背景技術(shù)：

1、可結(jié)晶片段(fc)受體是結(jié)合免疫球蛋白(ig)抗體并將ig抗體內(nèi)化到細(xì)胞中的細(xì)胞表面蛋白。內(nèi)化的ig抗體可以再循環(huán)到細(xì)胞表面以重新進(jìn)入循環(huán)或運(yùn)輸?shù)饺苊阁w。被運(yùn)輸至溶酶體的ig抗體被降解成肽，所述肽被加載到主要組織相容性i類(lèi)(mhc-i)和主要組織相容性ii類(lèi)(mhc-ii)蛋白上以在細(xì)胞表面上作為抗原呈遞。這些抗原調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。

2、小鼠具有五種類(lèi)型的fc受體。這些是fcγ受體i(fcγri)、fcγ受體iib(fcγriib)、fcγ受體iii(fcγriii)、fcγ受體iv(fcγriv)和新生兒fc受體(fcrn)(bruhnsp.,blood,2012；119(24)：5640-5649)。fcγri、fcγriii、fcγriv和fcrn激活免疫信號(hào)傳導(dǎo)，并且fcγriib抑制免疫信號(hào)傳導(dǎo)。樹(shù)突細(xì)胞(dc)表達(dá)fcγri、fcγriib、fcγriii和fcγriv；小鼠ly6clo單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞表達(dá)fcγriv；b細(xì)胞表達(dá)fcγriib；并且自然殺傷細(xì)胞和自然殺傷t細(xì)胞表達(dá)fcγriii。在產(chǎn)前期間，嗜中性粒細(xì)胞、脾單核細(xì)胞、b細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和腸中的上皮細(xì)胞表達(dá)fcrn。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開(kāi)的一些方面提供了一種免疫缺陷小鼠，其包含小鼠fcγ受體1無(wú)效(fcgr1null)等位基因和小鼠白細(xì)胞介素-2受體γ無(wú)效(il-2rγnull)等位基因。

2、在一些實(shí)施方式中，小鼠具有非肥胖性糖尿病(nod)遺傳背景(例如，nod/shiltj)。

3、在一些實(shí)施方式中，小鼠對(duì)于il-2rγnull等位基因是純合的，并且對(duì)于fcgr1null等位基因是純合的。

4、在一些實(shí)施方式中，小鼠還包含prkdcscid等位基因。

5、在一些實(shí)施方式中，小鼠對(duì)于prkdcscid等位基因是純合的。

6、在一些實(shí)施方式中，小鼠還包含rag1null等位基因。

7、在一些實(shí)施方式中，小鼠對(duì)于rag1null等位基因是純合的。

8、本公開(kāi)的一些方面提供了一種免疫缺陷小鼠，其包含小鼠fcγ受體1無(wú)效(fcgr1null)等位基因，其中所述小鼠包含nod.cg-prkdcscidil2rgtm1wjl/szj背景。

9、在一些實(shí)施方式中，小鼠缺乏小鼠t細(xì)胞、b細(xì)胞和/或自然殺傷(nk)細(xì)胞。

10、在一些實(shí)施方式中，小鼠中的巨噬細(xì)胞和/或樹(shù)突細(xì)胞功能是缺陷的。

11、在一些實(shí)施方式中，免疫缺陷小鼠移植有人類(lèi)造血干細(xì)胞(hsc)。

12、在一些實(shí)施方式中，免疫缺陷小鼠移植有人類(lèi)外周血單核細(xì)胞(pbmc)。

13、在一些實(shí)施方式中，免疫缺陷小鼠移植有人類(lèi)患病細(xì)胞。

14、在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)患病細(xì)胞是人類(lèi)腫瘤細(xì)胞。

15、在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人類(lèi)癌細(xì)胞。

16、在一些實(shí)施方式中，小鼠fcgr1null等位基因相對(duì)于內(nèi)源未修飾的小鼠fcgr1基因，在外顯子3-6的區(qū)域中包含缺失。在一些實(shí)施方式中，小鼠fcgr1null等位基因包含外顯子3-6的缺失。

17、在一些實(shí)施方式中，免疫缺陷小鼠還包含人類(lèi)il-15轉(zhuǎn)基因。在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)il-15轉(zhuǎn)基因整合到小鼠的基因組中。

