本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種草莓脫毒組培快繁的方法。

背景技術(shù)：

植物細(xì)胞全能性，指植物的每個細(xì)胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳能力。細(xì)胞全能性概念，成為植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)。根據(jù)這一理論，使離體的草莓莖尖，通過植物激素的調(diào)控作用，培養(yǎng)在人工控制的環(huán)境中，使其脫分化和再分化，形成完整植株的過程。

草莓又叫洋莓、地莓等，屬薔薇科、草莓屬、多年生草本植物。草莓果鮮美紅嫩，果肉多汁，含有特殊的濃郁水果芳香，富含維生素c、維生素a、胡蘿卜素等，有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值。國外最新研究指出，草莓中含有一種胺類物質(zhì)，對治療白血病和再生障礙性貧血有一定的功效。草莓一般4-5月成熟，成熟期正值水果淡季，是一老少皆宜的時令水果。同時還具有較高的加工利用價值，其市場價位高、需求大。

草莓病毒病是影響草莓生產(chǎn)的主要病害，一般導(dǎo)致減產(chǎn)30％～50％，目前浸染草莓的病毒病，主要有四種，即草莓斑駁病毒、草莓皺縮病毒、草莓輕和黃邊病毒、草莓鑲脈病毒。據(jù)項目組調(diào)查，貴州草莓的種植始于20世紀(jì)90年代末，麻江下司、花橋，貴陽花溪把火村，有歷年種植草莓的習(xí)慣，有良好的基礎(chǔ)，2000年種植面積達(dá)2萬多畝，每畝產(chǎn)值可達(dá)5000～10000元不等。但近年來，由于病毒侵染，導(dǎo)致產(chǎn)量逐年下滑，嚴(yán)重挫傷了莓農(nóng)的種植積極性，種植面積逐年減少，僅下司花橋一帶，種植面積減少了近1000畝，一些品質(zhì)較好的品種(如春香)也由于產(chǎn)量低而被淘汰。因此，還需要研究新型的草莓培養(yǎng)方法，來避免現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明目的在于提供一種草莓脫毒組培快繁的方法，以提高外植體的成活率、不定芽的誘導(dǎo)率、叢生芽的增值倍數(shù)和試管苗的移栽成活率，從而使草莓的果產(chǎn)量提高30％～50％，提高種植戶生產(chǎn)積極性。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：本發(fā)明提供了一種草莓脫毒組培快繁的方法，包括如下步驟：s1：選取草莓植株的匍匐莖作為外植體，然后進(jìn)行熱處理，再進(jìn)行消毒處理；s2：從消毒處理后的外植體剝離莖尖，然后接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，得到誘導(dǎo)出的不定芽；s3：將誘導(dǎo)出的不定芽進(jìn)行多代繼代增殖，得到試管苗；s4：將試管苗分株接種于誘根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)；s5：將生根培養(yǎng)后的試管苗進(jìn)行煉苗馴化，然后采用浸泡液浸泡根部，再移栽至消毒后的基質(zhì)中；s6：對移栽后的試管苗進(jìn)行管理培養(yǎng)，得到草莓苗。需要說明的是，s4中，在將試管苗分株接種于誘根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)前，可以將經(jīng)過多代繼代增殖的試管苗剪去部分根系和黃葉，再分株接種；s5中，經(jīng)多年的試驗，為避免早春的寒冷和滿足莓農(nóng)每年4～5月用苗的需要，可將試管苗提前到頭年的11月馴化移栽；但不能太晚，尤其不能在1月份寒冷季節(jié)移栽，以免造成凍害；移栽基質(zhì)要提前進(jìn)行消毒處理備用，穴盤一般用50空的塑料穴盤，移栽前將經(jīng)消毒處理的闊葉腐殖土與藥渣按1:1比例混合均勻，調(diào)酸后，裝入事先準(zhǔn)備好的穴盤中，再用50％的多菌靈+50％的代森鋅消毒穴盤基質(zhì)，然后移栽，移栽后澆定根水，然后再搭拱架、蓋膜、壓實。