專利名稱:一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)林牧植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種植物組織材料離體培養(yǎng)的容器以及使用這種容器培養(yǎng)植物組織材料的方法。
背景技術(shù)：
植物組織培養(yǎng)又稱植物克隆，指通過無菌操作把植物的器官、組織接種于人工配制的含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)等組成的培養(yǎng)基的容器內(nèi)，在人工控制環(huán)境下進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其分化、生長(zhǎng)形成完整植株的過程。植物組織培養(yǎng)為植物的快速繁殖提供了新的手段，接種的外植體可以被誘導(dǎo)形成愈傷組織并產(chǎn)生芽和根，繼代多次后，即可建立無性繁殖系。因此，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，在提高植物繁殖系數(shù)、有效防止種性退化和生產(chǎn)高質(zhì)量的種苗中起到了決定性作用。我國(guó)有許多單位正在進(jìn)行各種植物批量的商品性生產(chǎn)，在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域取得了較大的經(jīng)濟(jì)效益。
目前常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)所采用的容器主要是200ml_250ml玻璃瓶和聚丙烯薄膜袋。利用玻璃瓶的缺點(diǎn)是易破碎、運(yùn)輸困難、存放占用空間大、消毒能耗多、不便清洗等；利用薄膜袋的缺點(diǎn)是接種過程中操作困難，同時(shí)培養(yǎng)袋空間小，不規(guī)則，不透氣，許多植物不適合用薄膜袋培養(yǎng)，一些植物只能在生根階段選擇性使用薄膜袋，另對(duì)一次性薄膜袋消耗量過大時(shí)，也會(huì)造成環(huán)境白色污染潛在隱患。另玻璃瓶和薄膜袋這些容器的容量小，導(dǎo)致手工裝配、滅菌、接種、無菌取材轉(zhuǎn)接、搬運(yùn)、擺放等操作工序繁雜、耗時(shí)多、工效低，如大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，不僅需要大量的人財(cái)物的投入，而且生產(chǎn)效率低下，能耗高，所以開發(fā)一種高效、節(jié)能的新型容器已刻不容緩。越來越多有此設(shè)想的行業(yè)專家認(rèn)為擴(kuò)大培養(yǎng)容器容積是提高組織培養(yǎng)生產(chǎn)效率、降低生產(chǎn)成本的最有效途徑和最直接的方法。
目前國(guó)內(nèi)外設(shè)計(jì)發(fā)明了一些浸沒式、噴霧式等生物反應(yīng)器，有望實(shí)現(xiàn)降低植物組織培養(yǎng)成本、實(shí)現(xiàn)高效率工廠化生產(chǎn)。但它們通常具有較大的體積、不易拆卸和移動(dòng)，還需要附加復(fù)雜的滅菌、液體循環(huán)、光照、氣液流量等測(cè)定和控制設(shè)備，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，單位容積的制造成本和維護(hù)成本很高。此外還有一個(gè)不易克服的缺陷是無法保證反應(yīng)器在具備嚴(yán)格無菌、封閉大環(huán)境條件下進(jìn)行人工接種操作。一些試驗(yàn)表明用這些生物反應(yīng)器培養(yǎng)形態(tài)植物材料容易發(fā)生污染和玻璃化等不正常生長(zhǎng)現(xiàn)象，所以至今尚未發(fā)現(xiàn)在生產(chǎn)上得到應(yīng)用。
擴(kuò)大培養(yǎng)容器容量雖是提高組織培養(yǎng)生產(chǎn)規(guī)模、降低生產(chǎn)成本的有效途徑。然而，實(shí)踐證明當(dāng)容器容積達(dá)到I升以上時(shí)，接種材料的數(shù)量已經(jīng)達(dá)到必須實(shí)現(xiàn)均勻接種才能保證生長(zhǎng)同步性的群體規(guī)模，所以一般考慮只有隨著容積的擴(kuò)大不斷擴(kuò)大接種瓶口的面積，以適應(yīng)手工逐一接種均勻的目的，相關(guān)試驗(yàn)表明，當(dāng)接種口大于SOcm2時(shí)，接種的污染概率將顯著增加并難以克服。所以大幅度擴(kuò)大容器的容積無法克服容積擴(kuò)大與均勻接種和減少污染的矛盾。