18、本公開(kāi)的其他方面提供了一種方法，其包括向本文所述的免疫缺陷小鼠施用抗體。

19、在一些實(shí)施方式中，抗體是單克隆抗體。

20、在一些實(shí)施方式中，抗體是人或人源化抗體。

21、在一些實(shí)施方式中，抗體是igg1、igg2、igg3或igg4抗體。

22、在一些實(shí)施方式中，抗體是免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ici)抗體。在一些實(shí)施方式中，ici抗體選自抗pd-1抗體、抗pd-l1抗體和抗ctla-4抗體。

23、在一些實(shí)施方式中，所述方法還包括測(cè)定來(lái)自小鼠的生物樣品的抗體的治療效果。

24、在一些實(shí)施方式中，治療效果是相對(duì)于對(duì)照，人類(lèi)患病細(xì)胞的生長(zhǎng)降低。

25、在一些實(shí)施方式中，所述方法還包括測(cè)定來(lái)自小鼠的生物樣品的抗體的循環(huán)水平。

26、在一些實(shí)施方式中，抗體的循環(huán)水平相對(duì)于對(duì)照高至少5倍、至少10倍、至少15倍或至少20倍。

27、在一些實(shí)施方式中，測(cè)定是在抗體施用后至少21天、至少28天或至少35天。

28、本公開(kāi)的一些方面提供了一種方法，其包括將人類(lèi)細(xì)胞施用于本文所述的免疫缺陷小鼠。在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)細(xì)胞是hsc。在其他實(shí)施方式中，人類(lèi)細(xì)胞是人類(lèi)pbmc。在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)細(xì)胞是人類(lèi)患病細(xì)胞。在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)患病細(xì)胞是人類(lèi)腫瘤細(xì)胞。在一些實(shí)施方式中，人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人類(lèi)癌細(xì)胞。

29、本公開(kāi)的其他方面提供了一種向?qū)na，其包含seq?id?no:2-5任一個(gè)的序列。

30、本公開(kāi)的再其他方面提供了一種產(chǎn)生本文所述的免疫缺陷小鼠的方法，其包括將一種或多種向?qū)na和cas蛋白引入小鼠胚胎(例如，具有本文所述的任何一種免疫缺陷遺傳背景)中；將小鼠胚胎移植到假孕雌性小鼠中；收集由假孕雌性出生的f1小鼠；和繁殖f1小鼠。

31、在一些實(shí)施方式中，一種或多種向?qū)na結(jié)合小鼠fcgr1基因的外顯子3上游和/或外顯子6下游的區(qū)域，任選地向?qū)na包含seq?id?no:2-5任一個(gè)的序列。

32、在一些實(shí)施方式中，小鼠胚胎是免疫缺陷小鼠胚胎，任選地具有nod遺傳背景，并且任選地包含(a)il-2rγnull等位基因和(b)prkdcscid等位基因或rag1null等位基因中的一個(gè)或多個(gè)。

技術(shù)特征：

1.一種免疫缺陷小鼠，其包含小鼠fcγ受體1無(wú)效(fcgr1null)等位基因和小鼠白細(xì)胞介素-2受體γ無(wú)效(il-2rγnull)等位基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠包含非肥胖性糖尿病(nod)遺傳背景。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠對(duì)于所述il-2rγnull等位基因是純合的，且對(duì)于所述fcgr1null等位基因是純合的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠還包含prkdcscid等位基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠對(duì)于所述prkdcscid等位基因是純合的。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠還包含rag1null等位基因。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠對(duì)于所述rag1null等位基因是純合的。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠缺乏小鼠t細(xì)胞、b細(xì)胞和/或自然殺傷(nk)細(xì)胞。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠中的巨噬細(xì)胞和/或樹(shù)突細(xì)胞功能是缺陷的。

10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其移植有人類(lèi)造血干細(xì)胞(hsc)。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其移植有人類(lèi)外周血單核細(xì)胞(pbmc)。

12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其移植有人類(lèi)患病細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的免疫缺陷小鼠，其中所述人類(lèi)患病細(xì)胞是人類(lèi)腫瘤細(xì)胞。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的免疫缺陷小鼠，其中所述人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人類(lèi)癌細(xì)胞。

15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其中相對(duì)于內(nèi)源未修飾的小鼠fcgr1基因，所述小鼠fcgr1null等位基因在外顯子3-6的區(qū)域中包含缺失。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠fcgr1null等位基因包含外顯子3-6的缺失。

17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其還包含人類(lèi)il-15轉(zhuǎn)基因。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的免疫缺陷小鼠，其中所述人類(lèi)il-15轉(zhuǎn)基因整合到所述小鼠的基因組中。

