本發(fā)明涉及倒地鈴的繁育
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說是一種倒地鈴的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
：倒地鈴亦稱心豆藤或白心籽，還有假苦瓜、風(fēng)船葛、帶藤苦楝、燈籠草的別名，無患子科多年生木質(zhì)藤本植物，是一種中藥材，具有清熱、利尿、涼血、去瘀、解毒之效，能治肺炎、黃疸、糖尿病、淋病、疔瘡、風(fēng)濕、跌打損傷、蛇咬傷等，同時(shí)也是一種常見的觀賞植物。倒地鈴花為白色，果膨大近球形，種子黑色，有心形的白斑。倒地鈴?fù)ǔＪ亲鳛橐荒晟参?，由種子播種繁育而成，但是傳統(tǒng)的播種繁殖法的出芽率和成苗率都不高，阻礙了倒地鈴的快速規(guī)?；敝?，因此迫切需要一種能夠?qū)崿F(xiàn)倒地鈴種子快速繁育的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還有一個目的是提供一種倒地鈴的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。其通過外植體處理、外植體培養(yǎng)、繁殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗與移栽，提高倒地鈴的成苗率，能實(shí)現(xiàn)倒地鈴的快速繁殖，實(shí)現(xiàn)倒地鈴的規(guī)模化繁育。為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種倒地鈴的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：s1、外植體處理：取倒地鈴種子作為外植體，先用羽衣草浸提液浸泡10～15min，然后用蒸餾水沖洗5～10min，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％～5％次氯酸鈉溶液浸泡10～15min，再用無菌水沖洗15～20min，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到處理后的外植體；其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份數(shù)組分制成：新鮮羽衣草50～60份、新鮮接骨木葉片10～15份、新鮮紅蘭花8～10份、乙醇10～15份以及無菌水300～500份；將上述重量份數(shù)的新鮮羽衣草、新鮮接骨木葉片、新鮮紅蘭花搗爛，然后加入上述重量份數(shù)的乙醇和無菌水，于30～50khz頻率下超聲20～25min，超聲溫度控制在30～35℃，然后過濾除去濾渣，取濾液離心處理，再取上層清液，即制得所述羽衣草浸提液；s2、外植體培養(yǎng)：將s1中處理后的外植體接種到ms外植體培養(yǎng)基中，在溫度為25～28℃、光照強(qiáng)度為800～1000lux、光照時(shí)間為8～10h/天的條件下培養(yǎng)20～25天，外植體發(fā)芽后得到無菌試管苗；其中，所述ms外植體培養(yǎng)基含有ms、0.3～0.6mg/l的細(xì)胞分裂素、0.3～0.5mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.1～0.2mg/l維生素c、0.2～0.3mg/l?；撬帷?8g/l蔗糖以及5.6g/l的瓊脂，ph值控制在5.6～6.0；s3、繁殖培養(yǎng)：將s2中得到的無菌試管苗剪切后置于ms繁殖培養(yǎng)基中，在溫度為22～28℃、光照強(qiáng)度為1000～1200lux、光照時(shí)間為9～11h/天的條件下培養(yǎng)25～30天得到試管苗叢生芽；其中，所述ms繁殖培養(yǎng)基中含有ms、0.4～0.8mg/l的細(xì)胞分裂素、0.4～0.6mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.2～0.3mg/l維生素c、0.3～0.4mg/l?；撬?