本發(fā)明屬于現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)，具體涉及一種創(chuàng)制金鯧偽雄魚的方法。

背景技術(shù)：

1、性控育種技術(shù)是水產(chǎn)養(yǎng)殖動物遺傳育種的重點研究與應(yīng)用領(lǐng)域。在自然界和養(yǎng)殖條件下，許多水產(chǎn)動物兩性間存在顯著的差異，主要體現(xiàn)在生長和體型差異，性成熟時間差異，體色、花紋差異等，因此魚類性控育種具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。魚類性別包括兩個方面，一是動物決定性別的遺傳基礎(chǔ)，成為遺傳性別；另一種由其生理構(gòu)成所表現(xiàn)出的性別，稱為生理性別。生理性別是魚類性別的外在表現(xiàn)，是遺傳性別和環(huán)境相互作用的結(jié)果。另外，由于魚類性別具有較強的可塑性，可以通過改變環(huán)境因素來影響魚類的生理性別。

2、金鯧，學名卵形鯧鲹（ trachinotus?ovatus），在過去十年內(nèi)養(yǎng)殖產(chǎn)量大幅增長，2023年全國總產(chǎn)量已達29.2萬噸，成為海水養(yǎng)殖第一大產(chǎn)量魚類。海南的金鯧魚卵、魚苗在全國市場中的占有率均超過七成以上，因此海南是我國最重要的金鯧種業(yè)中心。金鯧具備顯著的雌雄生長差異，1齡雌性較雄性個體生長速度快20%以上。因此，培育單性養(yǎng)殖群體不僅可以縮短養(yǎng)殖周期，而減少養(yǎng)殖過程中的分篩環(huán)節(jié)，大大降低養(yǎng)殖管理成本，顯著提升生產(chǎn)效率。要獲得全雌金鯧養(yǎng)殖群體，誘導遺傳雌性的個體逆轉(zhuǎn)為生理雄性的個體是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

3、魚類性別的人工控制方法有種間雜交、人工誘導雌核（雄核）發(fā)育、環(huán)境調(diào)控、基因操作和激素誘導等，各個方法優(yōu)劣如下：

4、（1）種間雜交技術(shù)：將不同物種的魚進行雜交，利用不同物種的性別決定機制或性別比例特性來控制后代的性別。利用自然的生物過程，無需外部化學或物理干預(yù)，可能產(chǎn)生具有特定優(yōu)良性狀的雜種后代，但是成功率低，且受限于親緣關(guān)系和生殖障礙，后代性別比例和生殖能力可能不穩(wěn)定，影響?zhàn)B殖效果；

5、（2）人工誘導雌核（雄核）發(fā)育：利用物理或化學手段誘導卵子或精子的單倍體發(fā)育成個體（如雌核發(fā)育產(chǎn)生全雌后代），可實現(xiàn)全雌或全雄群體的生產(chǎn)，效果顯著，并且可以加速育種過程，快速獲得特定性狀的后代。但是需要嚴格的實驗條件和操作技術(shù)，成本高，且單倍體發(fā)育導致遺傳多樣性下降，個體的存活率和健康狀況較低，影響種群適應(yīng)性；

6、（3）環(huán)境調(diào)控：通過改變環(huán)境條件（如溫度、ph值、光照等）來影響魚類性別分化。該方法無化學藥物殘留，對環(huán)境友好，并且利用自然環(huán)境因素，無需外源性干預(yù)。但是對性別分化的影響較為復(fù)雜，效果不穩(wěn)定，需針對具體魚種進行優(yōu)化，普適性差；

7、（4）基因操作技術(shù)：利用基因編輯技術(shù)（如crispr/cas9）直接修改性別決定基因或調(diào)控基因，改變性別分化過程。在海水魚中還未實現(xiàn)，且在食品生產(chǎn)中的應(yīng)用存在倫理爭議和法規(guī)限制，消費者對基因工程食品的接受度較低。

8、（5）激素誘導法：在魚類發(fā)育的特定階段，通過飼料或注射激素（如甲基睪丸素或雌激素）來改變性別分化方向。該技術(shù)相對簡單，適用于大規(guī)模操作，并且激素成本相對較低，適合水產(chǎn)養(yǎng)殖商業(yè)化應(yīng)用，但是激素誘導法需準確選擇合適的激素，以及精確控制激素劑量和處理時間，否則效果不穩(wěn)定。

