本發(fā)明屬植物源材料防控中草藥病害技術領域。尤其涉及黃花蒿秸稈與煙草秸稈混合為原料的黃花蒿煙草醋液抑制三七根腐病原真菌的應用。

背景技術：

黃花蒿(artemisiaannualinn)又叫黃蒿，是菊科蒿屬的一年生草本植物，廣泛分布在國內各省，為中國傳統(tǒng)中草藥，其有效成分青蒿素在抗瘧方面與傳統(tǒng)的奎寧類抗瘧藥物具有不同的作用機理，但是盡管黃花蒿對人類的醫(yī)療健康起到了功不可沒的貢獻，由于其生長繁殖特別迅速，生境適應性強，我國東部、南部省區(qū)生長在路旁、荒地、山坡、林緣等處，其他省區(qū)還生長在草原、森林草原、干河谷、半荒漠及礫質坡地等，也見于鹽漬化的土壤上，往往在春末夏初大量萌發(fā)，進而發(fā)展為優(yōu)勢雜草，為了防控其作為雜草對農(nóng)田、草原或者森林的危害，也需對其潛在的其它利用價值進行研究開發(fā)。

煙葉收獲后，殘留大量的煙稈、煙根等煙株殘體，若不及時清除，很容易污染煙草種植區(qū)環(huán)境。煙草(nicotianatabacum)秸稈木質化程度高，非常難腐解，其資源化利用一直是個難題。近些年煙草主產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)了較為嚴重的焚燒秸稈污染。每到煙草收獲之后,為了處理煙草秸稈，部分地區(qū)燃燒煙草秸稈達到濃煙滾滾的局面,這種處理方式不僅浪費了寶貴的自然資源,造成了環(huán)境污染,也造成了事故多發(fā),對高速公路、鐵路的交通安全及民航航班的起降安全等構成了極大威脅,并對人類健康和安全造成了嚴重危害,已成為一大社會問題。為了解決人類資源、環(huán)境和發(fā)展之間的關系問題,高效合理地利用煙草秸稈，對其潛在的利用價值進行研究開發(fā)，也是降低其負面影響的重要措施。

中藥是中國傳統(tǒng)的藥材，是中國優(yōu)秀文化的重要組成部分。中草藥屬于中藥材的最重要的部分，由于多數(shù)中草藥的經(jīng)濟部位和藥用部位是中草藥的根部，隨著藥用植物種植面積的迅速增加，以及大多品種的野生資源的馴化為栽培品種的規(guī)?；N植，根部腐爛演變成為直接影響藥材產(chǎn)量、品質及商品價值的最嚴重病害，極大的影響中草藥的價值。再者中草藥病害問題日益突出，由于土壤中的微生物組成非常復雜，故病原涉及種類很多，真菌、細菌、線蟲均可引起中草藥根部腐爛，其中真菌危害最為嚴重，可引起多種中草藥根部腐爛，如尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)能引起枸杞、竹節(jié)參、玉竹、丹參、三七等中草藥根部腐爛，是危害性最大的病原之一。三七根腐病常年發(fā)病率為5％～20％，嚴重時則達70％，白芷根腐病發(fā)病率為30％左右，有時也達80％。為了控制其病害加大了化學農(nóng)藥的過度使用，進而加劇了中草藥品質合格的風險性和對環(huán)境的友好性，這已成為中藥材生產(chǎn)的主要障礙。

經(jīng)文獻檢索，未見與本發(fā)明相同的公開報道。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術中還沒有黃花蒿煙草醋液抑制中草藥根腐病原的缺陷，使煙草秸稈和黃花蒿秸稈得到更多的利用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案如下：

1.黃花蒿煙草醋液抑制三七根腐病原真菌的應用。

2.根據(jù)技術方案1所述的應用，所述黃花蒿煙草醋液是通過將黃花蒿秸稈和煙草秸稈混合后按照植物醋液的常規(guī)制備方法制備得到的醋液。

3.根據(jù)技術方案2所述的應用，所述將黃花蒿秸稈和煙草秸稈混合為按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為1～2:1～2的比例混合。

4.根據(jù)技術方案3所述的應用，所述將黃花蒿秸稈和煙草秸稈混合為按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為1:1的比例混合。

5.根據(jù)技術方案3所述的應用，所述將黃花蒿秸稈和煙草秸稈混合為按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為2:1的比例混合。

6.根據(jù)技術方案1至5中任一技術方案所述的應用，所述的三七根腐病原真菌為尖孢鐮刀菌。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明首次利用黃花蒿煙草醋液抑制三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌。在其應用中，黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液至100倍液時，對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率達到79.17％～100％，而黃花蒿秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率為44.44％～47.22％，煙草秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率為37.50％～41.67％，本發(fā)明用黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液至100倍液時，比黃花蒿秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率提高78.15％～111.77％，比煙草秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率提高111.12％～139.98％。