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s1中，熱處理為45～55℃處理4～6min，消毒處理具體包括：首先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的新潔爾滅消毒20min，再采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒5min，最后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的過氧乙酸水溶液消毒6min。需要說明的是，通過上述復(fù)合消毒劑型處理草莓外植體，可以使草莓外植體處理成活率比常規(guī)劑型提高了40個百分點，從而解決草莓外植體處理易褐化、死亡的問題。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s2中，莖尖的長度為0.2～0.5mm，不定芽誘導(dǎo)的時間為25～35天，每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。需要說明的是，采用本發(fā)明提供的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，叢生芽的增值倍數(shù)為7.6倍，芽生長比較壯，生長良好，無水漬狀。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s3中，多代為2～5代，繼代增殖是采用繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖，每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.01mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。需要說明的是，每代繼代培養(yǎng)的時間優(yōu)選為30天。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s4中，生根培養(yǎng)的時間為25～35天，每1l誘根培養(yǎng)基的原料組分包括：白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。需要說明的是，試管苗在繼代增殖培養(yǎng)基中經(jīng)多次繼代后，也能形成根系，但苗弱，移栽成活率不高；轉(zhuǎn)入去掉植物生長調(diào)節(jié)劑的誘根培養(yǎng)基后，生長健壯，比直接移栽的瓶苗成活率高，壯苗生根25～35天。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s5中，煉苗馴化的時間為2天，浸泡的時間為28～32min，浸泡液的原料組分按重量份計，包括：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑1重量份和水500重量份。需要說明的是，試管苗生根后，轉(zhuǎn)到移栽扦插室進(jìn)行煉苗馴化，煉苗2天后，洗掉瓊脂，再用浸泡液浸泡30分鐘，然后移栽至基質(zhì)中。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s5中，基質(zhì)的原料組分按重量份計，包括：闊葉腐殖土1重量份、藥渣1重量份；藥渣包括黃芩、銀杏葉、女貞子、魚腥草、頭花蓼和黃精。需要說明的是，基質(zhì)以闊葉腐殖土+藥渣＝1:1(質(zhì)量比)為配方，移栽成活率可以高達(dá)95％，并且葉片數(shù)多，葉色綠，根系豐富，盤根極好。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，s6中，培養(yǎng)的時間為40～60天，管理培養(yǎng)包括葉面施肥、澆水和防治蟲害。