、35g/l蔗糖和5.8g/l的瓊脂，ph值控制在5.6～6.0；s4、壯苗培養(yǎng)：將s3中得到的試管苗叢生芽置于ms壯苗培養(yǎng)基中，在溫度為25～30℃、光照強(qiáng)度為1200～1500lux，光照時(shí)間為10～12h/天的條件下培養(yǎng)20～25天，得到壯苗后的叢生芽；其中，所述ms壯苗培養(yǎng)基含有ms、0.01～0.02mg/l的細(xì)胞生長素、0.5～0.8mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、1.5～2mg/l活性炭、3.5～4.5mg/l卡那霉素、30g/l蔗糖和6.2g/l的瓊脂，ph值控制在5.6～6.0；s5、生根培養(yǎng)：將s4中得到的壯苗后的叢生芽置于ms生根培養(yǎng)基中，在溫度為20～30℃、光照強(qiáng)度為1300～1600lux、光照時(shí)間為12～14h/天的條件下培養(yǎng)25～35天，得到帶根的完整植株；其中，所述ms生根培養(yǎng)基含有ms、0.02～0.03mg/l的細(xì)胞生長素、0.6～1.0mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、2～2.5mg/l活性炭、4.5～5.5mg/l卡那霉素、28g/l蔗糖和6.4g/l的瓊脂，ph值控制在5.6～6.0；s6、煉苗與移栽：將s5中得到的帶根的完整植株，在溫度為18～25℃、自然通風(fēng)的室內(nèi)煉苗5～7天至植株表面角質(zhì)形成后將苗取出，立即移栽到育苗基質(zhì)中，在育苗基質(zhì)繼續(xù)生長25～35天后移栽到田地中；其中，所述育苗基質(zhì)包括以下重量份數(shù)的組分：腐熟鋸末10～15份、腐熟蔗渣8～10份、腐熟菇渣5～8份、腐熟雞糞4～6份、蚯蚓糞1～3份、黑土20～30份、珍珠巖5～8份、草炭5～8份、硝酸鈣1～2份、硝酸鎂0.5～0.8份、磷酸二氫鉀1～2份以及菌肥0.2～0.5份。優(yōu)選的是，s2、s3中的細(xì)胞分裂素均為玉米素、n6-異戊烯基腺嘌呤、四氫吡喃芐基腺嘌呤中的任意一種。優(yōu)選的是，s4、s5中的細(xì)胞生長素均為萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸中的任意一種。優(yōu)選的是，s4中ms壯苗培養(yǎng)基中還添加有托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉，每升ms壯苗培養(yǎng)基中托瑪琳石粉添加量為3.8～4.2g、遠(yuǎn)紅外陶瓷粉添加量為2.8～3.4g；所述托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉在添加前需100～120℃溫度下烘烤30～40min，然后冷卻至室溫，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的高錳酸鉀溶液浸泡1～1.5h，然后用無菌水沖洗5～10min后進(jìn)行烘干處理，得到上述添加量的托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉。優(yōu)選的是，s6中珍珠巖粒徑大小為2～4mm。優(yōu)選的是，s6中菌肥中包括有質(zhì)量比為1.6:0.8:0.9:1.2的枯草芽孢桿菌、固氮菌、硅酸鹽菌、木霉菌。本發(fā)明的至少包括以下有益效果：第一、將新鮮羽衣草、新鮮接骨木葉片、新鮮紅蘭花通過乙醇和無菌水進(jìn)行浸提，得到羽衣草浸提液，用其浸泡外植體，能抑制外植體內(nèi)酪氨酸酶的活性，又能抑制多巴色素互變，還有與過氧化物歧化酶相似的清除氧自由基的功效，同時(shí)具有抗菌消炎的作用，然后再用次氯酸鈉消毒，能有效降低外植體培育出的組培苗出現(xiàn)褐化的概率；第二、在外植體培養(yǎng)、繁殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)以及生根培養(yǎng)的過程中，根據(jù)培養(yǎng)階段的不同，逐漸加強(qiáng)光照強(qiáng)度和光照時(shí)間，能使組培苗得到更適宜的光照生長條件，增強(qiáng)組培苗的抗病性和抗逆性，為移栽后的健康生長奠定基礎(chǔ)；第三、在ms外植體培養(yǎng)基和ms繁殖培養(yǎng)基中加入有l(wèi)-硒甲基硒代半胱氨酸、維生素c和牛磺酸，它們之間具有相互協(xié)同的作用，能促進(jìn)苗株體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)清除有害自由基；同時(shí)控制ms外植體培養(yǎng)基和ms繁殖培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素、蔗糖和瓊脂的含量，能有效防止組培苗出現(xiàn)玻璃化的情況；第四、在ms壯苗培養(yǎng)基和ms生根培養(yǎng)基中加入l-硒甲基硒代半胱氨酸、活性炭、和卡那霉素能有效降低組培苗出現(xiàn)褐化的概率，同時(shí)防止其它病變發(fā)生；同時(shí)控制ms壯苗