在本發(fā)明應用中黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1的黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液至100倍對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率為100％～98.61％，在黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1的黃花蒿煙草醋液稀釋100倍時，對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌的抑制率為98.6％，而用黃花蒿秸稈單劑醋液稀釋100倍或煙草秸稈單劑醋液稀釋100倍時分別對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌的抑制率為44.44％、37.5％，本發(fā)明用黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1的黃花蒿煙草醋液100倍液對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌的抑制率比黃花蒿秸稈單劑醋100倍液或煙草秸稈單劑醋100倍液對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌的抑制率分別提高了121.89％、162.96％。

附圖說明

圖1：制備黃花蒿煙草醋液的設備示意圖。

圖中各標記依次表示：1—干餾釜；2—加熱器；3—排氣閥門；4—導氣管閥門；5—冷凝管進氣導管；6—冷凝管；7—冷凝管出水口；8—圓底三口燒瓶的排氣導管；9—圓底三口燒瓶；10—圓底燒瓶；11-冷凝水槽出水口；12—制冷水閥門；13—冷凝管進水管；14—冷凝水槽；15—圓底三口燒瓶的入液口；16—溫度計。

具體實施方式

以下實施例無特殊說明為常規(guī)方法。

實施例1黃花蒿煙草醋液的制備

一、采用制備醋液的常規(guī)設備及植物醋液的常規(guī)制備方法制備黃花蒿煙草醋液，黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比分別為1:1或2:1或1:2的比例混合的秸稈制備黃花蒿煙草醋液均按如下步驟進行：

a.將黃花蒿秸稈和煙草秸稈分別切成小段(可切成5cm-8cm的小段)，按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為1:1或2:1或1:2的比例，將黃花蒿秸稈小段和煙草秸稈小段混合后裝入干餾釜1中；

b.加好干餾釜1上的密封圈，安裝好干餾釜1的蓋子，擰緊其螺栓；

c.打開干餾釜1上的排氣閥門3；

d.打開加熱器2，對干餾釜1進行加熱；

e.在溫度計16達到90℃-100℃時，關閉排氣閥門3；

f.打開制冷水閥門12，打開干餾釜1上的導氣管閥門4；

g.控制加熱器2的熱度，常壓下，利用溫度計16測量干餾釜1的溫度，冷凝收取90℃～300℃所有餾分；

h.關閉干餾釜1上的導氣管閥門4，打開排氣閥門3，關閉加熱器2；

i.關閉制冷水閥門12，取下圓底三口燒瓶9，圓底三口燒瓶9收集的液體(即醋液)為所述的黃花蒿煙草醋液，將其置于棕色瓶中保留。黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比分別為1:1或2:1或1:2的比例混合分別得到三種醋液：黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為1:1的黃花蒿煙草醋液，黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1的黃花蒿煙草醋液，黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為1：2黃花蒿煙草醋液。

實施例2黃花蒿煙草醋液抑制三七根腐病原真菌的應用實驗

實施例2中所用的三七根腐病原真菌為尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)，其分離鑒定培養(yǎng)方法參考[方中達主編.植病研究方法(第三版).2004,北京：中國農(nóng)業(yè)出版社；cbooth.thegenusfusarium.commonwealthagricultura,1971；魏景超.真菌鑒定手冊.上海:上海科學技術出版社,1979]。

處理1、處理2和處理3均是用所述的黃花蒿煙草醋液進行實驗，

處理1、處理2和處理3所不同的是：

處理1：所用的黃花蒿煙草醋液是將黃花蒿秸稈小段和煙草秸稈小段按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為1:1的比例混合后裝入干餾釜1，然后按實施例1所述的黃花蒿煙草醋液的制備方法制備得到的黃花蒿煙草醋液。

處理2：所用的黃花蒿煙草煙霧是將黃花蒿秸稈小段和煙草秸稈小段按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為2:1的比例混合后裝入干餾釜1，然后按實施例1所述的黃花蒿煙草醋液的制備方法制備得到的黃花蒿煙草醋液。

處理3：所用的黃花蒿煙草醋液是將黃花蒿秸稈小段和煙草秸稈小段按黃花蒿秸稈：煙草秸稈的質量比為1:2的比例混合后裝入干餾釜1，然后按實施例1所述的黃花蒿煙草醋液的制備方法制備得到的黃花蒿煙草醋液。