中國(guó)發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)?00410090639. X，公開號(hào)CN1771794A) “一種滴管式組織
培養(yǎng)裝置”公開了一種通過滴管式培養(yǎng)液注入和舊培養(yǎng)液的輸出裝置，該裝置是由培養(yǎng)液輸入和輸出系統(tǒng)、無菌培養(yǎng)容器等組成。與一些生物反應(yīng)器培養(yǎng)方式相比造價(jià)成本低廉，可以靜置培養(yǎng)，節(jié)省電力和消耗成本，與現(xiàn)有的玻璃瓶及培養(yǎng)袋相比，擴(kuò)大了培養(yǎng)容器容量，可以有效節(jié)省勞動(dòng)力消耗，可以做到一次性轉(zhuǎn)接直到無菌苗達(dá)到移栽馴化標(biāo)準(zhǔn)，從而有效減少轉(zhuǎn)接次數(shù)。但沒有揭示如何對(duì)裝置進(jìn)行無菌處理，如何做到無菌條件下，將培養(yǎng)材料安全接入容器之中，所以在實(shí)際應(yīng)用中，會(huì)遇到無法克服的瓶頸難題。
中國(guó)實(shí)用新型專利(申請(qǐng)?zhí)?1207630. 9，授權(quán)公開號(hào)CN2466900Y) “一種培養(yǎng)容器”公開了一種相應(yīng)擴(kuò)大了容量的培養(yǎng)容器，包括帶有接種口的容器蓋和容器體組成，具有一個(gè)緊密結(jié)合了接種口蓋的接種口和一個(gè)過濾器的容器蓋，與容器體緊密結(jié)合構(gòu)成的密閉的透明容器。為了保證接種的安全性，發(fā)明者將接種口設(shè)計(jì)為40cm2，如此雖可減少培養(yǎng)材料污染概率，但由于開口較小，限制了容器容積的有效擴(kuò)大和接種的均勻性，同時(shí)也無法根本解決材料污染問題。
理想的植物組織培養(yǎng)容器的要求是具有可滅菌性、隔菌密閉性、接種防止污染性和氣、液體可交換性，根據(jù)具體培養(yǎng)要求還需具有透光、可實(shí)現(xiàn)較低的相對(duì)濕度(在高濕度下容易玻璃化)，堅(jiān)固、易于清洗，便于使用等性能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前各類育苗容器的不足，提供一種植物組織培養(yǎng)工廠化育苗的容器，從根本上簡(jiǎn)化植物組織培養(yǎng)育苗環(huán)節(jié)，提高育苗工作效率，大大降低植物組織培養(yǎng)育苗的污染率和成本。
本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，它是由上、下盤、透氣過濾裝置、密封裝置、鎖定機(jī)構(gòu)、排(進(jìn))液口和培養(yǎng)篩板(9)、支架(8)組成，本設(shè)計(jì)具有一個(gè)緊密結(jié)合的植物組織培養(yǎng)透明容器蓋(I)與容器本體(7)所封閉的內(nèi)部空間即是培養(yǎng)空間，高度為所培養(yǎng)植物材料適宜生長(zhǎng)的高度，一般適宜高度為10cm，在容器高度確定基礎(chǔ)上，可通過增加培養(yǎng)容器的橫斷面來實(shí)現(xiàn)擴(kuò)大容器的容積，但必須確保整個(gè)容器在超凈工作臺(tái)無菌控制范圍之內(nèi)，最佳容器體積外形為長(zhǎng)方體，最佳尺寸長(zhǎng)X寬X高=O. 3mX0. 4mX0. lm。容器蓋(I)與容器本體(7)的密閉首先通過容器蓋(I)與容器本體
(7)的下、上部開口的內(nèi)外周設(shè)有相互吻合的凸緣(2)、凹槽(6)結(jié)合，也是通過其結(jié)合來鎖定容器蓋與本體的水平移動(dòng)。容器蓋(I)或容器本體(7)外翻結(jié)合面裝有壓緊密封圈(3)，與容器本體(7)密封結(jié)合后，用固定夾或卡扣(5)夾持，將容器蓋與容器本體開口外翻強(qiáng)力板(4)緊密聯(lián)接在一起，保障可靠的密封。容器上的殺菌透氣裝置為空心螺栓(14)內(nèi)安裝殺菌纖維團(tuán)和微孔濾膜(15)，空心螺栓(14)與通孔(16)為螺紋(13)連接，對(duì)容器外起到隔離滅菌的作用，對(duì)內(nèi)起到調(diào)節(jié)濕度、交換氣體的作用，確保和促進(jìn)組織的快速健康生長(zhǎng)。