培養(yǎng)基和ms生根培養(yǎng)基中細(xì)胞生長素、蔗糖和瓊脂的含量，能有效防止組培苗出現(xiàn)玻璃化的情況；第五、托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉在添加前需100～120℃溫度下烘烤30～40min，烘烤能將其有效活化，然后經(jīng)消毒后加入ms壯苗培養(yǎng)基中；托瑪琳石粉能發(fā)射對苗株有益的遠(yuǎn)紅外線，促進(jìn)苗株的新陳代謝和生長；遠(yuǎn)紅外陶瓷粉能夠輻射出比正常物體更多的遠(yuǎn)紅外線，在光照射下，能激活了苗株內(nèi)生物大分子的活性，使生物體的分子能夠被激發(fā)而處于較高振動狀態(tài)，這樣激活了核酸蛋白質(zhì)等生物大水分子的活性，從而發(fā)揮了生物大分子調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、免疫等活動的功能；托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉具有相互協(xié)同的作用，增強(qiáng)了組織營養(yǎng)、活躍了組織代謝、提高了細(xì)胞供氧量，達(dá)到防病治病的目的，也能改善苗株體內(nèi)的微循環(huán)，使組培苗茁壯成長。本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參閱本說明書后能夠據(jù)以實(shí)施。<實(shí)施例1>一種倒地鈴的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：s1、外植體處理：取倒地鈴種子作為外植體，先用羽衣草浸提液浸泡10min，然后用蒸餾水沖洗5min，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％次氯酸鈉溶液浸泡10min，再用無菌水沖洗15min，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到處理后的外植體；其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份數(shù)組分制成：新鮮羽衣草50份、新鮮接骨木葉片10份、新鮮紅蘭花8份、乙醇10份以及無菌水300份；將上述重量份數(shù)的新鮮羽衣草、新鮮接骨木葉片、新鮮紅蘭花搗爛，然后加入上述重量份數(shù)的乙醇和無菌水，于30khz頻率下超聲20min，超聲溫度控制在30℃，然后過濾除去濾渣，取濾液離心處理，再取上層清液，即制得所述羽衣草浸提液；s2、外植體培養(yǎng)：將s1中處理后的外植體接種到ms外植體培養(yǎng)基中，在溫度為25℃、光照強(qiáng)度為800lux、光照時(shí)間為8h/天的條件下培養(yǎng)20天，外植體發(fā)芽后得到無菌試管苗；其中，所述ms外植體培養(yǎng)基含有ms、0.3mg/l的玉米素、0.3mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.1mg/l維生素c、0.2mg/l?；撬?、38g/l蔗糖以及5.6g/l的瓊脂，ph值控制在5.6；s3、繁殖培養(yǎng)：將s2中得到的無菌試管苗剪切后置于ms繁殖培養(yǎng)基中，在溫度為22℃、光照強(qiáng)度為1000lux、光照時(shí)間為9h/天的條件下培養(yǎng)25天得到試管苗叢生芽；其中，所述ms繁殖培養(yǎng)基中含有ms、0.4mg/l的玉米素、0.4mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.2mg/l維生素c、0.3mg/l牛磺酸、35g/l蔗糖和5.8g/l的瓊脂，ph值控制在5.6；s4、壯苗培養(yǎng)：將s3中得到的試管苗叢生芽置于ms壯苗培養(yǎng)基中，在溫度為25℃、光照強(qiáng)度為1200lux，光照時(shí)間為10h/天的條件下培養(yǎng)20天，得到壯苗后的叢生芽；其中，所述ms壯苗培養(yǎng)基含有ms、0.01mg/l的萘乙酸、0.5mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、1.5mg/l活性炭、3.5mg/l卡那霉素、30g/l蔗糖和6.2g/l的瓊脂，ph值控制在5.6；所述ms壯苗培養(yǎng)基中還添加有托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉，每升ms壯苗培養(yǎng)基中托瑪琳石粉添加量為3.8g、遠(yuǎn)紅外陶