專利名稱：含透明質(zhì)酸的角膜保存液的制作方法
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是通過(guò)使用含透明質(zhì)酸的保存液制劑來(lái)改進(jìn)和簡(jiǎn)化在從供者取出到移植之間的時(shí)間里保存用于穿透的角膜移植術(shù)中的角膜的保存方法。
背景技術(shù)：
穿透的角膜移植術(shù)在許多角膜疾病中被廣泛地用于修復(fù)視力。在嚴(yán)重的角膜營(yíng)養(yǎng)不良、炎癥或退化過(guò)程中，穿透的角膜移植術(shù)是得到視力復(fù)原的唯一有效療法。在該療法中的重要問(wèn)題是從供者取出存活的角膜組織的保存方法。
角膜是具有明顯界限的無(wú)血管組織，外周厚度1毫米，中心厚度0.5毫米。暴露于外部環(huán)境部分被成層的、非角朊化的上皮所覆蓋，由3-4層扁平的鱗狀細(xì)胞、1-3層中間上皮細(xì)胞和被粘合復(fù)合物連接于基底膜和在下面的基質(zhì)的單層柱樣的基礎(chǔ)細(xì)胞形成了所述的上皮。在角膜保存期間，會(huì)失去上皮，但若未損及基底膜，通常在移植后能迅速地再上皮化?；|(zhì)位于細(xì)胞外基層的三個(gè)獨(dú)立層中。從上皮開(kāi)始，它們包括角膜前彈性層、中間的薄層基質(zhì)和通常由面對(duì)水狀液面的內(nèi)皮細(xì)胞系產(chǎn)生的基底層(角膜后彈性層)?；|(zhì)的其它部分由基質(zhì)成纖維細(xì)胞(通常稱為角膜細(xì)胞的扁平細(xì)胞)所產(chǎn)生和維持。
由于鹽、膠原質(zhì)和蛋白多糖(proteoglycans)的存在，基質(zhì)對(duì)于眼淚和水狀液都是高滲的。水在上皮面內(nèi)較少，這可能是由于上皮層的干燥緣故。相似的是，葡萄糖在上皮面里也較少，這是因?yàn)樵搧?lái)自水狀液的代謝物被上皮大量使用?；|(zhì)含蛋白多糖(硫酸皮膚素和硫酸角質(zhì)素)前者在上皮面里的濃度較大，后者在內(nèi)皮面里的濃度較大。角膜的內(nèi)皮是單層的、立方形的內(nèi)皮，從前面小室看去，內(nèi)皮在角膜后彈性層膜上形成六邊形圖案。六邊形細(xì)胞被緊密地連接，但它們沒(méi)有在細(xì)胞周圍形成完整的封閉。它們?cè)诩?xì)胞頂部膜里集中。連接完整性視周圍介質(zhì)中Ca2+的存在而定。該結(jié)構(gòu)使水狀液和它的溶質(zhì)能接近外側(cè)細(xì)胞(paracellular)空間。在正常條件下，由于等體積液體被內(nèi)皮的泵復(fù)合物有效地除去，故液體流不會(huì)流到腫脹的角膜處，Na+-K+ATP酶是該泵系統(tǒng)的必不可少部分，因此需要由內(nèi)皮細(xì)胞代謝活性產(chǎn)生的ATP。
為了完整地評(píng)價(jià)內(nèi)皮細(xì)胞的功能，人們很有意思地觀察到這些細(xì)胞在面對(duì)水狀液側(cè)有免疫球蛋白族成員，ICAM-1(細(xì)胞內(nèi)粘附分子-1)，它作為在白細(xì)胞表面上的整聯(lián)蛋白LFA-1(αL,β2)的共受體。ICAM-1也可作為透明質(zhì)酸的受體(McCourt,P.A.G.等，(1994)生物化學(xué)雜志269,30081-30084)。它指出當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞到達(dá)水狀液時(shí)，它們與白細(xì)胞相互作用。該文獻(xiàn)也指出在正常情況下且沒(méi)有白細(xì)胞存在時(shí)，與該受體有關(guān)的透明質(zhì)酸能保存內(nèi)皮層的完整性。