培養(yǎng)篩板(9)上有疏松纖維網(wǎng)狀篩孔，對(duì)溶液有浸潤(rùn)、吸附功能，將培養(yǎng)材料植入網(wǎng)狀篩孔中，加入不帶瓊脂的培養(yǎng)液，大大降低了制作培養(yǎng)基的生產(chǎn)成本，同時(shí)結(jié)合組織培養(yǎng)過程中的間斷性的輕柔搖晃容器盤，可防止溶液日久產(chǎn)生沉淀的現(xiàn)象，也可保障了材料與培養(yǎng)液充分接觸及培養(yǎng)液充分高效利用。容器上的透氣螺栓和排、進(jìn)氣孔(11)、(17)的壓緊螺帽(12)均可方便拆卸、安裝和更換。容器蓋開口尺寸略大于頂部、容器本體的開口尺寸大于底部，拆卸下容器上的透氣螺栓和排(進(jìn))液孔的壓緊螺帽(12)，可便于容器蓋與本體可分別摞疊存放，節(jié)省儲(chǔ)存和消毒空間。如將容器從培養(yǎng)架置于超凈工作臺(tái)上，取下底部側(cè)面的排液口(11)壓緊螺帽(12)，傾斜容器，使排液口置于低處，可將容器內(nèi)培養(yǎng)液通過連接的排液管全部排空，旋緊排液口(11)螺帽(12)，打開進(jìn)液口(17)螺帽接上進(jìn)液導(dǎo)管可對(duì)容器進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)液添加，這樣一方面減少了開蓋的次數(shù)，從而也減少了容器內(nèi)組織、材料污染的機(jī)率，同時(shí)通過更換培養(yǎng)基，不轉(zhuǎn)接形體器官，在同一容器中，完成外植體的愈傷、生芽、生根的整個(gè)過程，可保證一次性成苗，大大簡(jiǎn)化了勞動(dòng)程序，提高了生產(chǎn)效率。
本發(fā)明的有益效果和特點(diǎn)是
I、整個(gè)容器滅菌消毒后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)接種并裝配，從根本上可解決擴(kuò)大容器的容積無法克服與均勻接種和減少污染的矛盾，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著地進(jìn)步。
2、充分?jǐn)U大了培養(yǎng)容器容積，可克服玻璃瓶和薄膜袋因容器的容量小，導(dǎo)致手工清洗、裝配、滅菌、接種、無菌取材轉(zhuǎn)接、搬運(yùn)、擺放等繁雜的操作工序和耗時(shí)多的缺陷。
3、加入不帶瓊脂的培養(yǎng)液，可大大降低制作培養(yǎng)基的生產(chǎn)成本。4、容器蓋和容器本體便于拆卸和分別摞疊存放，可節(jié)省儲(chǔ)存和消毒空間。
5、結(jié)合組織培養(yǎng)過程中的間斷性的輕柔搖晃容器，可防止溶液日久產(chǎn)生沉淀的現(xiàn)象，也可保障材料與培養(yǎng)液充分接觸及培養(yǎng)液充分高效利用。
6、通過更換培養(yǎng)基，不轉(zhuǎn)接形體器官，在同一容器中，完成外植體的愈傷、生芽、生根及煉苗的整個(gè)過程，可保證一次性成苗，可簡(jiǎn)化植物組織培養(yǎng)育苗環(huán)節(jié)，大大提高育苗綜合效益。


圖I是本設(shè)計(jì)的剖示圖。
圖2為圖I所示的通孔(16)中安裝的透氣過濾裝置圖。
圖3為圖I所示的排液口(11)或進(jìn)液口(17)中安裝的壓緊螺帽圖。
圖中(I)容器蓋；⑵凸緣；(3)密封圈；(4)外翻強(qiáng)力板；(5)卡扣；(6)凹槽；(7)容器本體；⑶支架；(9)篩板；(10)培養(yǎng)材料；(11)排液口 ；(12)壓緊螺帽；(13)螺紋；
(14)空心螺栓；(15)濾膜；(16)通孔；(17)進(jìn)液口。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明的上述
發(fā)明內(nèi)容
作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，做出各種替換和變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
實(shí)例I
本實(shí)施例為使用一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器及使用其培養(yǎng)植物組織的方法I