瓷粉添加量為2.8g；所述托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉在添加前需100℃溫度下烘烤30min，然后冷卻至室溫，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的高錳酸鉀溶液浸泡1h，然后用無菌水沖洗5min后進(jìn)行烘干處理，得到上述添加量的托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉；s5、生根培養(yǎng)：將s4中得到的壯苗后的叢生芽置于ms生根培養(yǎng)基中，在溫度為20℃、光照強(qiáng)度為1300lux、光照時(shí)間為12h/天的條件下培養(yǎng)25天，得到帶根的完整植株；其中，所述ms生根培養(yǎng)基含有ms、0.02mg/l的萘乙酸、0.6mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、2mg/l活性炭、4.5mg/l卡那霉素、28g/l蔗糖和6.4g/l的瓊脂，ph值控制在5.6；s6、煉苗與移栽：將s5中得到的帶根的完整植株，在溫度為18℃、自然通風(fēng)的室內(nèi)煉苗5天至植株表面角質(zhì)形成后將苗取出，立即移栽到育苗基質(zhì)中，在育苗基質(zhì)繼續(xù)生長25天后移栽到田地中；其中，所述育苗基質(zhì)包括以下重量份數(shù)的組分：腐熟鋸末10份、腐熟蔗渣8份、腐熟菇渣5份、腐熟雞糞4份、蚯蚓糞1份、黑土20份、珍珠巖5份、草炭5份、硝酸鈣1份、硝酸鎂0.5份、磷酸二氫鉀1份以及菌肥0.2份；所述珍珠巖粒徑大小為2mm；所述菌肥中包括有質(zhì)量比為1.6:0.8:0.9:1.2的枯草芽孢桿菌、固氮菌、硅酸鹽菌、木霉菌。<實(shí)施例2>一種倒地鈴的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：s1、外植體處理：取倒地鈴種子作為外植體，先用羽衣草浸提液浸泡15min，然后用蒸餾水沖洗10min，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％次氯酸鈉溶液浸泡15min，再用無菌水沖洗20min，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到處理后的外植體；其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份數(shù)組分制成：新鮮羽衣草60份、新鮮接骨木葉片15份、新鮮紅蘭花10份、乙醇15份以及無菌水500份；將上述重量份數(shù)的新鮮羽衣草、新鮮接骨木葉片、新鮮紅蘭花搗爛，然后加入上述重量份數(shù)的乙醇和無菌水，于50khz頻率下超聲25min，超聲溫度控制在35℃，然后過濾除去濾渣，取濾液離心處理，再取上層清液，即制得所述羽衣草浸提液；s2、外植體培養(yǎng)：將s1中處理后的外植體接種到ms外植體培養(yǎng)基中，在溫度為28℃、光照強(qiáng)度為1000lux、光照時(shí)間為10h/天的條件下培養(yǎng)25天，外植體發(fā)芽后得到無菌試管苗；其中，所述ms外植體培養(yǎng)基含有ms、0.6mg/l的n6-異戊烯基腺嘌呤、0.5mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.2mg/l維生素c、0.3mg/l牛磺酸、38g/l蔗糖以及5.6g/l的瓊脂，ph值控制在6.0；s3、繁殖培養(yǎng)：將s2中得到的無菌試管苗剪切后置于ms繁殖培養(yǎng)基中，在溫度為28℃、光照強(qiáng)度為1200lux、光照時(shí)間為11h/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽；其中，所述ms繁殖培養(yǎng)基中含有ms、0.8mg/l的n6-異戊烯基腺嘌呤、0.6mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.3mg/l維生素c、0.4mg/l?；撬?