本發(fā)明涉及一種撒瓦那柏繼代培養(yǎng)方法，屬于苗木繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
撒瓦那柏(Chamaecyparis pisifera cv.aurea)又稱為金色海岸線、金葉日本花柏、金葉撒瓦那扁柏。柏科扁柏屬植物，屬于常綠彩化針葉樹中的黃化品種。樹皮呈薄片為紅褐色。鱗葉緊貼，小枝下垂，細(xì)長。3月開花，雌球花單生枝頂，雄球花橢圓形，雌雄同株，球果11月成熟，種子有棱角微扁卵圓形，種鱗盾形木質(zhì)。溫帶及亞熱帶樹種，性喜溫暖濕潤氣候，喜光，抗寒耐旱耐半陰，喜深厚沙壤土，能適應(yīng)平原環(huán)境。幼苗期每年的生長量較小，到郁閉后才會進(jìn)入旺盛生長階段，耐修剪。生長高度和蓬徑均可達(dá)1.2m。原產(chǎn)日本，我國北京、南京、青島、廬山、上海、杭州等地均有栽培，上海市綠化管理局推薦的新優(yōu)植物品種名錄中就有該種植物。觀賞價值良好，可用于多種場合，是很稀少的色彩穩(wěn)定的柏科植物。由于其繁殖速度緩慢，市場上還沒有銷售。
撒瓦那柏為新引進(jìn)彩葉樹種，這種植物可以進(jìn)行播種、扦插和壓條繁殖，但是都存在一定的不足：用種子繁殖容易變異，不利于遺傳性狀的保持；扦插繁殖壽命短、根系弱淺，生長勢弱，且易發(fā)生偏冠現(xiàn)象，穗條來源少也是制約撒瓦那柏發(fā)展的一個因素；壓條繁殖因一次性繁殖數(shù)量少不能進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)。
目前，已經(jīng)有撒瓦納柏初代組織培養(yǎng)方法的研究，但是仍存在一些缺陷，如誘導(dǎo)率低，更為嚴(yán)重的是增殖倍數(shù)和增殖代數(shù)差，無法滿足要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種撒瓦那柏繼代培養(yǎng)方法。
技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明公開了一種撒瓦那柏繼代培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
(1)培養(yǎng)基的配制：選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，調(diào)節(jié)pH值，滅菌，即得；
(2)外植體處理：將啟動培養(yǎng)中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，清洗；
(3)接種培養(yǎng)：將步驟(2)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。
作為優(yōu)選，所述步驟(1)中基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS、1/2MS、B5或者WPM培養(yǎng)基。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(1)中蔗糖和瓊脂的濃度分別為30g/L和7g/L。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(1)中6-芐氨基腺嘌呤的濃度為0.4-0.6mg/L，所述萘乙酸的濃度為0.04-0.06mg/L。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(1)中pH值為5.8～6.0，滅菌條件為：121℃高壓下滅菌25min。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(2)中清洗方法為：先用洗衣粉浸泡干凈后，再用純水沖洗2小時。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(3)中培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件為：光照16h/d，光照度為2000lx，溫度控制在(25±2)℃
技術(shù)效果：相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法不僅具有現(xiàn)有技術(shù)中組培繁殖的優(yōu)勢，還通過特定的培養(yǎng)基、激素種類和濃度，與其它處理方法相結(jié)合，能夠(1)顯著提高繼代培養(yǎng)的增殖倍數(shù)達(dá)2倍以上；(2)增加繼代培養(yǎng)的增殖代數(shù)，使原本可以增殖代的可達(dá)到10代以上，提高約100％以上；(3)使撒瓦納柏的規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)成為可能。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
(1)培養(yǎng)基的配制：選擇MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為0.4mg/L和0.04mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體處理：將啟動培養(yǎng)中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，先用洗衣粉浸泡干凈后，再用純水沖洗2小時；
(3)接種培養(yǎng)：將步驟(2)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照16h/d，光照度為2000lx，溫度控制在(25±2)℃。
實(shí)施例2：
(1)培養(yǎng)基的配制：選擇B5培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為0.6mg/L和0.06mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體處理：將啟動培養(yǎng)中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，先用洗衣粉浸泡 干凈后，再用純水沖洗2小時；
(3)接種培養(yǎng)：將步驟(2)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照16h/d，光照度為2000lx，溫度控制在(25±2)℃。
實(shí)施例3：
(1)培養(yǎng)基的配制：選擇1/2MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，濃度分別為30g/L和7g/L，再加6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為0.5mg/L和0.05mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體處理：將啟動培養(yǎng)中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，先用洗衣粉浸泡干凈后，再用純水沖洗2小時；
(3)接種培養(yǎng)：將步驟(2)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照16h/d，光照度為2000lx，溫度控制在(25±2)℃。
實(shí)施例4：
(1)培養(yǎng)基的配制：選擇1/2MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為0.4mg/L和0.05mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體處理：將啟動培養(yǎng)中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，先用洗衣粉浸泡干凈后，再用純水沖洗2小時；
(3)接種培養(yǎng)：將步驟(2)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照16h/d，光照度為2000lx，溫度控制在(25±2)℃。
實(shí)施例5：
(1)培養(yǎng)基的配制：選擇1/2MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為0.5mg/L和0.06mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體處理：將啟動培養(yǎng)中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，先用洗衣粉浸泡干凈后，再用純水沖洗2小時；
(3)接種培養(yǎng)：將步驟(2)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基 中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照16h/d，光照度為2000lx，溫度控制在(25±2)℃。
實(shí)驗(yàn)例
取同一批撒瓦那柏進(jìn)行繼代培養(yǎng)，分別設(shè)為對照1組、對照2組、實(shí)施例3、4和5組；
對照1組，為按照本發(fā)明實(shí)施例3方法，去掉6-芐氨基腺嘌呤所得方法進(jìn)行培養(yǎng)；
對照2組，為按照本發(fā)明實(shí)施例3方法，去掉萘乙酸所得方法進(jìn)行培養(yǎng)；
實(shí)施例3、4和5組分別按照本發(fā)明實(shí)施例3、4和5方法進(jìn)行培養(yǎng)；
各組培養(yǎng)時間為1個月，考察最終誘導(dǎo)率、增殖倍數(shù)和增值代數(shù)，見下表1
表1各組培養(yǎng)結(jié)果考察
由上表1結(jié)果可得，相比較對照1組和對照2組，本發(fā)明繼代培養(yǎng)方法，能夠顯著(1)提高繼代培養(yǎng)的增殖倍數(shù)達(dá)2倍以上；(2)增加繼代培養(yǎng)的增殖代數(shù)，使原本可以增殖代的可達(dá)到10代以上，提高約100％以上；(3)使撒瓦納柏的規(guī)模化、工廠化生產(chǎn)成為可能。