角膜的腫脹當(dāng)內(nèi)皮的泵功能失去時(shí)，基質(zhì)的高滲導(dǎo)致角膜組織腫脹。腫脹使增加了角膜厚度并降低了角膜的透明度。此外，也會(huì)將蛋白多糖從基質(zhì)中失去而到達(dá)周圍介質(zhì)。失去內(nèi)皮功能的結(jié)果是產(chǎn)生病理性的情況(如營(yíng)養(yǎng)不良、退化、青光眼)。年齡增大會(huì)促進(jìn)內(nèi)皮代謝失調(diào)，因?yàn)樵S多內(nèi)皮細(xì)胞隨著年齡增大而減少(從出生到老年約減少50％)。由于內(nèi)皮細(xì)胞的再生能力有限，損傷內(nèi)皮的完整性只能通過(guò)擴(kuò)大剩余細(xì)胞來(lái)補(bǔ)償，這使剩余細(xì)胞變薄。損傷內(nèi)皮也是移植前保存角膜的主要危險(xiǎn)因素。這導(dǎo)致角膜腫脹，失去透明度并有進(jìn)行性的內(nèi)皮細(xì)胞死亡。保存完整的內(nèi)皮層確實(shí)是穿透的角膜移植術(shù)前保存角膜的方法的主要目的。
角膜的保存來(lái)自供者的整個(gè)眼球可保存在4℃下的潮濕室內(nèi)，但必須在24小時(shí)里使用。已經(jīng)成功地發(fā)現(xiàn)了保存冷凍狀態(tài)的角膜(Kaufman,H.E.和Capella J.A.(1968)J.Cryosurg.1,125-129)。在冷凍前，用濃度增加的DMSO和蔗糖處理角膜以防止形成細(xì)胞內(nèi)的冰。困難在于在恒定的低溫下處理和運(yùn)輸冷凍的角膜以防止該技術(shù)滲濾。另一種方法是，角膜被保存在37℃的器官培養(yǎng)介質(zhì)中(DoughmanD.J.等(1976)Trans.Am.Acad.Ophtalmol.Otolaringol.81,778-793)。由于培養(yǎng)介質(zhì)由最理想細(xì)胞保存的血清提供，該方法的缺點(diǎn)是通過(guò)移植時(shí)的角膜使接受者的眼睛暴露于殘留量的血清。動(dòng)物血清會(huì)引起免疫反應(yīng)，而人體血清會(huì)傳染病毒疾病。
目前，角膜保存最常規(guī)的方法是在4℃的無(wú)血清介質(zhì)中短期保存。在該溫度下，內(nèi)皮細(xì)胞的代謝活性最小。這樣，失去了泵功能。
通過(guò)將保留水的化合物加到保存介質(zhì)中來(lái)防止角膜腫脹。在這些化合物中，最常用的是單獨(dú)使用的去腫脹化合物、右旋糖酐(McKarey,B.E.和Kaufman,H.E.(1974)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.13,165)或與葡糖胺聚糖(glucosaminoglycan)硫酸軟骨素結(jié)合使用(Kaufman H.E.等(1991)Arch.Ophthalmol.109,864-868)。但是，硫酸軟骨素由于在聚合物中的硫酸鹽分子的分布變化而是異種化合物(Scott,1995)。結(jié)果，用于角膜保存的組合物各批之間可能有變化。另外，由于硫酸鹽分子，硫酸軟骨素帶有強(qiáng)的負(fù)電荷。
最近研究提示，強(qiáng)負(fù)電荷對(duì)于角膜保存是有害的，因?yàn)閺?qiáng)負(fù)電荷降低了角膜內(nèi)皮的吸附能力(Chen等，1996)。此外，也已報(bào)道硫酸軟骨素會(huì)滲透到角膜里并促進(jìn)腫脹，特別是在移植前從4℃溫?zé)岬绞覝貢r(shí)(Kaufman等，1991)。為了降低由硫酸軟骨素引起的角膜腫脹，人們已配制了含如右旋糖酐的去腫脹劑和硫酸軟骨素合并使用的角膜保存組合物(EP0517972)。但是，在保存時(shí)，右旋糖酐會(huì)滲透到基質(zhì)里，可能在回溫時(shí)增加腫脹壓。另外，現(xiàn)也清楚地知道，右旋糖酐對(duì)角膜有毒性，導(dǎo)致產(chǎn)生衰老和退化(Chen等1996)。
Ogino等(Mokugan Zen-shi,最近開(kāi)發(fā)的角膜保存介質(zhì)對(duì)角膜內(nèi)皮的影響-通過(guò)電子顯微鏡掃描的形態(tài)學(xué)研究，1995)揭示了含透明質(zhì)酸(HA)保存介質(zhì)。但Ogimo等使用的透明質(zhì)酸的分子量為800,000。這樣高分子量的透明質(zhì)酸太粘稠，不宜用來(lái)保存介質(zhì)組份，必須于其它一些保留水的組份結(jié)合使用，在不增加溶液粘度情況下防止角膜腫脹，因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供能給存活的角膜保存提供合適的保存條件，同時(shí)避免現(xiàn)有技術(shù)中液體缺陷的角膜保存液。
發(fā)明詳述本發(fā)明因此涉及含透明質(zhì)酸的角膜液組合物，也涉及含適合在低溫，特別是2-8℃下保存存活角膜的含透明質(zhì)酸制劑的應(yīng)用。本發(fā)明基于上面已討論的角膜的構(gòu)成和功能的下列推論基礎(chǔ)上作出(Ⅰ)在低溫下保存角膜期間，內(nèi)皮細(xì)胞沒(méi)有代謝活性。這樣，不需要營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子(血清或其它物質(zhì))。不進(jìn)行泵功能，故不需要支持物。
(ⅱ)應(yīng)當(dāng)提供足以保持角膜完整性的供有保留水化合物的平衡量的鹽溶液。若單個(gè)保留水的化合物很合適，則其它諸如右旋糖酐的化合物不再是必需的了。
(ⅲ)在內(nèi)皮細(xì)胞上需要保護(hù)膜以防止它們?cè)诒４鏁r(shí)被損傷。與共受體ICAM-1相關(guān)的天然配對(duì)物是合適的。
如上所列，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸是滿足在低溫下最佳保存角膜要求的合適化合物。
透明質(zhì)酸屬于葡糖胺聚糖類，它也包括含硫酸基團(tuán)的化合物(軟骨素、角質(zhì)素和類肝素)。硫酸鹽殘留物變化分布的結(jié)果是，該組葡糖胺聚糖是不同分子異種化合物。相反的是，透明質(zhì)酸僅含二糖類單元N-乙?；咸前泛推咸侨┧帷＿@樣，透明質(zhì)酸是具有確定主要結(jié)構(gòu)的同種化合物含數(shù)百個(gè)二糖類單元和數(shù)百個(gè)固定在每個(gè)鏈上的陰離子(羧酸鹽基團(tuán))的直鏈。
最近，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了透明質(zhì)酸的次級(jí)結(jié)構(gòu)(Scott,J.E.(1995)Eur.J.Rheumatol.Infiamm.15,3-8)。這由糖單元和二糖單元之間180°扭曲得到的兩倍螺旋結(jié)構(gòu)之間的過(guò)量氫鍵所支持。次級(jí)結(jié)構(gòu)在含約8CH單元(短鏈脂肪酸的長(zhǎng)度)的透明質(zhì)酸鏈中得到大量疏水碎片，這能與磷脂膜或其它脂質(zhì)體結(jié)合。確實(shí)，透明質(zhì)酸在炎癥關(guān)鍵中的益處是它與脂質(zhì)體樣炎癥細(xì)胞素，如血小板活化因子結(jié)合的結(jié)果。
在透明質(zhì)酸在水介質(zhì)中的稀釋濃度下(1微克/毫升或更高)，形成了三級(jí)結(jié)構(gòu)(Scott,J.E.等(1991)Biochem.J.274,699-705)。這是由所有的透明質(zhì)酸分子中透明質(zhì)酸鏈聚集建立的動(dòng)態(tài)接觸而形成的蜂窩狀網(wǎng)。該網(wǎng)抓住了內(nèi)部的水和溶質(zhì)，這樣限制了水和溶質(zhì)與外部環(huán)境之間的相互作用。具有透明質(zhì)酸受體的細(xì)胞本身可在其周圍留住大量所述的網(wǎng)狀物。由于化學(xué)品被防止與細(xì)胞接近，故這產(chǎn)生了保護(hù)作用。有意思的是已觀察到該結(jié)構(gòu)變得不是很致密，可被OH游離基的作用所破壞，它導(dǎo)致了透明質(zhì)酸鏈的降解。結(jié)果，與本發(fā)明相關(guān)并用來(lái)保存存活角膜的透明質(zhì)酸的性質(zhì)如下1．在透明質(zhì)酸鏈中存在固定的陰離子，它可作為可溶性的陽(yáng)離子交換劑，因此限制了單價(jià)和二價(jià)陽(yáng)離子朝向角膜組織移動(dòng)。