、35g/l蔗糖和5.8g/l的瓊脂，ph值控制在6.0；s4、壯苗培養(yǎng)：將s3中得到的試管苗叢生芽置于ms壯苗培養(yǎng)基中，在溫度為30℃、光照強(qiáng)度為1500lux，光照時(shí)間為12h/天的條件下培養(yǎng)25天，得到壯苗后的叢生芽；其中，所述ms壯苗培養(yǎng)基含有ms、0.02mg/l的2,4-二氯苯氧乙酸、0.8mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、2mg/l活性炭、4.5mg/l卡那霉素、30g/l蔗糖和6.2g/l的瓊脂，ph值控制在6.0；所述ms壯苗培養(yǎng)基中還添加有托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉，每升ms壯苗培養(yǎng)基中托瑪琳石粉添加量為4.2g、遠(yuǎn)紅外陶瓷粉添加量為3.4g；所述托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉在添加前需120℃溫度下烘烤40min，然后冷卻至室溫，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的高錳酸鉀溶液浸泡1.5h，然后用無菌水沖洗10min后進(jìn)行烘干處理，得到上述添加量的托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉；s5、生根培養(yǎng)：將s4中得到的壯苗后的叢生芽置于ms生根培養(yǎng)基中，在溫度為30℃、光照強(qiáng)度為1600lux、光照時(shí)間為14h/天的條件下培養(yǎng)35天，得到帶根的完整植株；其中，所述ms生根培養(yǎng)基含有ms、0.03mg/l的2,4-二氯苯氧乙酸、1.0mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、2.5mg/l活性炭、5.5mg/l卡那霉素、28g/l蔗糖和6.4g/l的瓊脂，ph值控制在6.0；s6、煉苗與移栽：將s5中得到的帶根的完整植株，在溫度為25℃、自然通風(fēng)的室內(nèi)煉苗7天至植株表面角質(zhì)形成后將苗取出，立即移栽到育苗基質(zhì)中，在育苗基質(zhì)繼續(xù)生長35天后移栽到田地中；其中，所述育苗基質(zhì)包括以下重量份數(shù)的組分：腐熟鋸末15份、腐熟蔗渣10份、腐熟菇渣8份、腐熟雞糞6份、蚯蚓糞3份、黑土30份、珍珠巖8份、草炭8份、硝酸鈣2份、硝酸鎂0.8份、磷酸二氫鉀2份以及菌肥0.5份；所述珍珠巖粒徑大小為4mm；所述菌肥中包括有質(zhì)量比為1.6:0.8:0.9:1.2的枯草芽孢桿菌、固氮菌、硅酸鹽菌、木霉菌。<實(shí)施例3>一種倒地鈴的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：s1、外植體處理：取倒地鈴種子作為外植體，先用羽衣草浸提液浸泡12min，然后用蒸餾水沖洗8min，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.5％次氯酸鈉溶液浸泡12min，再用無菌水沖洗17min，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到處理后的外植體；其中，所述羽衣草浸提液由以下重量份數(shù)組分制成：新鮮羽衣草55份、新鮮接骨木葉片12份、新鮮紅蘭花9份、乙醇12份以及無菌水400份；將上述重量份數(shù)的新鮮羽衣草、新鮮接骨木葉片、新鮮紅蘭花搗爛，然后加入上述重量份數(shù)的乙醇和無菌水，于40khz頻率下超聲22min，超聲溫度控制在32℃，然后過濾除去濾渣，取濾液離心處理，再取上層清液，即制得所述羽衣草浸提液；s2、外植體培養(yǎng)：將s1中處理后的外植體接種到ms外植體培養(yǎng)基中，在溫度為26℃、光照強(qiáng)度為900lux、光照時(shí)間為9h/天的條件下培養(yǎng)22天，外植體發(fā)芽后得到無菌試管苗；其中，所述ms外植體培養(yǎng)基含有ms、0.4mg/l的四氫吡喃芐基腺嘌呤、0.4mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.15mg/l維生素c、0.25mg/l?；撬帷?8g/l蔗糖以及5.6g/l的瓊脂，ph值控制在5.8；s3、繁殖培養(yǎng)：將s2中得到的無菌試管苗剪切后置于ms繁殖培養(yǎng)基中，在溫度為25℃、光照強(qiáng)度為1100lux、光照時(shí)間為10h/天的條件下培養(yǎng)28天得到試管苗叢生芽；其中，所述ms繁殖培養(yǎng)基中含有ms、0.6mg/l的四氫吡喃芐基腺嘌呤、0.5mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、0.25mg/l維生素c、0.35mg/l?；撬?