分別將容器蓋(I)和容器本體(7)摞疊整齊用包裝袋包裝，配件另裝小袋。配制培養(yǎng)基，均勻攪拌后，裝入專用罐中，然后可將包裝袋和盛有培養(yǎng)基的專用罐同時(shí)或分別放入高溫高壓滅菌鍋消毒，121 °C，O. I O. 15MPa下嚴(yán)格滅菌20min，滅菌后置于人工接種室。用新吉爾滅或75 %酒精仔細(xì)擦拭超凈工作臺(tái)，開啟超凈工作臺(tái)和室內(nèi)紫外燈，殺菌20-30min，再用75%酒精對(duì)試驗(yàn)用具進(jìn)行消毒，打開工作臺(tái)上的接種消毒器，溫度達(dá)到290°C _300°C時(shí)再對(duì)割刀、鑷子和配件消毒2min，放入工具架上冷卻，將無菌處理的外植體縱切為lcm3左右大小，放入燒杯中備用，從包裝袋取出容器本體置于超凈工作臺(tái)上裝好壓緊螺帽(12)、篩板(9)、支架(8)等配件，將罐中培養(yǎng)液緩緩加入容器中，培養(yǎng)液的加入量以剛好浸潤(rùn)整個(gè)篩板為宜。將外植體均勻植入篩板(9)的篩孔中，待外植體植入完畢，從另一包裝袋里取出容器蓋(I)置于超凈工作臺(tái)上，擰緊配帶殺菌透氣裝置的空心螺栓(14)，蓋上容器蓋(I)，下壓蓋面，注意容器蓋與容器本體不能有縫隙，最后壓下固定卡扣(5)，容器每個(gè)側(cè)面至少有一個(gè)卡扣(5)或固定夾。實(shí)現(xiàn)容器蓋(I)與容器本體(7)可靠緊密結(jié)合。將接種、裝配好的容器端入培養(yǎng)室，水平放置在培養(yǎng)架上，在培養(yǎng)溫度為26±2°C，光照10 12h/d，光照強(qiáng)度1500-2500LX，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)期間對(duì)容器進(jìn)行多次搖晃，每周2次。在愈傷、生芽、生根、煉苗等不同階段，需將培養(yǎng)容器端置超凈工作臺(tái)，通過排液口(11)排出原液、通過進(jìn)液口(17)更換相應(yīng)的相應(yīng)培養(yǎng)階段所需培養(yǎng)基，實(shí)現(xiàn)一次性接種培養(yǎng)出完整的植株的過程。
實(shí)例2
本實(shí)施例為使用一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器及使用其培養(yǎng)植物組織的方 法2
在培養(yǎng)基配制車間，配制培養(yǎng)基，均勻攪拌后，加入不帶篩板(9)和支架(8)的容器本體(7)中，培養(yǎng)基加入容量高度為1-1. 5cm，蓋上容器蓋(I)并壓緊，然后水平裝入容器框后，連框放入高溫高壓滅菌鍋消毒，121°C，O. I O. 15MPa下嚴(yán)格滅菌20min，消毒滅菌后將裝有容器的框運(yùn)至人工接種緩沖間冷卻，注意必須保證容器水平狀況，冷卻后推入接種室。用75%酒精仔細(xì)擦拭超凈工作臺(tái)，開啟超凈工作臺(tái)和室內(nèi)紫外燈，殺菌20-30min，再用75%酒精對(duì)試驗(yàn)用具進(jìn)行消毒，打開工作臺(tái)上的接種消毒器，溫度達(dá)到290°C -300°C時(shí)再對(duì)割刀、鑷了消毒2min，放入工具架上冷卻，將無菌處理的外植體縱切成塊狀物，放入燒杯中備用，逐一將容器從框中取出，置于超凈工作臺(tái)上，打開容器蓋(I)，將外植體均勻植入固定培養(yǎng)基中，待外植體植入完畢，蓋上容器蓋(I)，下壓蓋面，注意容器蓋(I)與容器本體(7)不能有縫隙，最后壓下固定卡扣，實(shí)現(xiàn)容器蓋(I)與容器本體(7)可靠緊密結(jié)合。將接種、裝配好的容器端入培養(yǎng)室，水平放置在培養(yǎng)架上，在培養(yǎng)溫度為28±2°C，光照10 12h/d，光照強(qiáng)度2000LX左右，進(jìn)行增殖培養(yǎng)。在愈傷、生芽、生根、煉苗等不同階段，需重復(fù)上述步驟，更換不同階段的培養(yǎng)基，再繼續(xù)培養(yǎng)直至培養(yǎng)出完整的植株。
權(quán)利要求
1.一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，它是由容器蓋(I)、容器本體(7)、透氣過濾裝置、密封裝置、鎖定機(jī)構(gòu)、排、進(jìn)液口和培養(yǎng)篩板(9)、支架(8)組成，其特征在于上盤為容器蓋(I)，下盤為容器本體(7)，容器蓋⑴與容器本體(7)分別具有相互結(jié)合的開口，容器蓋(I)的頂端側(cè)沿橫向設(shè)有1-2個(gè)通孔(16)，通孔(16)處安裝有透氣過濾裝置，容器蓋(I)與容器本體(7)通過密封裝置和鎖定機(jī)構(gòu)聯(lián)接，蓋開口尺寸略大于頂部、本體的開口尺寸大于底部，篩板通過支架(8)固定在容器底部，篩板(9)上有疏松纖維材料組成的篩孔，纖維材料對(duì)培養(yǎng)液有浸潤(rùn)或吸附功能，整個(gè)容器在拆卸摞疊后，滅菌消毒，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行接種和裝配。
2.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，所述的容器外形為長(zhǎng)方體、圓柱體或其它規(guī)則多邊體。