在本發(fā)明的進(jìn)一步實施方式中，管理培養(yǎng)具體包括：移栽7～10天后，用第一營養(yǎng)液噴施葉面，每3～4天噴施一次；待心葉長出，用第二營養(yǎng)液噴施葉面，每周噴施兩次；整個管理培養(yǎng)過程，每10～15天噴施一次防蟲液；其中，第一營養(yǎng)液是1/2ms培養(yǎng)基，每100g第二營養(yǎng)液的原料組分包括：0.1g磷酸二氫鉀、0.1g尿素，余量為水，防蟲液是將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑和水以1:1000的質(zhì)量比混合而成。需要說明的是，草莓試管苗移栽后1周內(nèi)，保持高溫高濕，不能揭膜；7～10天后，小苗根系基本下扎，心葉略有長出時，用第一營養(yǎng)液噴施葉面2次，每3～4天一次；再過一周后，心葉長出，再用第二營養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施，每周2次，期間加強(qiáng)肥水管理，注意防治病蟲害；每隔10～15天，結(jié)合澆水，噴施防蟲液防治病害；40～60天可形成草莓商品苗。

本發(fā)明還保護(hù)根據(jù)上述草莓脫毒組培快繁的方法培養(yǎng)得到的草莓苗。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案，具有如下的有益效果：(1)本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法，所采用的草莓外植體處理的消毒劑型為：75％酒精30s+0.5％新潔爾滅20min+0.1％氯化汞5min+0.5％過氧乙酸6min，可以使草莓外植體處理成活率比常規(guī)劑型提高40個百分點，從而解決草莓外植體處理易褐化、死亡的問題；(2)本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法，所采用的草莓不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方為ms+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l+3％白糖+0.38％瓊脂，可以使不定芽的平均誘導(dǎo)率達(dá)80％以上；(3)本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法，所采用的草莓繼代增殖的培養(yǎng)基配方為ms+6-ba0.5mg/l+naa0.01mg/l+3％白糖+0.38％瓊脂，可以使叢生芽的增值倍數(shù)為7.6倍，芽生長比較壯，生長良好，無水漬狀；(4)本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法，將闊葉腐殖土和藥渣等質(zhì)量比混合配制基質(zhì)，使草莓試管苗的移栽成活率高達(dá)95％，并且葉片數(shù)多，葉色綠，根系豐富，盤根極好；(5)本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法，草莓果產(chǎn)量可以提高30％～50％，可以增強(qiáng)草莓抗逆性，促使草莓種植戶增產(chǎn)增收，從而提高種植戶生產(chǎn)積極性，對改善種植戶生活具有重要意義，能促使草莓生產(chǎn)水平提高到一個新的水平。

本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例中提供的草莓脫毒組培快繁的方法的流程示意圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。以下實施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案，因此只是作為示例，而不能以此來限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，數(shù)據(jù)為三次重復(fù)實驗的平均值或平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

本發(fā)明實施例的試驗地均在黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)；本發(fā)明采用的ms培養(yǎng)基，每1lms培養(yǎng)基的原料組分包括：nh4no31650mg、kno31900mg、cacl2·2h2o440mg、mgso4·7h2o370mg、kh2po4170mg、ki0.83mg、h3bo36.2mg、mnso4·4h2o22.3mg、znso4·7h2o8.6mg、na2moo4·2h2o0.25mg、cuso4·5h2o0.025mg、cocl2·6h2o0.025mg、feso4·7h2o27.8mg、na2-edta·2h2o37.3mg、肌醇100mg、煙酸0.5mg、鹽酸吡哆醇0.5mg、鹽酸硫胺素0.1mg和甘氨酸2.0mg。

本發(fā)明實施例采用的藥渣選用以中草藥作為原料經(jīng)浸提之后的產(chǎn)物，且中草藥包括黃芩4重量份、銀杏葉80重量份、女貞籽10重量份、魚腥草2重量份、頭花蓼6重量份以及黃精12重量份；藥渣的制備方法包括：s101：將各原料組分洗凈、晾干后粉碎，之后將女貞籽和頭花蓼用水浸漬，調(diào)節(jié)浸漬后產(chǎn)物的ph值為6.6，之后加水煎煮提?。黄渲?，加水煎煮提取中，水的加入質(zhì)量為女貞籽和頭花蓼總質(zhì)量的8倍，提取時間為100min；s102：將剩余原料組分混合均勻，采用乙醇水溶液進(jìn)行提??；其中，乙醇水溶液的質(zhì)量百分濃度為15％，提取溫度為60℃，提取時間為100min；s103：將煎煮提取和乙醇水溶液提取后的產(chǎn)物混合均勻，之后過濾并收集濾渣，得到藥渣。