19.一種方法，其包括向前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠施用抗體。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。

21.根據(jù)權(quán)利要求19或20所述的方法，其中所述抗體是人或人源化抗體。

22.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是igg1、igg2、igg3或igg4抗體。

23.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ici)抗體。

24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述ici抗體選自抗pd-1抗體、抗pd-l1抗體和抗ctla-4抗體。

25.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括測(cè)定來(lái)自所述小鼠的生物樣品的所述抗體的治療效果。

26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述治療效果是相對(duì)于對(duì)照，人類(lèi)患病細(xì)胞的生長(zhǎng)降低。

27.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括測(cè)定來(lái)自所述小鼠的生物樣品的所述抗體的循環(huán)水平。

28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述抗體的循環(huán)水平相對(duì)于對(duì)照高至少5倍、至少10倍、至少15倍或至少20倍。

29.根據(jù)權(quán)利要求25-28中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)定是在所述抗體施用后至少21天、至少28天或至少35天。

30.一種方法，其包括向根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠施用人類(lèi)細(xì)胞。

31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述人類(lèi)細(xì)胞是人類(lèi)造血干細(xì)胞(hsc)。

32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述人類(lèi)細(xì)胞是人類(lèi)外周血單核細(xì)胞(pbmc)。

33.根據(jù)權(quán)利要求30-32中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述人類(lèi)細(xì)胞是人類(lèi)患病細(xì)胞。

34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述人類(lèi)患病細(xì)胞是人類(lèi)腫瘤細(xì)胞。

35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人類(lèi)癌細(xì)胞。

36.一種免疫缺陷小鼠，其包含小鼠fcγ受體1無(wú)效(fcgr1null)等位基因，其中所述小鼠包含nod.cg-prkdcscidil2rgtm1wjl/szj背景。

37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠對(duì)于fcgr1null等位基因是純合的。

38.根據(jù)權(quán)利要求36或37所述的免疫缺陷小鼠，其中相對(duì)于內(nèi)源未修飾的小鼠fcgr1基因，所述小鼠fcgr1null等位基因在外顯子3-6的區(qū)域中包含缺失。

39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的免疫缺陷小鼠，其中所述小鼠fcgr1null等位基因包含外顯子3-5的缺失。

40.根據(jù)權(quán)利要求36-39中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其還包含人類(lèi)il-15轉(zhuǎn)基因。

41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的免疫缺陷小鼠，其中所述人類(lèi)il-15轉(zhuǎn)基因整合到所述小鼠的基因組中。

42.根據(jù)權(quán)利要求36-41中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其移植有人類(lèi)造血干細(xì)胞(hsc)。

43.根據(jù)權(quán)利要求36-41中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其移植有人類(lèi)外周血單核細(xì)胞(pbmc)。

44.根據(jù)權(quán)利要求36-43中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠，其移植有人類(lèi)患病細(xì)胞。

45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的免疫缺陷小鼠，其中所述人類(lèi)患病細(xì)胞是人類(lèi)腫瘤細(xì)胞。

46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的免疫缺陷小鼠，其中所述人類(lèi)腫瘤細(xì)胞是人類(lèi)癌細(xì)胞。

47.一種向?qū)na，其包含seq?id?no:2-5中任一個(gè)的序列。

48.一種產(chǎn)生根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的免疫缺陷小鼠的方法，其包括將一種或多種向?qū)na和cas蛋白引入小鼠胚胎中；將所述小鼠胚胎移植到假孕雌性小鼠中；收集由所述假孕雌性出生的f1小鼠；和繁殖所述f1小鼠。

49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述一種或多種向?qū)na結(jié)合所述小鼠fcgr1基因的外顯子3上游和/或外顯子6下游的區(qū)域，任選地為權(quán)利要求48的向?qū)na。

50.根據(jù)權(quán)利要求48或49所述的方法，其中所述小鼠胚胎是免疫缺陷小鼠胚胎，任選地具有nod遺傳背景，并且任選地包含(a)il-2rγnull等位基因和(b)prkdcscid等位基因或rag1null等位基因中的一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
在一些方面，本公開(kāi)提供了一種免疫缺陷NOD?Fcgr1<supgt;null</supgt;小鼠，其可以用于測(cè)量人IgG抗體藥代動(dòng)力學(xué)和活性、產(chǎn)生人IgG抗體和對(duì)人疾病治療建模。

技術(shù)研發(fā)人員：L·D·舒爾茲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：杰克遜實(shí)驗(yàn)室
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19