處理4：只用黃花蒿秸稈單劑醋液進行實驗。

處理5：只用煙草秸稈單劑醋液進行實驗。

處理4中黃花蒿秸稈單劑醋液的制備方法除實施例1中步驟a.裝入干餾釜1的秸稈只是黃花蒿秸稈外，其余操作與實施例1所述的黃花蒿煙草醋液的制備方法相同。

處理5中煙草秸稈單劑醋液的制備方法除實施例1中步驟a.裝入干餾釜1的秸稈只是煙草秸稈外，其余操作與實施例1所述的黃花蒿煙草醋液的制備方法相同。

處理1、處理2、處理3、處理4和處理5除如上所述所用的醋液不同外，均按如下方法進行實驗操作：

利用上述方法制備獲得的醋液，按照如下醋液與pda培養(yǎng)基的質量比，分別配制醋液稀釋倍數(shù)為25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液的含醋液的pda培養(yǎng)基，即醋液：pda培養(yǎng)基的質量比＝1：24，醋液：pda培養(yǎng)基的質量比＝1：49，醋液：pda培養(yǎng)基的質量比＝1：74，醋液：pda培養(yǎng)基的質量比＝1：99，醋液：pda培養(yǎng)基的質量比＝1：149，醋液：pda培養(yǎng)基的質量比＝1：199。每一種醋液制備上述25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液的6個不同醋液稀釋倍數(shù)的含醋液的pda培養(yǎng)基，分別各裝入一個培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿裝入10毫升的含醋液的pda培養(yǎng)基。

在無菌條件下，用同一型號的打孔器(0.5cm，滅菌處理)在培養(yǎng)純化鑒定的尖孢鐮刀菌的菌落邊緣打孔，用解剖刀分別挑取用打孔器打孔的菌落大小一致，活性一致的尖孢鐮刀菌菌落，轉接到上述裝有含醋液的pda培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿轉接1個尖孢鐮刀菌菌落，蓋上培養(yǎng)皿蓋，放于培養(yǎng)箱培養(yǎng)5天，測量記錄菌落生長直徑，計算抑制效果。

處理6是空白對照實驗。處理6：在無菌條件下，按上述方法轉接1個尖孢鐮刀菌菌落到只盛有10毫升pda培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，蓋上培養(yǎng)皿蓋，直接放于培養(yǎng)箱培養(yǎng)5天，測量記錄菌落生長直徑。

每個處理作3次重復。

試驗結果：不同稀釋濃度的醋液對尖孢鐮刀菌均有抑制效果，但隨著稀釋倍數(shù)的增加，抑制效果減小。在同一稀釋倍數(shù)下，黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1時的黃花蒿煙草醋液抑制效果最好。

實施例2的實驗結果詳見表1。

表1黃花蒿煙草醋液抑制三七根腐病原真菌效果比較(菌落直徑cm)

尖孢鐮刀菌抑制率計算公式：

尖孢鐮刀菌抑制率＝[︱處理的菌落直徑-未處理的菌落直徑︱/未處理的菌落直徑]x100％。

表1表明：

處理1：黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為1：1的黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液對尖孢鐮刀菌抑制率分別為88.89％、88.89％、87.5％、83.33％、83.33％、81.94％。

處理2：黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1的黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液對尖孢鐮刀菌抑制率分別為100％、100％、98.61％、98.61％、97.22％、97.22％。

處理3：黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為1：2的黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液對尖孢鐮刀菌抑制率分別為86.11％、86.11％、86.11％、79.17％、75.00％、72.22％。

處理4：黃花蒿秸稈單劑醋液稀釋25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液對尖孢鐮刀菌抑制率分別為47.22％、47.22％、47.22％、44.44％、44.44％、37.50％。

處理5：煙草秸稈單劑醋液稀釋25倍液，50倍液，75倍液，100倍液，150倍液和200倍液對尖孢鐮刀菌抑制率分別為41.67％、41.67％、41.67％、37.50％、26.39％、23.61％。

黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液至100倍液時，對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率達到79.17％～100％，而黃花蒿秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率為44.44％～47.22％，黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液至100倍液時，比黃花蒿秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率提高78.15％～111.77％。而煙草秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率為37.50％～41.67％，黃花蒿煙草醋液稀釋25倍液至100倍液時，比煙草秸稈單劑醋液稀釋25倍液至100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率提高111.12％～139.98％。

黃花蒿秸稈：煙草秸稈質量比為2：1的黃花蒿煙草醋液對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率效果最好，對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率效果達到98.61％～100％，其稀釋100倍液時，對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率效果達到98.61％，而用黃花蒿秸稈單劑醋液100倍液或煙草秸稈單劑醋液100倍液分別對三七根腐病原真菌尖孢鐮刀菌抑制率為44.44％、37.5％，比黃花蒿秸稈單劑醋液100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率提高121.89％；比煙草秸稈單劑醋液100倍液對尖孢鐮刀菌抑制率提高162.96％。