如圖1所示，本發(fā)明提供一種草莓脫毒組培快繁的方法，包括如下步驟：

s1：選取草莓植株的匍匐莖作為外植體，然后45～55℃熱處理4～6min，再進(jìn)行消毒處理；其中，消毒處理具體包括：首先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的新潔爾滅消毒20min，再采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒5min，最后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的過氧乙酸水溶液消毒6min。

s2：從消毒處理后的外植體剝離長度為0.2～0.5mm的莖尖，然后接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)25～35天，得到誘導(dǎo)出的不定芽；其中，每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s3：將誘導(dǎo)出的不定芽進(jìn)行多代繼代增殖，得到試管苗；其中，多代為2～5代，繼代增殖是采用繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖，每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.01mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s4：將試管苗分株接種于誘根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)25～35天；其中，每1l誘根培養(yǎng)基的原料組分包括：白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s5：將生根培養(yǎng)后的試管苗進(jìn)行煉苗馴化2天，然后采用浸泡液浸泡根部28～32min，再移栽至消毒后的基質(zhì)中；其中，浸泡液的原料組分按重量份計，包括：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑1重量份和水500重量份；基質(zhì)的原料組分按重量份計，包括：闊葉腐殖土1重量份、藥渣1重量份；藥渣包括黃芩、銀杏葉、女貞子、魚腥草、頭花蓼和黃精。

s6：對移栽后的試管苗進(jìn)行管理培養(yǎng)40～60天，得到草莓苗；其中，管理培養(yǎng)具體包括：移栽7～10天后，用第一營養(yǎng)液噴施葉面，每3～4天噴施一次；待心葉長出，用第二營養(yǎng)液噴施葉面，每周噴施兩次；整個管理培養(yǎng)過程，每10～15天噴施一次防蟲液；第一營養(yǎng)液是1/2ms培養(yǎng)基，每100g第二營養(yǎng)液的原料組分包括：0.1g磷酸二氫鉀、0.1g尿素，余量為水，防蟲液是將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑和水以1:1000的質(zhì)量比混合而成。

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法作進(jìn)一步說明。

實施例一

本實施例提供一種草莓脫毒組培快繁的方法，包括如下步驟：

s1：選取草莓植株(草莓品種為新世紀(jì)1號)的匍匐莖作為外植體，然后50℃熱處理5min，再進(jìn)行消毒處理；其中，消毒處理具體包括：首先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的新潔爾滅消毒20min，再采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒5min，最后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的過氧乙酸水溶液消毒6min。

s2：從消毒處理后的外植體剝離長度為0.3mm的莖尖，然后接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)30天，得到誘導(dǎo)出的不定芽；其中，每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s3：將誘導(dǎo)出的不定芽進(jìn)行多代繼代增殖，得到試管苗；其中，多代為4代，繼代增殖是采用繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖，每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.01mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s4：將試管苗分株接種于誘根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)30天；其中，每1l誘根培養(yǎng)基的原料組分包括：白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s5：將生根培養(yǎng)后的試管苗進(jìn)行煉苗馴化2天，然后采用浸泡液浸泡根部30min，再移栽至消毒后的基質(zhì)中；其中，浸泡液的原料組分按重量份計，包括：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑1重量份和水500重量份；基質(zhì)的原料組分按重量份計，包括：闊葉腐殖土1重量份、藥渣1重量份；藥渣包括黃芩、銀杏葉、女貞子、魚腥草、頭花蓼和黃精。

s6：對移栽后的試管苗進(jìn)行管理培養(yǎng)45天，得到草莓苗；其中，管理培養(yǎng)具體包括：移栽7天后，用第一營養(yǎng)液噴施葉面，每3天噴施一次；待心葉長出，用第二營養(yǎng)液噴施葉面，每周噴施兩次；整個管理培養(yǎng)過程，每10天噴施一次防蟲液；第一營養(yǎng)液是1/2ms培養(yǎng)基，每100g第二營養(yǎng)液的原料組分包括：0.1g磷酸二氫鉀、0.1g尿素，余量為水，防蟲液是將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑和水以1:1000的質(zhì)量比混合而成。