9、當前，金鯧偽雄魚的創(chuàng)制及其性別控制技術(shù)和應(yīng)用還未見報道，本領(lǐng)域暫未金鯧性別逆轉(zhuǎn)的方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、目前金鯧是xy還是zw型性別決定系統(tǒng)還不確定，為了獲得生長性狀更優(yōu)的全雌金鯧（遺傳雌性），需要用生理雄性的金鯧（遺傳雌性）與生理雌性的金鯧（遺傳雌性）進行繁育，才能得到全部遺傳雌性的金鯧。因此，創(chuàng)制金鯧偽雄魚成為本領(lǐng)域的關(guān)鍵。

2、本發(fā)明第一方面的目的，在于提供一種創(chuàng)制金鯧偽雄魚的方法。

3、本發(fā)明第二方面的目的，在于提供一種創(chuàng)制金鯧偽雄魚的飼料。

4、本發(fā)明第三方面的目的，在于提供一種創(chuàng)制金鯧偽雄魚的飼料的制備方法。

5、本發(fā)明第四方面的目的，在于提供本發(fā)明第二方面的飼料在提高金鯧養(yǎng)殖效益中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明第五方面的目的，在于提供一種飼養(yǎng)金鯧的方法。

7、本發(fā)明第六方面的目的，在于提供一種鑒定金鯧性別決定類型的方法。

8、為了實現(xiàn)本發(fā)明上述的目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

9、本發(fā)明的第一個方面，提供一種創(chuàng)制金鯧偽雄魚的方法，包括以下步驟：

10、使用α-萘黃酮和17α-甲基睪酮誘導雌性金鯧。

11、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述誘導是指：將α-萘黃酮和17α-甲基睪酮添加至飼料后喂養(yǎng)雌性金鯧；所述雌性金鯧的生理性別扭轉(zhuǎn)為雄性。

12、其中，所述雌性金鯧是指遺傳性別為雌性的金鯧；所述遺傳性別是指由性染色體直接指征的性別；所述生理性別是指由遺傳、環(huán)境（例如溫度）、行為、和生理因素等多條件綜合影響下，表現(xiàn)出特定兩性生理結(jié)構(gòu)的性別。

13、生理性別為雄性的金鯧具體體現(xiàn)為：具有精巢且能夠產(chǎn)生成熟的精子的金鯧。

14、在本發(fā)明中，將這種遺傳性別為雌性，經(jīng)過誘導后生理性別變?yōu)樾坌缘慕瘀K稱為偽雄魚。

15、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述α-萘黃酮在飼料中的含量為180~220mg/kg。

16、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述17α-甲基睪酮在飼料中的含量為80~120mg/kg。

17、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述喂養(yǎng)在雌性金鯧55~65日齡時開始；優(yōu)選地，為58~62日齡。

18、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述喂養(yǎng)的時間為160~200天；優(yōu)選地，為170~190天。

19、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述喂養(yǎng)的方式為飽食喂養(yǎng)；所述飽食喂養(yǎng)一天進行1~3次；優(yōu)選地，為2次。

20、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述飼料根據(jù)金鯧的生長階段發(fā)生變化，具體為：

21、當金鯧處于2~6月齡時，選擇1.0~2.0mm直徑規(guī)格的膨化飼料；

22、當金鯧處于6~8月齡時，選擇5.0~10.0mm直徑規(guī)格的膨化飼料。

23、本發(fā)明的第二個方面，提供一種創(chuàng)制金鯧偽雄魚的飼料，包括α-萘黃酮、17α-甲基睪酮、和金鯧基底飼料。

24、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述α-萘黃酮在飼料中的含量為180~220mg/kg。

25、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述17α-甲基睪酮在飼料中的含量為80~120mg/kg。

26、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述金鯧基底飼料采用商品化飼料，產(chǎn)品標準編號：q/zjhd?01-2023生產(chǎn)許可證編號:粵飼證(2023)15082；粗蛋白質(zhì)≥41%，粗脂肪≥5%，賴氨酸≥2.1%，粗灰分≤18%，粗纖維≤3.5%，水分≤10%。