2．在透明質(zhì)酸鏈的次級(jí)結(jié)構(gòu)中存在疏水碎片使化合物能與可能暴露于細(xì)胞膜中的疏水位點(diǎn)接觸，并保護(hù)所述的疏水位點(diǎn)。
3．由透明質(zhì)酸鏈形成的網(wǎng)狀物將水和溶質(zhì)包封，并產(chǎn)生了最大的保留水效應(yīng)。
4．與在內(nèi)皮細(xì)胞表面上的ICAM-1相互作用保證了在細(xì)胞周圍形成透明質(zhì)酸的保護(hù)膜。
原則上，這些性質(zhì)足以得到低溫下保存內(nèi)皮細(xì)胞并避免角膜腫脹。由于高分子量的透明質(zhì)酸(1,000,000道爾頓或更大)形成了粘稠的溶液，所以應(yīng)當(dāng)使用較低分子量的透明質(zhì)酸。特別是透明質(zhì)酸的平均分子量應(yīng)當(dāng)?shù)陀诩s600,000，較好的是其平均分子量范圍為50,000-250,000道爾頓。最好在50,000到150,000道爾頓范圍里。在該分子大小下，雖然結(jié)構(gòu)變得不那么致密，但仍然可形成透明質(zhì)膠網(wǎng)狀物。
對(duì)于本發(fā)明涵蓋的醫(yī)用溶液，透明質(zhì)酸可由數(shù)個(gè)來(lái)源得到。例如，可從諸如雞冠的常規(guī)的來(lái)源，用EP0 138 572所述方法來(lái)純化透明質(zhì)酸。另一種方法是，通過(guò)WO95/04132所述的發(fā)酵方法或用如WO95/24497所述的含透明質(zhì)酸鹽合成酶的純化蛋白因子來(lái)酶合成透明質(zhì)酸。
制劑實(shí)施例本發(fā)明提出的無(wú)血清醫(yī)用溶液含有1．以磷酸鹽、碳酸氫鹽和Hepes(羥乙基哌嗪乙磺酸)緩沖至pH7.2-7.4的平衡(balanced)電解質(zhì)溶液。對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，最小必需介質(zhì)(如TC199,Gibco BRL出售；Sigma出售；Flow Laboratories出售)是令人滿意的。該介質(zhì)被廣泛地用于組織培養(yǎng)，在其制劑中含有必不可少的無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素和ATP前體。
2．抗生素，如，但不限于，慶大霉素、鏈霉素、青霉素G及其它們的結(jié)合物，以防止微生物污染。
3．透明質(zhì)酸鈉鹽，分子量為50,000-150,000道爾頓，加入量為1-20毫克/毫升、占總?cè)芤旱?.1-2重量/體積％。
可以改變對(duì)鹽緩沖溶液和抗生素的選擇。該簡(jiǎn)單的組合物足以滿足角膜在低溫下保存至少一周的所有要求。
生物評(píng)價(jià)1．材料和方法表Ⅰ列出了含透明質(zhì)酸鈉鹽的無(wú)血清介質(zhì)組合物，并與常規(guī)市售的含硫酸軟骨素和右旋糖酐(Optisol-GS)或單獨(dú)使用右旋糖酐(McKarey-Kaufman)的角膜貯藏介質(zhì)進(jìn)行比較。
在死亡后9-10小時(shí)里取出一對(duì)人體供者的眼睛。從具有2毫米鞏膜邊緣的眼球上分離角膜，并試驗(yàn)內(nèi)皮細(xì)胞的存活性、內(nèi)皮細(xì)胞密度、角膜厚度和透明度。通過(guò)用0.3％錐蟲藍(lán)染色來(lái)評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞的存活性。死亡的細(xì)胞通常有兩種模式相應(yīng)于角膜在取出時(shí)的機(jī)械應(yīng)力產(chǎn)生的折疊的染色細(xì)胞的有規(guī)則排列，及其由內(nèi)皮細(xì)胞新陳代謝機(jī)能障礙標(biāo)志出的彌漫性死亡。這樣完成分析在每次實(shí)驗(yàn)?zāi)?