本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法。

背景技術(shù)：

紅螯螯蝦屬甲殼綱、十足目、長尾亞目、擬河蝦科、光殼蝦屬，原產(chǎn)于澳大利亞北部的熱帶地區(qū)和新幾內(nèi)亞南部的溪流中，因其外形酷似海水龍蝦，又只生活在淡水中，故俗稱澳洲淡水龍蝦。紅螯螯蝦具有個體大、生長快、食性雜、易飼養(yǎng)、病害少等養(yǎng)殖性能優(yōu)勢；同時，因其肉味鮮美、富含低膽固醇蛋白質(zhì)，作為營養(yǎng)保健食品而風(fēng)靡歐美等國，其市場前景廣闊。目前，美國、法國、西班牙、南非、東南亞等許多國家引進了此蝦，并進行工廠化育苗及養(yǎng)殖。

現(xiàn)有技術(shù)如申請公布號為cn103314908a的中國發(fā)明專利，公開了一種紅螯螯蝦卵離體培育技術(shù)，該技術(shù)中蝦卵經(jīng)過消毒，分級孵化等過程得所需的蝦苗，該發(fā)明提高蝦苗的成活率，但提高的程度有限，難以滿足市場對蝦苗的要求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法，方法步驟簡單，操作方便，實用性強，極大地提高了蝦苗的成活率和品質(zhì)，蝦卵對所選用的消毒劑的耐受性好，在殺死病原體的同時，不影響孵化率。

本發(fā)明針對背景技術(shù)中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法，首先是親蝦培育：親蝦按雌雄比例3-4∶1進行專池培育；接著是脫卵：采用消毒后的鑷子將蝦卵從親蝦腹部分離；緊接著是消毒：取1-3份消毒劑，加入40-45份水，攪拌混合得消毒液，取2-5份蝦卵，加入制備的消毒液，浸泡3-6h，取出；最后是孵化：將消毒后的卵蝦置于孵化器中，孵化密度為125-130粒/ml，孵化池內(nèi)溶解氧保持在10-13mg/l，孵化溫度保持在25-27℃，孵化液由水、水解蛋白、α-亞麻酸、復(fù)合維生素、葡萄糖、葡萄糖酸鈣、硫酸鋅、海藻酸鈉按100/4/0.3/0.4/7/4/0.2/7的重量比混合制成。其中，消毒劑的成分及其重量份為：球孢鏈霉菌發(fā)酵液3-8份，蟹殼提取物4-7份，檸檬烯5-10份，β-水芹烯1-3份，石竹烯2-5份，檸檬酸3-6份。其中，球孢鏈霉菌購買自上海一研生物科技有限公司。蝦卵對所制備的消毒劑耐受性強，且其功效不是各組分作用的簡單疊加，而是顯著的協(xié)同增效，提高了消毒劑對病原體的藥效，降低了用藥量，符合綠色環(huán)保的要求。

作為優(yōu)選，球孢鏈霉菌發(fā)酵液的制備方法為：取1-3份球孢鏈霉菌，加入9-12份無菌生理鹽水得菌體懸浮液，向懸浮液中加入4-6份活性短肽，再接種到40-50份的察氏培養(yǎng)液中，置于20-23℃、170-175r/min的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)4-5d，離心分離，取上清液得鏈霉菌發(fā)酵液。其中，察氏培養(yǎng)液的成分及其重量份為：5-7份蔗糖，1-3份feso4，1-2份nano3，2-3份k2hpo4，1-4份mgso4·7h2o，5-7份kcl，10-13份蒸餾水。該培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，為球孢鏈霉菌的新陳代謝提供了有利條件，所得的球孢鏈霉菌發(fā)酵液所含的抗生素含量高，抑菌活性強，提高了所制備的消毒劑的功效。