3.根據(jù)權(quán)利要求
I或2所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于容器為耐高溫、高壓透明殼體。
4.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于所述的鎖定機(jī)構(gòu)為容器蓋(I)與容器本體(7)的下、上部開口的內(nèi)外周設(shè)有相互結(jié)合的凸緣(2)、凹槽(6)。
5.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于所述的容器蓋(I)每邊有1-2個(gè)卡扣(5)，卡扣(5)與容器本體(7)開口向外水平翻折強(qiáng)力板(4)結(jié)合后下壓(5)固定夾持。
6.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于所述的密封裝置為容器蓋(I)或容器本體(7)外翻結(jié)合面裝有的壓緊密封圈(3)，與容器本體(7)或容器蓋(I)聯(lián)接后，形成可靠地密封。
7.根據(jù)權(quán)利要求
I或2所述一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于容器底面積為 O. 08-0. 16m2，高度為 8_12cm。
8.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于所述的透氣過濾裝置為空心螺栓(14)內(nèi)依次安裝殺菌纖維和微孔濾膜(15)，空心螺栓(14)與通孔(16)為螺紋(13)連接。
9.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器，其特征在于所述的容器本體的底部一角側(cè)面設(shè)有排液口(11)，上部一角側(cè)面設(shè)有進(jìn)液口(17)，均用壓緊螺帽(12)密封，取出壓緊螺帽可連接外置軟性導(dǎo)液管。
10.一種使用雙盤組合式植物組織培養(yǎng)容器培養(yǎng)植物組織材料的方法，包括以下步驟 (1)消毒所述容器和所需培養(yǎng)基。
(2)開啟超凈工作臺(tái)，在超掙工作臺(tái)上裝配壓緊螺帽(12)、篩板(9)、支架(8)將培養(yǎng)材料植入容器篩板(9)的篩孔中。
(3)通過進(jìn)液管加入所需培養(yǎng)基，安裝空心螺栓(14)，壓實(shí)鎖緊容器蓋，然后將容器水平擺放在培養(yǎng)室培養(yǎng)架上，適宜培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。
(4)整個(gè)培養(yǎng)期過程中，對(duì)容器進(jìn)行間歇性搖晃，3-5天一次。
(5)在愈傷、生芽、增殖、生根等不同培養(yǎng)階段，在超凈工作臺(tái)上將排液管連接到排液口(II)排出原液、將進(jìn)液管連接到進(jìn)液口(17)更換相應(yīng)的培養(yǎng)階段所需培養(yǎng)基，換液完成后，水平擺放回培養(yǎng)室培養(yǎng)架上繼續(xù)培養(yǎng)。·
專利摘要
本設(shè)計(jì)公開了一種雙盤組合式植物組織培養(yǎng)透明容器，它是由上、下盤、透氣過濾裝置、鎖定機(jī)構(gòu)、緊密結(jié)合的密封裝置、排、進(jìn)液口和培養(yǎng)篩板、支架組成。該容器能夠方便地獲得植物培養(yǎng)所必須的無菌、光照、空氣、相對(duì)濕度和營(yíng)養(yǎng)供給等培養(yǎng)條件，容器容量適宜，便于拆卸和存放，既可以克服大型容器裝備成本高、接種容易污染、搬移困難的缺陷，也可以克服傳統(tǒng)小容器生產(chǎn)使用成本高，內(nèi)部空間小、透氣性差、工序繁瑣等的不足。可有效地降低植物組織培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)的成本，從根本上簡(jiǎn)化植物組織培養(yǎng)育苗環(huán)節(jié)，大幅度提高種苗繁育經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A01H4/00GKCN102835310SQ201210194531
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年6月5日
發(fā)明者姜偉 申請(qǐng)人:姜偉導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan