技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明使用一氧化氮(nitricoxide，no)或者no供體預(yù)處理水稻(oryzasatival.cv.)可以提高水稻對(duì)水稻條紋病毒(ricestripevirus，rsv)的抗性，可應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，屬于農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
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rsv屬于纖細(xì)病毒屬(tenuivirus)，其傳播介體主要是灰飛虱(laodelphaxstriatellus)(sbph)，灰飛虱一旦獲毒終生帶毒，并且可以經(jīng)卵傳毒。病毒粒子形態(tài)為分枝絲狀體，基因組由四條rna組成，分別命名為rna1、rna2、rna3和rna4，均可以編碼病毒響應(yīng)合成或者轉(zhuǎn)移相關(guān)功能的蛋白質(zhì)。其中，rna3編碼的核衣殼蛋白(nucleoproteinprotein，ncp)和rna4編碼的病毒特異性蛋白(specificityprotein，sp)在病毒的致病過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用。發(fā)病初期心葉基部會(huì)出現(xiàn)黃白色短條紋，隨后慢慢合并，進(jìn)一步變成與葉脈平行的黃綠色條紋，條紋間仍保持正常的綠色，整體呈黃綠相間條紋狀。發(fā)病后期葉片多卷曲下垂，心葉枯死，癥狀較輕的?？菰兴牖蛘咚胄?，結(jié)實(shí)很少，癥狀嚴(yán)重者死亡(圖1)。我國(guó)作為世界東南亞水稻糧食的主產(chǎn)區(qū)，該病毒病所造成的危害難以忽視，尤其是20世紀(jì)60年代以來(lái)，條紋葉枯病對(duì)我國(guó)南方尤其是江浙一帶的糧食生產(chǎn)造成了很大影響。因此，水稻條紋葉枯病的防治是一項(xiàng)長(zhǎng)期而且不容忽視的任務(wù)。

目前為止，條紋葉枯病常用防治措施主要是選育新的抗病品種，或者使用化學(xué)藥劑殺滅介體飛虱。其中，抗性品種的選育工作量大，耗時(shí)較長(zhǎng)，該方案在短期內(nèi)很難取得好的效果；而化學(xué)藥劑雖然可以阻斷病毒傳播，但其效率不高且可能造成環(huán)境污染。所以，開(kāi)發(fā)高效可行且環(huán)保的防治方案仍然是我們的工作重點(diǎn)。

一氧化氮(nitricoxide，no)，是生物體內(nèi)一種重要的氣體小分子物質(zhì)，最初被發(fā)現(xiàn)于動(dòng)物體內(nèi)，參與許多重要的生理學(xué)反應(yīng)，包括生長(zhǎng)發(fā)育、免疫、神經(jīng)傳導(dǎo)和心血管響應(yīng)等。而近年來(lái)，no在植物體內(nèi)的生理學(xué)作用得到科學(xué)家們的廣泛關(guān)注，如種子萌發(fā)、生根、氣孔開(kāi)關(guān)、開(kāi)花結(jié)果以及抗性響應(yīng)等。其中，no參與了許多植物抗病過(guò)程，例如抗細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)和病毒等等。其中，人們對(duì)于植物抗病的研究多集中于雙子葉植物，如擬南芥、煙草和番茄等，而且大多研究都限于細(xì)菌、真菌和寄生蟲(chóng)，抗病毒方面的研究相對(duì)較少。這就造成了雖然理論方面的研究很豐富，但是no對(duì)于水稻小麥等經(jīng)濟(jì)作物抗病毒病機(jī)制卻仍是不足。有研究發(fā)現(xiàn)no似乎可以和植物體內(nèi)的一些激素相互作用共同誘導(dǎo)植物對(duì)病原物的抗性，如褪黑素(mt)、水楊酸(sa)、茉莉酸(ja)、乙烯(et)和脫落酸(aba)等激素水平，誘導(dǎo)植物體內(nèi)的抗病原物相關(guān)基因的上調(diào)。這說(shuō)明no可以促進(jìn)植物對(duì)病原物侵染的抗性，并且該過(guò)程中可能存在多種分子機(jī)制，需要我們進(jìn)一步研究證明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明針對(duì)上述研究背景，以水稻為研究對(duì)象，一定梯度濃度的no供體處理后的發(fā)病情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)照組水處理，發(fā)現(xiàn)no處理后日本晴的發(fā)病率明顯低于對(duì)照組，其中100μm時(shí)效果達(dá)到最好。本發(fā)明提供了利用no降低水稻條紋葉枯病發(fā)病率的方法，利用該方法可以調(diào)高水稻對(duì)rsv的抗性，可應(yīng)用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、科研和環(huán)保等眾多領(lǐng)域，更加經(jīng)濟(jì)環(huán)保地降低病害造成的糧食損失。

附圖說(shuō)明：

圖1健康水稻植株與水稻條紋葉枯病植株

圖2dot-elisa檢測(cè)灰飛虱帶毒率結(jié)果

圖3no處理后與對(duì)照組發(fā)病率差異(nd(nodetected)指未被檢測(cè)到；con指對(duì)照；不同字母表示在p＜0.05水平上存在組間差異)。

具體實(shí)施方式：

下面實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法。

實(shí)施例1，利用no預(yù)處理水稻調(diào)查其病情的方法

1、植物材料、病毒分析以及侵染方法

日本晴(oryzasatival.cv.nipponbare)種子首先用0.1％hgcl2消毒1h；然后用去離子水沖洗干凈，25℃浸種2d，催芽1d；催芽后的種子點(diǎn)播于1l燒杯中培養(yǎng)，每杯40粒，每隔兩天澆灌適量的hoagland營(yíng)養(yǎng)液，光照14h，黑暗10h，溫度28±1℃。

攜帶rsv和無(wú)毒灰飛虱飼養(yǎng)于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所養(yǎng)蟲(chóng)室。一齡幼蟲(chóng)孵化后分養(yǎng)于健康的武育粳3號(hào)(oryzasatival.cv.wuyujingno.3)水稻苗上，置于25℃養(yǎng)蟲(chóng)室中，三齡至四齡大的灰飛虱可以用來(lái)感染水稻幼苗，使用前其帶毒率用斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(dot-elisa)測(cè)定(圖2)。

3、不同處理下的發(fā)病情況

14d左右的水稻秧苗，在其土壤較干燥的情況下，分別施加dh2o、不同濃度snp溶液(10，50，100，500，1000μm)各30ml(snp為一種no特異性供體，購(gòu)于sigma-aldrich)。黑暗下過(guò)夜處理12h，按4頭的有效接種蟲(chóng)量/苗接毒，接種3d。隨后將蟲(chóng)小心掃出，水稻秧苗室內(nèi)緩養(yǎng)1d，再移栽至大田，正常管理。1個(gè)月左右查看發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率。重復(fù)三次。

如表中所示，我們發(fā)現(xiàn)相比于對(duì)照組，no處理能有效的緩解水稻條紋葉枯病病情，在一定范圍內(nèi)以濃度依賴方式降低發(fā)病率，其中在100μm時(shí)效果最好，降低大約23.30％的發(fā)病率(p＜0.05)?？梢缘玫浇Y(jié)論，外源添加no可以在很大程度上降低水稻條紋葉枯病的發(fā)病率。進(jìn)一步數(shù)據(jù)分析如圖3所示。

上述實(shí)施不以任何形式限定本發(fā)明。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
一種利用一氧化氮(Nitric?oxide，NO)或者NO供體預(yù)處理水稻提高其對(duì)水稻條紋病毒(Rice?stripe?virus，RSV)抗性的方法，其特征在于：NO供體硝普鈉(Sodium?nitroprusside，SNP)濃度為10μM?1mM，預(yù)處理水稻時(shí)間是接種前12小時(shí)。利用該方法可以調(diào)高水稻對(duì)條紋病毒(Rice?strip?virus，RSV)的抗性，可應(yīng)用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、科研和環(huán)保等眾多領(lǐng)域，更加經(jīng)濟(jì)環(huán)保地降低該病害造成的糧食損失。

技術(shù)研發(fā)人員：周彤;周益軍;盧榮飛;杜琳琳;蘭瑩;孫楓
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：2017.06.09
技術(shù)公布日：2017.10.27