中加入上述制備的馬鈴薯滲提液5-20ml和鐵鹽母液5-15ml，定容為1000ml，調(diào)pH5-6，并進行高壓滅菌處理，配制成本發(fā)明的誘導培養(yǎng)基。(四)接種花藥培養(yǎng)在上述配制的誘導培養(yǎng)基中接種花藥，控制高溫28-30℃誘導時間5天以下，隨后在25℃±2℃避光暗培養(yǎng)50天以內(nèi)，出愈后延長光照時間10-15小時/日。
全文摘要
一種提高小麥花藥培養(yǎng)的綠苗分化比率的方法,本發(fā)明通過在誘導培養(yǎng)基中加入馬鈴薯的滲提液和鐵鹽母液,及改變培養(yǎng)條件,顯著地提高了出愈率、綠苗分化率和綠苗產(chǎn)率,同時降低了白化苗率,為小麥花藥培養(yǎng),創(chuàng)建小麥雙單倍體群體進行細胞遺傳學研究和小麥倍性育種研究開創(chuàng)了新途徑。且減少了能源消耗和降低了成本。
文檔編號A01H1/08GK1212828SQ9812066
公開日1999年4月7日 申請日期1998年10月21日 優(yōu)先權日1998年10月21日
發(fā)明者翁躍進 申請人:翁躍進