、35g/l蔗糖和5.8g/l的瓊脂，ph值控制在5.8；s4、壯苗培養(yǎng)：將s3中得到的試管苗叢生芽置于ms壯苗培養(yǎng)基中，在溫度為27℃、光照強(qiáng)度為1400lux，光照時(shí)間為11h/天的條件下培養(yǎng)22天，得到壯苗后的叢生芽；其中，所述ms壯苗培養(yǎng)基含有ms、0.01mg/l的2-萘氧乙酸、0.6mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、1.8mg/l活性炭、4mg/l卡那霉素、30g/l蔗糖和6.2g/l的瓊脂，ph值控制在5.8；所述ms壯苗培養(yǎng)基中還添加有托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉，每升ms壯苗培養(yǎng)基中托瑪琳石粉添加量為4g、遠(yuǎn)紅外陶瓷粉添加量為3.1g；所述托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉在添加前需110℃溫度下烘烤35min，然后冷卻至室溫，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的高錳酸鉀溶液浸泡1.2h，然后用無菌水沖洗8min后進(jìn)行烘干處理，得到上述添加量的托瑪琳石粉和遠(yuǎn)紅外陶瓷粉；s5、生根培養(yǎng)：將s4中得到的壯苗后的叢生芽置于ms生根培養(yǎng)基中，在溫度為25℃、光照強(qiáng)度為1450lux、光照時(shí)間為13h/天的條件下培養(yǎng)30天，得到帶根的完整植株；其中，所述ms生根培養(yǎng)基含有ms、0.02mg/l的2-萘氧乙酸、0.8mg/l的l-硒甲基硒代半胱氨酸、2.2mg/l活性炭、5mg/l卡那霉素、28g/l蔗糖和6.4g/l的瓊脂，ph值控制在5.8；s6、煉苗與移栽：將s5中得到的帶根的完整植株，在溫度為22℃、自然通風(fēng)的室內(nèi)煉苗6天至植株表面角質(zhì)形成后將苗取出，立即移栽到育苗基質(zhì)中，在育苗基質(zhì)繼續(xù)生長30天后移栽到田地中；其中，所述育苗基質(zhì)包括以下重量份數(shù)的組分：腐熟鋸末12份、腐熟蔗渣9份、腐熟菇渣6份、腐熟雞糞5份、蚯蚓糞2份、黑土25份、珍珠巖6份、草炭7份、硝酸鈣1.5份、硝酸鎂0.6份、磷酸二氫鉀1.5份以及菌肥0.3份；所述珍珠巖粒徑大小為3mm；所述菌肥中包括有質(zhì)量比為1.6:0.8:0.9:1.2的枯草芽孢桿菌、固氮菌、硅酸鹽菌、木霉菌。<對比試驗(yàn)>使用傳統(tǒng)方法，采取種子播種的方式，將倒地鈴種子直接播種于田地中進(jìn)行繁殖，作為對比例1，對比例1中種子的出芽率為33.8％～45.6％，每100個種子最終得到26～37根成活苗株，相當(dāng)于苗株的成活率為26.4％～37.2％，從種子播種到成苗所需時(shí)間為4～5個月；實(shí)施例1～3中平均每1個種子能得到10～15個組培苗，每1個種子都能得到9～14根倒地鈴成活苗株，而且組培苗經(jīng)過練苗移栽后的成活率在92.1％～96.6％，同樣只需要時(shí)間4～5個月；由此可見，本發(fā)明的方法能實(shí)現(xiàn)倒地鈴的快速繁殖。采用常規(guī)的組織培養(yǎng)的方法，將倒地鈴種子作為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，作為對比例2，將對比例2與實(shí)施例1～3進(jìn)行對比，通過對組培苗的褐化率、玻璃化率以及移栽田地后的成活率進(jìn)行對比，得到表2數(shù)據(jù)：表2對比例2與實(shí)施例1～3對組培苗的褐化率、玻璃化率以及移栽后的成活率的影響對比例2實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3褐化率(％)6.61.31.21.1玻璃化率(％)9.32.92.31.9成活率(％)82.692.593.293.8從表2可看出，按本發(fā)明方法繁殖的倒地鈴，實(shí)施例1～3中組培苗期間褐化率為1.1％～1.3％，小于常規(guī)方法對比例2的6.6％；實(shí)施例1～3中組培苗玻璃化率為1.9％～2.9％，也低于常規(guī)方法對比例2的9.3％；實(shí)施例1～3中移栽田地后成活率為92.5％～93.8％，高于常規(guī)方法對比例2的82.6％。因此，本發(fā)明的方法能降低組培苗的褐化率、玻璃化率，提高移栽成活率，同時(shí)提高倒地鈴的成苗率，能實(shí)現(xiàn)倒地鈴的快速繁殖，實(shí)現(xiàn)倒地鈴的規(guī)模化繁育。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實(shí)施例。當(dāng)前第1頁12