實施例二

本實施例提供一種草莓脫毒組培快繁的方法，包括如下步驟：

s1：選取草莓植株(草莓品種為新世紀(jì)1號)的匍匐莖作為外植體，然后45℃熱處理6min，再進(jìn)行消毒處理；其中，消毒處理具體包括：首先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的新潔爾滅消毒20min，再采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒5min，最后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的過氧乙酸水溶液消毒6min。

s2：從消毒處理后的外植體剝離長度為0.2mm的莖尖，然后接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)25天，得到誘導(dǎo)出的不定芽；其中，每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s3：將誘導(dǎo)出的不定芽進(jìn)行多代繼代增殖，得到試管苗；其中，多代為2代，繼代增殖是采用繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖，每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.01mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s4：將試管苗分株接種于誘根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)25天；其中，每1l誘根培養(yǎng)基的原料組分包括：白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s5：將生根培養(yǎng)后的試管苗進(jìn)行煉苗馴化2天，然后采用浸泡液浸泡根部28min，再移栽至消毒后的基質(zhì)中；其中，浸泡液的原料組分按重量份計，包括：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑1重量份和水500重量份；基質(zhì)的原料組分按重量份計，包括：闊葉腐殖土1重量份、藥渣1重量份；藥渣包括黃芩、銀杏葉、女貞子、魚腥草、頭花蓼和黃精。

s6：對移栽后的試管苗進(jìn)行管理培養(yǎng)40天，得到草莓苗；其中，管理培養(yǎng)具體包括：移栽7天后，用第一營養(yǎng)液噴施葉面，每3天噴施一次；待心葉長出，用第二營養(yǎng)液噴施葉面，每周噴施兩次；整個管理培養(yǎng)過程，每10天噴施一次防蟲液；第一營養(yǎng)液是1/2ms培養(yǎng)基，每100g第二營養(yǎng)液的原料組分包括：0.1g磷酸二氫鉀、0.1g尿素，余量為水，防蟲液是將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑和水以1:1000的質(zhì)量比混合而成。

實施例三

本實施例提供一種草莓脫毒組培快繁的方法，包括如下步驟：

s1：選取草莓植株(草莓品種為新世紀(jì)1號)的匍匐莖作為外植體，然后55℃熱處理4min，再進(jìn)行消毒處理；其中，消毒處理具體包括：首先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的新潔爾滅消毒20min，再采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒5min，最后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的過氧乙酸水溶液消毒6min。

s2：從消毒處理后的外植體剝離長度為0.5mm的莖尖，然后接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)35天，得到誘導(dǎo)出的不定芽；其中，每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s3：將誘導(dǎo)出的不定芽進(jìn)行多代繼代增殖，得到試管苗；其中，多代為5代，繼代增殖是采用繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖，每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.01mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s4：將試管苗分株接種于誘根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)35天；其中，每1l誘根培養(yǎng)基的原料組分包括：白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

s5：將生根培養(yǎng)后的試管苗進(jìn)行煉苗馴化2天，然后采用浸泡液浸泡根部32min，再移栽至消毒后的基質(zhì)中；其中，浸泡液的原料組分按重量份計，包括：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑1重量份和水500重量份；基質(zhì)的原料組分按重量份計，包括：闊葉腐殖土1重量份、藥渣1重量份；藥渣包括黃芩、銀杏葉、女貞子、魚腥草、頭花蓼和黃精。

s6：對移栽后的試管苗進(jìn)行管理培養(yǎng)60天，得到草莓苗；其中，管理培養(yǎng)具體包括：移栽10天后，用第一營養(yǎng)液噴施葉面，每4天噴施一次；待心葉長出，用第二營養(yǎng)液噴施葉面，每周噴施兩次；整個管理培養(yǎng)過程，每15天噴施一次防蟲液；第一營養(yǎng)液是1/2ms培養(yǎng)基，每100g第二營養(yǎng)液的原料組分包括：0.1g磷酸二氫鉀、0.1g尿素，余量為水，防蟲液是將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的多菌靈可濕性粉劑和水以1:1000的質(zhì)量比混合而成。