作為優(yōu)選，球孢鏈霉菌發(fā)酵液的制備過程中所加入的活性短肽的氨基酸序列為：hshachpgklcvcvncsr。發(fā)酵液要達到一定的抑菌活性，需要長時間的搖床培養(yǎng)，加入的活性短肽改變了細(xì)胞膜的通透性，提高了營養(yǎng)物的傳質(zhì)速度，促進了胞內(nèi)的新陳代謝，縮短了培養(yǎng)時間。

作為優(yōu)選，蟹殼提取物的制備方法為：取10-15份蟹殼，用10-13份質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%-15%hcl溶液浸泡5-7h，過濾，水洗至中性，置于8-10份溫度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35%-40%naoh溶液中，在溫度為96-100℃下攪拌15-17h，離心分離，將所得固體水洗至中性，得蟹殼提取物。該方法制備步驟少，其蟹殼提取物中所含的甲殼素和殼聚糖含量高，增強了消毒劑對病原體的作用。

作為優(yōu)選，消毒劑的制備方法為：取3-8份球孢鏈霉菌發(fā)酵液，加入3-6份檸檬酸，再加入4-7份蟹殼提取物，攪拌20-25min，再加入5-10份檸檬烯，1-3份β-水芹烯，2-5份石竹烯，在35-40℃下攪拌1.5-2h，得消毒劑。該條件下，各種成分可以充分混合，使消毒劑更加均勻和穩(wěn)定，提高了產(chǎn)品在實際應(yīng)用過程中的效果。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明公開的一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法，過程中所用的消毒劑對病原體毒性強，少量的消毒劑便可起到很好的效果，蝦卵對該消毒劑的耐受性好，在殺死病原體的同時，不影響孵化率，所繁育的仔蝦成活率高，品質(zhì)好，繁育步驟簡單，操作方便，實用性強，具有良好的經(jīng)濟效益。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明做進一步說明：

實施例1：

一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法，包括：

1)親蝦培育：親蝦按雌雄比例3∶1進行專池培育；

2)脫卵：采用消毒后的鑷子將蝦卵從親蝦腹部分離；

3)消毒：取1份消毒劑，加入40份水，攪拌混合的消毒液，取2份蝦卵，加入制備的消毒液，浸泡3h，取出；

4)孵化：將消毒后的卵蝦置于孵化器中，孵化密度為125粒/ml，孵化池內(nèi)溶解氧保持在10mg/l，孵化溫度保持在25℃，孵化液由水、水解蛋白、α-亞麻酸、復(fù)合維生素、葡萄糖、葡萄糖酸鈣、硫酸鋅、海藻酸鈉按100/4/0.3/0.4/7/4/0.2/7的重量比混合制成。

步驟3)中消毒劑的成分及其重量份為：球孢鏈霉菌發(fā)酵液3份，蟹殼提取物4份，檸檬烯5份，β-水芹烯1份，石竹烯2份，檸檬酸3份。該消毒劑的制備方法包括：首先是球孢鏈霉菌發(fā)酵液的制備：點燃酒精燈，將接種環(huán)通過火焰灼燒滅菌，將滅菌的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，先將環(huán)接觸管內(nèi)壁，達到冷卻的目的，然后再挑取1份菌苔，將接種環(huán)退出菌種管，迅速伸入9份無菌生理鹽水得菌體懸浮液，向懸浮液中加入4份活性短肽，再接種到40份的察氏培養(yǎng)液中，置于20℃、170r/min的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)4d，在6800r/min下離心10min，取上清液得鏈霉菌發(fā)酵液。其中，察氏培養(yǎng)液的成分及其重量份為：5份蔗糖，1份feso4，1份nano3，2份k2hpo4，1份mgso4·7h2o，5份kcl，10份蒸餾水。該培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，為球孢鏈霉菌的新陳代謝提供了有利條件，所得的球孢鏈霉菌發(fā)酵液所含的抗生素含量高，抑菌活性強，提高了所制備的消毒劑的功效；接著是蟹殼提取物的制備：向容器中加入10份蟹殼，再加入10份質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%hcl溶液浸泡5h，過濾，水洗至中性，置于8份溫度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35%naoh溶液中，用水浴鍋控制溫度為96℃下，攪拌反應(yīng)15h，在4200r/min下離心8min，將所得固體水洗至中性，得蟹殼提取物。該方法制備步驟少，其蟹殼提取物中所含的甲殼素和殼聚糖含量高，增強了消毒劑對病原體的作用；最后復(fù)配制備消毒劑：取3份球孢鏈霉菌發(fā)酵液，加入3份檸檬酸，再加入4份蟹殼提取物，攪拌20min，再加入5份檸檬烯，1份β-水芹烯，2份石竹烯，在35℃下攪拌1.5h，得消毒劑。該條件下，各種成分可以充分混合，使消毒劑更加均勻和穩(wěn)定，提高了產(chǎn)品在實際應(yīng)用過程中的效果。