，通過(guò)用茜素紅染色來(lái)評(píng)定細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和未被內(nèi)皮覆蓋的角膜后彈性層的面積。細(xì)胞死亡被表達(dá)為染色細(xì)胞對(duì)于總細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。用10×10毫米2顯微鏡的計(jì)數(shù)線的光學(xué)顯微鏡數(shù)出5塊角膜中心部分的細(xì)胞來(lái)評(píng)定內(nèi)皮細(xì)胞密度。當(dāng)細(xì)胞死亡低于2％，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)大于2000/mm2時(shí)，該角膜被認(rèn)為適合移植用。通過(guò)用帶有數(shù)字微米垂直標(biāo)尺的顯微鏡來(lái)評(píng)定上皮和內(nèi)皮之間的距離來(lái)測(cè)量角膜厚度。每個(gè)角膜進(jìn)行三次中心讀數(shù)。用垂直顯微鏡來(lái)評(píng)定透明度，級(jí)別如下級(jí)別3，優(yōu)秀；級(jí)別2，良好，在角膜后彈性層里有一些不規(guī)則；級(jí)別1，不令人滿意，因?yàn)榻悄ず髲椥詫永锍霈F(xiàn)基質(zhì)水腫或顯著的不規(guī)則。分析后，將角膜浸在4℃下的保存介質(zhì)中進(jìn)行下個(gè)保存試驗(yàn)或用于穿透性角膜移植術(shù)。
體外研究這些試驗(yàn)在由于供者的禁忌征候或疾病而不適合移植的保存很好的捐獻(xiàn)的角膜上進(jìn)行，在死亡后10小時(shí)里取出供者的一對(duì)眼睛。從具有2毫米鞏膜邊緣的眼球上分離出角膜，試驗(yàn)內(nèi)皮細(xì)胞的存活性、內(nèi)皮細(xì)胞的密度、角膜厚度和透明度。通過(guò)用0.3％錐蟲藍(lán)染色來(lái)評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞的存活性。死亡的細(xì)胞通常有兩種模式相應(yīng)于角膜在取出時(shí)的機(jī)械應(yīng)力產(chǎn)生的折疊的染色細(xì)胞的有規(guī)則排列，及其由內(nèi)皮細(xì)胞新陳代謝機(jī)能障礙標(biāo)志出的彌漫性死亡。這樣完成分析在每次實(shí)驗(yàn)?zāi)?，通過(guò)用茜素紅染色來(lái)評(píng)定細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和未被內(nèi)皮覆蓋的角膜后彈性層的面積。細(xì)胞死亡被表達(dá)為染色細(xì)胞對(duì)于總細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。用10×10毫米2顯微鏡的計(jì)數(shù)線的光學(xué)顯微鏡數(shù)出5塊角膜中心部分的細(xì)胞來(lái)評(píng)定內(nèi)皮細(xì)胞密度。
細(xì)胞死亡高于10％和級(jí)別1的透明度被認(rèn)為完全與試驗(yàn)不相配。通過(guò)用帶有數(shù)字微米垂直標(biāo)尺的顯微鏡來(lái)評(píng)定上皮和內(nèi)皮之間的距離來(lái)測(cè)量角膜厚度。每個(gè)角膜進(jìn)行三次中心讀數(shù)。用垂直顯微鏡來(lái)評(píng)定透明度，級(jí)別如下級(jí)別3，優(yōu)秀；級(jí)別2，良好，在角膜后彈性層里有一些不規(guī)則；級(jí)別1，不令人滿意，因?yàn)榻悄ず髲椥詫永锍霈F(xiàn)基質(zhì)水腫或顯著的不規(guī)則。分析后，將角膜保存在10毫升試驗(yàn)介質(zhì)(透明質(zhì)酸鈉鹽、Optisol-GS或McKarey-Kaufman)、4℃下保存7-14天。