對比例一

本對比例提供多種草莓脫毒組培快繁的方法，除了步驟s1的消毒處理不同，其他均同實施例一；

處理1：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒5min。

處理2：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒8min。

處理3：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞水溶液消毒10min。

處理4：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的次氯酸鈣水溶液消毒20min。

處理5：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的過氧化鈉水溶液消毒16min。

處理6：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的雙氧水消毒8min。

處理7：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的次氯酸鈣水溶液消毒15min。

處理8：先采用體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精消毒30s，然后采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的次氯酸鈣水溶液消毒20min。

對比例二

本對比例提供多種草莓脫毒組培快繁的方法，除了步驟s2的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基不同，其他均同實施例一；

1號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

2號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.3mg、吲哚丁酸0.2mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

3號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.5mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

4號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.5mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0.2mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

5號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.5mg、萘乙酸0.3mg、吲哚丁酸0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

6號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤2.0mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸0.2mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

7號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤2.0mg、萘乙酸0.2mg、吲哚丁酸0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

8號不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：每1l不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤2.0mg、萘乙酸0.3mg、吲哚丁酸0.1mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

對比例三

本對比例提供多種草莓脫毒組培快繁的方法，除了步驟s3的繼代增殖培養(yǎng)基不同，其他均同實施例一；

1號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.05mg、吲哚丁酸0.5mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

2號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸1.0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

3號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.01mg、吲哚丁酸0.5mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

4號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.05mg、吲哚丁酸1.0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

5號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.0mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

6號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.5mg、萘乙酸0.01mg、吲哚丁酸1.0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

7號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.5mg、萘乙酸0.05mg、吲哚丁酸0mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

8號繼代增殖培養(yǎng)基：每1l繼代增殖培養(yǎng)基的原料組分包括：6-芐氨基嘌呤1.5mg、萘乙酸0.1mg、吲哚丁酸0.5mg、白糖30g、瓊脂3.8g，余量為ms培養(yǎng)基。

對比例四

本對比例提供多種草莓脫毒組培快繁的方法，除了步驟s5的基質(zhì)不同，其他均同實施例一；

1號基質(zhì)：松針土

2號基質(zhì)：闊葉腐殖土

3號基質(zhì)：園土

4號基質(zhì)：藥渣

實施例一和對比例一(包括8種不同處理)的草莓外植體的處理的各接種20瓶，10d后觀察記錄。對記錄的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，得到的具體結(jié)果如下表1所示。

表1草莓外植體不同處理方法統(tǒng)計結(jié)果

由表1得知，不同消毒劑型組合處理與滅菌時間的長短，對草莓匍匐莖莖尖成活的影響十分明顯，滅菌效果最好的組合是實施例一的處理：75％酒精30s+0.5％新潔爾滅20min+0.1％氯化汞5min+0.5％過氧乙酸6min，成活率達(dá)75％，污染率僅為25％，褐化率0。滅菌效果最差的組合是75％酒精30s+10％過氧化鈉16min，污染率達(dá)100％。因此草莓外植體處理的最佳消毒劑型和劑量組合為：75％酒精30s+0.5％新潔爾滅20min+0.1％氯化汞5min+0.5％過氧乙酸6min。通過試驗發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的復(fù)合消毒劑型使草莓外植體處理成活率比常規(guī)劑型提高了40個百分點，從而解決了草莓外植體處理易褐化、死亡的問題。

實施例一和對比例二(不同處理)中得到的莖尖各接種10瓶，每瓶接種1個莖尖，定期觀察記錄，30d后觀察記錄。對記錄的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，得到的具體結(jié)果如下表2所示。由表2可知，在參試的三個因素中，影響不定芽分化的主要因素是6-ba，最適宜的濃度是1.0mg/l，其次是naa，加入適當(dāng)?shù)膎aa0.1mg/l可促進(jìn)的不定芽的分化。即草莓不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方為ms+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l+3％白糖+0.38％瓊脂，不定芽的平均誘導(dǎo)率達(dá)80％以上。