27、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述金鯧基底飼料采用商業(yè)化金鯧飼料。

28、本發(fā)明的第三個方面，提供本發(fā)明第二個方面用于創(chuàng)制金鯧偽雄魚的飼料的制備方法，包括以下步驟：

29、將α-萘黃酮、17α-甲基睪酮溶解，噴灑在金鯧基底飼料中，混合，晾干。

30、在本發(fā)明的一些實施方式中，為避免α-萘黃酮和17α-甲基睪酮降解影響效果，所述飼料放置在陰涼、避光、通風出晾干，晾干后的飼料置于4℃冰箱中保存。

31、本發(fā)明的第四個方面，提供本發(fā)明第二個方面的誘導金鯧性別扭轉(zhuǎn)的飼料在提高金鯧養(yǎng)殖效益中的應(yīng)用。

32、所述飼料可以將雌性金鯧誘導為生理性別為雄性的金鯧，生理性別為雄性的金鯧具有更快的生長速度，可以縮短養(yǎng)殖周期，減少養(yǎng)殖過程中的分篩環(huán)節(jié)，大大降低養(yǎng)殖管理成本，顯著提升生產(chǎn)效率，從而提高金鯧養(yǎng)殖效益。

33、本發(fā)明的第五個方面，提供一種飼養(yǎng)金鯧的方法。包括以下步驟：

34、在金鯧55~65日齡時開始使用本發(fā)明第二個方面所述的飼料進行飽食投喂，持續(xù)160~200天。

35、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述喂養(yǎng)在雌性金鯧58~62日齡時開始。

36、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述喂養(yǎng)的時間為170~190天。

37、本發(fā)明的第六個方面，提供一種鑒定金鯧性別決定類型的方法，包括創(chuàng)制金鯧偽雄魚的步驟。

38、如果金鯧是xx-xy性別決定系統(tǒng)，則將xx的偽雄魚與正常xx的雌魚進行雜交，獲得全部xx的雌魚；

39、如果金鯧是zz-zw型的性別決定系統(tǒng)，則第一步創(chuàng)制zw型偽雄魚，然后將zw偽雄與正常zw雌魚進行交配，此時將會出現(xiàn)zz、zw、ww三種不同類型的基因型，且比例為zz：zw：ww=1：2：1，從而與xx-xy系統(tǒng)產(chǎn)生區(qū)別，得以鑒定判斷。進一步篩選獲得ww超雌魚，最后將ww超雌魚和正常zz雄魚雜交，獲得全部是zw的雌性后代。

40、本發(fā)明的有益效果是：

41、本發(fā)明提供了一種誘導金鯧性別扭轉(zhuǎn)的方法，將α-萘黃酮和17α-甲基睪酮聯(lián)合使用對金鯧進行誘導。該方法具有如下突出優(yōu)點：

42、1、更加高效

43、本方法采用芳α-萘黃酮和17α-甲基睪酮混用作為誘導激素，相比于其他激素或者α-萘黃酮單獨使用更加有效地抑制雌激素的合成，從而促進性腺雄性化過程，在合適條件下?能夠?qū)崿F(xiàn)60%以上誘導成功率。

44、2、更加安全

45、過高或過低的劑量的激素都會影響性別轉(zhuǎn)化的效果和魚體健康，本方法采用α-萘黃酮濃度為200mg/kg和17α-甲基睪酮為100mg/kg飼料投喂，在8月齡時期金鯧魚體的存活率等未發(fā)現(xiàn)顯著影響，金鯧的健康狀態(tài)并未受到抑制。且只需要第一代用激素處理，后續(xù)可以利用該偽雄魚繁殖后代，不再需要激素處理，后代激素水平正常，沒有安全風險，對水體污染少。

46、3、促進精子發(fā)生

47、在其他魚類中，利用其他激素例如17α-甲基睪酮等可以實現(xiàn)性逆轉(zhuǎn)，但是經(jīng)常會導致精巢萎縮，抑制精子發(fā)生。在本發(fā)明中，利用α-萘黃酮和17α-甲基睪酮混用，選擇合適的劑量，精確把握處理時間，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)金鯧性逆轉(zhuǎn)，并且相較于α-萘黃酮單獨使用，能夠在遺傳雌性的金鯧性腺中成功觀察到更多的精子的出現(xiàn)。

48、本發(fā)明通過選擇α-萘黃酮和17α-甲基睪酮混用為誘導劑、確定優(yōu)化劑量、精確處理時間，并通過性腺中觀察到精子來驗證效果，形成了一套系統(tǒng)的金鯧偽雄魚創(chuàng)制方案。這些關(guān)鍵技術(shù)點相對于現(xiàn)有技術(shù)，不僅提高了性別轉(zhuǎn)化的效率和穩(wěn)定性，保證了魚體生長和健康狀態(tài)，還能進行正常的精子發(fā)生。為后續(xù)金鯧染色體性別決定系統(tǒng)的鑒定以及全雌金鯧品種的創(chuàng)制奠定了基礎(chǔ)，具有重要的科學意義和顯著的應(yīng)用價值。