臨床研究對(duì)上述評(píng)估過(guò)的、并保存在含透明質(zhì)酸介質(zhì)中的角膜進(jìn)行不受控制的、開(kāi)放性示蹤的研究。保存在Optisol-GS介質(zhì)中的角膜作為對(duì)照。捐獻(xiàn)者的年齡為46-86歲。在死亡后2-9小時(shí)收集他們的角膜，將它們保存在優(yōu)秀的保存條件下以判斷透明度、厚度、內(nèi)皮細(xì)胞存活性(沒(méi)有錐蟲藍(lán)陽(yáng)性細(xì)胞)和密度(2200-3000細(xì)胞/mm2)。在4℃下的保存時(shí)間為25-96小時(shí)(參見(jiàn)表2)。將角膜在移植時(shí)溫?zé)岬绞覝亍？偣灿?6個(gè)接受者，需要對(duì)圓錐形角膜、大泡角膜移植術(shù)、Groenow營(yíng)養(yǎng)不良、獲得性內(nèi)皮營(yíng)養(yǎng)不良和角膜白斑進(jìn)行穿透性角膜移植術(shù)。動(dòng)手術(shù)和手術(shù)后的護(hù)理在所有病例中都相同。記錄移植后兩周內(nèi)再-上皮化的程度、角膜透明度、厚度(用超聲波測(cè)厚機(jī)測(cè)量)和內(nèi)皮細(xì)胞密度(用窺器攝影的固定框架分析來(lái)評(píng)定)。2個(gè)月后進(jìn)一步檢查病人。
2．結(jié)果體外研究將5對(duì)角膜保存在McKarey-Kaufman、Optisol-GS或透明質(zhì)酸鈉鹽介質(zhì)中。在3、7或14天評(píng)定透明度、厚度和內(nèi)皮細(xì)胞的死亡率，結(jié)果如表3所示。Optisol-GS和透明質(zhì)酸介質(zhì)觀察到優(yōu)秀的角膜保存結(jié)果。即使在14天后內(nèi)皮細(xì)胞的損失也不超過(guò)7％。用茜素紅和錐蟲藍(lán)在第7天染色以證實(shí)內(nèi)皮的完整性。相一致的是，也很好地保留了角膜的澄清度和厚度。相反的是，McKarey-Kaufman介質(zhì)的效果較差。在第3天開(kāi)始失去透明度，而厚度在第7天增加到最大值的40％。內(nèi)皮細(xì)胞的損失在14天達(dá)到22-25％。這些結(jié)果表明，右旋糖酐在角膜保存中的作用不良，這表明硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸鈉鹽都有較大的效果。但是，透明質(zhì)酸鈉鹽能在沒(méi)有右旋糖酐下得到令人滿意的角膜保存效果，而Optisol-GS介質(zhì)則需要右旋糖酐。如上所述，右旋糖酐會(huì)滲透到角膜的組織，再溫?zé)釙r(shí)增加腫脹壓。
臨床研究用保存在透明質(zhì)酸介質(zhì)中的角膜對(duì)一組8個(gè)病人進(jìn)行穿透的角膜移植手術(shù)，平行組的8個(gè)病人用保存在Optisol-GS中的角膜進(jìn)行移植。在手術(shù)后3天完成了再-上皮化。兩周后，很好地保存了角膜的透明度和厚度。對(duì)10個(gè)病人進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞密度分析，證實(shí)了兩種介質(zhì)的有效性。所有的移植在兩個(gè)月后都處于良好狀態(tài)，他們有再-上皮化，透明度為3級(jí)(表4)。
結(jié)論總之，我們研究結(jié)果表明透明質(zhì)酸即使保存介質(zhì)中沒(méi)有其它物質(zhì)存在時(shí)也是角膜保存的有效試劑。它的主要優(yōu)點(diǎn)是在保存介質(zhì)中沒(méi)有介入其它物質(zhì)也是有效。這使介質(zhì)組合物簡(jiǎn)單化并降低了成本，避免復(fù)雜的營(yíng)養(yǎng)混合物。此外。沒(méi)有諸如肽或蛋白質(zhì)(生長(zhǎng)因子)的不穩(wěn)定的組份增加了貯存時(shí)介質(zhì)的穩(wěn)定性，并防止形成降解產(chǎn)物。透明質(zhì)酸介質(zhì)的再一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是在手術(shù)過(guò)程中保存薄壁組織。這就能在移植期間正確評(píng)估組織情況并易于處理各種情況。