表2不同培養(yǎng)基對不定芽誘導(dǎo)效果

實施例一和對比例三(不同處理)中誘導(dǎo)得到的不定芽各接種10瓶，每瓶接種2苗，定期觀察記錄，30d后觀察記錄。對記錄的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，得到的具體結(jié)果如下表3所示。由表3可知，在6-ba、naa、iba三個因素中，影響不定芽分化的主要因素是6-ba，增殖倍數(shù)最高的濃度是1.5mg/l；其次是naa，增殖倍數(shù)最高的濃度是naa0.05mg/l，即ms+6-ba1.0mg/l+naa0.1mg/l，用這一培養(yǎng)基配方進(jìn)行進(jìn)一步試驗，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)出來的叢生芽長勢很弱，大部分叢生芽都是水漬狀，不適合以后的增殖；而增殖倍數(shù)稍低的培養(yǎng)基配方，即：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.01mg/l，芽生長比較壯，生長良好，無水漬狀，因此，草莓繼代增殖最佳培養(yǎng)基配方為ms+6-ba0.5mg/l+naa0.01mg/l+3％白糖+0.38％瓊脂，叢生芽的增值倍數(shù)為7.6倍，芽生長比較壯，生長良好，無水漬狀。

表3不同繼代增殖培養(yǎng)基對增殖效果的影響

實施例一和對比例四(不同處理)中的試管苗分別移栽在不同的基質(zhì)中，每種基質(zhì)移栽200株，三次重復(fù)，定期觀察記錄，45d后觀察記錄。對記錄的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，得到的具體結(jié)果如下表4所示。由表4可知，基質(zhì)配方以闊葉腐殖土+藥渣＝1:1的配方，移栽成活率高達(dá)95％，并且葉片數(shù)多，葉色綠，根系豐富，盤根極好。

表4不同移栽基質(zhì)對試管苗生長的影響

需要說明的是，通過試驗發(fā)現(xiàn)，實施例二和實施例三的草莓脫毒組培快繁的方法的效果和實施例一的效果基本相同。采用本發(fā)明實施例一至實施例三提供的草莓脫毒組培快繁的方法，是脫病毒、提高草莓產(chǎn)量的有效途徑。脫病毒苗在生產(chǎn)上具有長勢旺，抗病，色澤鮮紅，果子大、結(jié)果期長和產(chǎn)量高等優(yōu)點。每畝產(chǎn)量可凈增加800～900斤，按照最低每斤5～8元計算，每畝純增收達(dá)到4000-6000元(如采用反季節(jié)大棚栽培，效益更好)，2萬畝種植面積總產(chǎn)值增加8000萬元～1億元，經(jīng)濟(jì)效益十分顯著。本發(fā)明提供的草莓脫毒組培快繁的方法，草莓果產(chǎn)量可以提高30％～50％，可以增強(qiáng)草莓抗逆性；草莓種植戶增產(chǎn)增收，從而提高種植戶生產(chǎn)積極性，對改善種植戶生活具有重要意義，能促使草莓生產(chǎn)水平提高到一個新的水平。

需要注意的是，除非另有說明，本申請使用的技術(shù)術(shù)語或者科學(xué)術(shù)語應(yīng)當(dāng)為本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的通常意義。除非另外具體說明，否則在這些實施例中闡述的部件和步驟的相對步驟、數(shù)字表達(dá)式和數(shù)值并不限制本發(fā)明的范圍。在這里示出和描述的所有示例中，除非另有規(guī)定，任何具體值應(yīng)被解釋為僅僅是示例性的，而不是作為限制，因此，示例性實施例的其他示例可以具有不同的值。

在本發(fā)明的描述中，需要理解的是，術(shù)語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。在本發(fā)明的描述中，“多個”的含義是兩個以上，除非另有明確具體的限定。

最后應(yīng)說明的是：以上各實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述各實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術(shù)方案的范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)中。