實施例2：

一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法，包括：

1)親蝦培育：親蝦按雌雄比例5∶1進行專池培育；

2)脫卵：采用消毒后的鑷子將蝦卵從親蝦腹部分離；

3)消毒：取3份消毒劑，加入45份水，攪拌混合的消毒液，取5份蝦卵，加入制備的消毒液，浸泡6h，取出；

4)孵化：將消毒后的卵蝦置于孵化器中，孵化密度為130粒/ml，孵化池內(nèi)溶解氧保持在13mg/l，孵化溫度保持在27℃，孵化液由水、水解蛋白、α-亞麻酸、復(fù)合維生素、葡萄糖、葡萄糖酸鈣、硫酸鋅、海藻酸鈉按100/4/0.3/0.4/7/4/0.2/7的重量比混合制成。

步驟3)中消毒劑的成分及其重量份為：球孢鏈霉菌發(fā)酵液8份，蟹殼提取物7份，檸檬烯10份，β-水芹烯3份，石竹烯5份，檸檬酸6份。該消毒劑的制備方法包括：

1)球孢鏈霉菌發(fā)酵液的制備：取3份球孢鏈霉菌，加入12份無菌生理鹽水得菌體懸浮液，向懸浮液中加入6份活性短肽，再接種到50份的察氏培養(yǎng)液中，置于23℃、175r/min的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)5d，離心分離，取上清液得鏈霉菌發(fā)酵液。其中，察氏培養(yǎng)液的成分及其重量份為：7份蔗糖，3份feso4，2份nano3，3份k2hpo4，4份mgso4·7h2o，7份kcl，13份蒸餾水。該培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，為球孢鏈霉菌的新陳代謝提供了有利條件，所得的球孢鏈霉菌發(fā)酵液所含的抗生素含量高，抑菌活性強，提高了所制備的消毒劑的功效；

2)蟹殼提取物的制備：取15份蟹殼，用13份質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%hcl溶液浸泡7h，過濾，水洗至中性，置于10份溫度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%naoh溶液中，在溫度為100℃下攪拌17h，離心分離，將所得固體水洗至中性，干燥得蟹殼提取物。該方法制備步驟少，其蟹殼提取物中所含的甲殼素和殼聚糖含量高，增強了消毒劑對病原體的作用；

3)消毒劑的制備：取8份球孢鏈霉菌發(fā)酵液，加入6份檸檬酸，再加入7份蟹殼提取物，攪拌25min，再加入10份檸檬烯，3份β-水芹烯，5份石竹烯，在40℃下攪拌2h，得消毒劑。該條件下，各種成分可以充分混合，使消毒劑更加均勻和穩(wěn)定，提高了產(chǎn)品在實際應(yīng)用過程中的效果。

本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進行贅述。

以上所述的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行了詳細(xì)說明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

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<110>浙江省淡水水產(chǎn)研究所

<120>一種紅螯螯蝦孵卵繁育方法

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