上面描述了本發(fā)明，很明顯可用許多方法對(duì)相同的發(fā)明進(jìn)行改變。這類改變不被認(rèn)為背離本發(fā)明的精神和范圍，所有在權(quán)利要求書范圍里的這類修飾對(duì)本技術(shù)領(lǐng)域人員是顯而易見(jiàn)的。
表1含透明質(zhì)酸鈉鹽介質(zhì)的特征，與含MK和OPTISOL-GS_介質(zhì)的比較

1含右旋糖酐的McKarey-Kaufman溶液。
表2穿透角膜移植術(shù)-供者特征供者年齡性別死亡原因直到移植時(shí)間的時(shí)間內(nèi)皮密度序號(hào)(歲) 間隔(小時(shí)/分鐘)(細(xì)胞/mm2)1 79 女 心血管疾病4.20 27002 52 女 心血管疾病9.10 26003 61 女腫瘤 3.10 22004 50 男 心血管疾病2.10 28005 86 男腫瘤 2.10 26006 46 女腫瘤 2.00 30007 85 女 心血管疾病5.10 24008 55 女 心血管疾病3.30 2500
表3體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果保存在MK、OPTISOL-GS(OPT)和含透明質(zhì)酸鈉鹽(HA)介質(zhì)中的人體角膜對(duì)分析天數(shù)0、3、7和14

表4穿透角膜移植術(shù)結(jié)果，保存在OPTISOL-GS_或基于透明質(zhì)酸鈉鹽介質(zhì)中的人體角膜對(duì)ND=未測(cè)定

權(quán)利要求
1．一種角膜保存溶液，包含平均分子量低于600,000的透明質(zhì)酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的角膜保存溶液，包括平衡電解質(zhì)溶液和至少一種抗生素。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的溶液，其中所述的透明質(zhì)酸的平均分子量為50,000-250,000Da。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的溶液，其中透明質(zhì)酸的平均分子量為50,000-150,000Da。
5．根據(jù)權(quán)利要求4所述的溶液，其中透明質(zhì)酸鈉鹽的存在濃度為1-20毫克/毫升。
6．根據(jù)權(quán)利要求1-5任一的權(quán)利要求所述的溶液，其中透明質(zhì)酸鈉鹽的存在濃度為0.1-2重量％。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述的溶液，其中余量電解質(zhì)溶液的pH為7.2-7.4。
8．根據(jù)權(quán)利要求7所述的溶液，其中抗生素是至少一種選自慶大霉素、青霉素G和鏈霉素的物質(zhì)。
9．一種保存角膜組織的方法，包括使角膜組織暴露于如權(quán)利要求1-8之任一所述的溶液。
10．根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的醫(yī)用溶液保持在2-8℃溫度下。
11．根據(jù)權(quán)利要求1-8之任一所述的溶液在保存角膜組織中的用途。
12．根據(jù)權(quán)利要求1-8之一所述的溶液在2-8℃溫度下在保存角膜組織中的用途。
全文摘要
一種特別在2－8℃下保存角膜組織的溶液,包括平均分子量低于6,000,000Da(較好的是50,000－250,000Da)的透明質(zhì)酸。
文檔編號(hào)A01N1/02GK1215306SQ97193593
公開(kāi)日1999年4月28日 申請(qǐng)日期1997年4月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月4日
發(fā)明者D·蓬秦 申請(qǐng)人:菲迪安股份公司