專利名稱：：3,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d]并1,2,3,5-四嗪-8-甲酸苯磺?；辉鄣趸ヮ?..的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及替莫唑胺偶聯(lián)衍生物，具體為呋咱氮氧化物類一氧化氮供體(簡稱NO供體，下同)通過酯鍵或酰胺鍵與替莫唑胺偶聯(lián)的化合物。本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：替莫唑胺(簡稱TM，下同)，英文名稱為temozolomide，化學(xué)名為3,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d]并1，2，3,5-四嗪-8-甲酰胺，由Schering-plough公司研制開發(fā)，1999年8月11日經(jīng)FDA批準(zhǔn)在美國上市，是治療腦膠質(zhì)瘤和惡性黑色素瘤的抗癌新藥。這種口服細(xì)胞毒性烷化劑由于其毒性小、耐受性好而在膠質(zhì)細(xì)胞瘤治療中邁出重要的一步。其口服后可被完全吸收，生物利用度高，組織分布好，可透過血腦屏障。在中樞系統(tǒng)達(dá)到有效的藥物濃度，在治療腦膠質(zhì)瘤上效果顯著。替莫唑胺對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤，尤其對最為常見的多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤作用顯著，在臨床前研究中發(fā)現(xiàn)，該藥在酸性環(huán)境中穩(wěn)定，可以透過血腦屏障，生物利用度高，組織分布好。此外，替莫唑胺對白血病、黑色素瘤、淋巴瘤及實(shí)體瘤也有效(RagabMH.Improvedcancertreatmentwithtemozolomide[P].AU200039244,2000-3-27)，無論是在腫瘤響應(yīng)率，還是在患者存活率和耐受性都有良好的效果，更重要的是患者的生活質(zhì)量均明顯優(yōu)于現(xiàn)有常用藥物丙卡巴肼(馬培奇.腦瘤治療新藥——替莫唑胺[.I].CW"ewJow""/O/MWd"a/GW/A,2001，3(4):298)。雖然替莫唑胺在臨床治療上有效提高了腦癌患者的生活質(zhì)量，但并沒有顯著延長患者的生命，平均存活時(shí)間依然不足一年(陳步東，楊玉山.替莫唑胺治療顱內(nèi)惡性膠質(zhì)瘤療效觀察[J].中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志，2004，4(4):220-223)。瑞士Vaudois大學(xué)中心醫(yī)院Hegi博士等人發(fā)現(xiàn)替莫唑胺治療的成效與細(xì)胞內(nèi)甲基鳥嘌呤化轉(zhuǎn)移酵素(MGMT)的活性有關(guān)，若癌細(xì)胞的MGMT喪失活性，則替莫唑胺的治療就有顯著成效，反之，則沒有明顯的治療效果。因此研究者們希望有其他治療方法聯(lián)合治療或?qū)ζ浣Y(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾從而改善替莫唑胺的療效。NO是體內(nèi)重要的信使物質(zhì)和效應(yīng)分子，參與了多種生理和病理反應(yīng)，具有廣泛的生理功能。NO供體藥物在體內(nèi)通過釋放高濃度的NO，產(chǎn)生細(xì)胞毒性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，阻止腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移起到抗腫瘤的作用。20世紀(jì)90年代初，Nathan等研究發(fā)現(xiàn)NO在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用(C.F.Nathan,J.B.Hibbs，etal.Roleofnitricoxidesynthesisinmacrophageantimicrobialactivity[J].CwrOpZ"iwww"o/.1991,3(1):65-70.)。由于NO是氣體物質(zhì)，在體內(nèi)半衰期比較短，在水溶液中不穩(wěn)定，不方便利用，越來越多的研究集中于NO供體(M.Tsumori，J.Tanaka,K.Koshimura，etal.Cytotoxiceffectofnitricoxideonhumanhematologicalmalignantcells[J].XctaPo/，2002，49(1):139-144.)。目前為止，除硝酸酯，亞硝酸酯和硫代亞硝酸酯外，人們發(fā)現(xiàn)更多的化合物具有NO釋放活性。呋咱氮氧化物(Furazanoxide,艮卩2,5-oxidiazole-2-oxide，簡稱Furoxan)是近年應(yīng)用于新藥研究的又一NO供體，F(xiàn)uroxan在體內(nèi)釋放NO需要巰基的參與，所有的含巰基的化合物都可以起到輔助的作用，因此不易引起耐受性(FeelischM，SchonafingerKandNoackE.Thiol-mediatedgenerationofnitricoxideaccountsforthevasodilatoractionoffuroxans.B/oc/e/w尸/uwmaco/，1992,44(6):11491157)。用呋咱氮氧化物修飾替莫唑胺形成新的抗癌化合物，從而改善目前替莫唑胺臨床應(yīng)用中存在的缺陷迄今沒有進(jìn)行過任何報(bào)道。本發(fā)明的目的之一是對替莫唑胺進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，提供新的抗癌化合物，即3，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d]并l，2，3,5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯類化合物。本發(fā)明的另一目的是提供該類化合物的制備方法。本發(fā)明的還一目的是提供該類化合物在制備抑制細(xì)胞凋亡或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)施。本發(fā)明的化合物具有以下通式通式(II)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，R代表垸烴基或芳烴基。優(yōu)選地，R代表C2-20垸烴基。更優(yōu)選地，R分別代表-(CH2)n-，n=3~18;p-CH2-Ph-;o-CH2-Ph-;m-CH2-Ph-;
發(fā)明內(nèi)容-CH(CH3)CH2CH2-。最佳地，R分別代表-(CH2)n-,『318;p-CH2-Ph-;-CH(CH3)CH2CH2-。其對應(yīng)關(guān)系如表1所示表l:IIwo與R的對應(yīng)關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本發(fā)明的藥物通過以下方法予以制備(1)通過苯硫酚的醚化、氧化、環(huán)化制得側(cè)鏈苯磺酰基呋咱氮氧化物(na);(2)以3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][l,2,3，5]四嗪-8-甲酰胺為原料合成3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][l，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)，再經(jīng)酰氯化，制得3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][1，2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b);(3)側(cè)鏈苯磺?；辉鄣趸?IIa)同3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][l,2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)通過肖滕-鮑曼(Schotten-Baumann)法得到3，4_二氫_3-甲基4-氧代咪唑[5，l-d]并l，2，3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯類化合物(II)。其中，側(cè)鏈苯磺酰基呋咱氮氧化物(IIa)可通過苯硫酚醚化、氧化、環(huán)化反應(yīng)制備(反應(yīng)式如下)，具體參見文獻(xiàn)KenneyWJ，WalshJA，DavenportDA.Anacid-catalyzedcleavageofsulfoxides[J].JAmChemSoc,1961，83(19):4019-4022;Fa麗WV.The3,4-bisarenesulphonylfuroxans[J].JChemSoc,1964，(3):904-906;KelleyJL，McleanEW，WiiliardKF.Synthesisofbis(arylsulfonyl)ftiroxansfromarylnitromethylsulfones[J].JHeterocyclChem,1977，14(8):1415-1416;李瑞文，張奕華，季暉，等.苯磺酰基呋咱氮氧化物與雙氯酚酸偶聯(lián)化合物的合成及抗炎活性[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，36(11):821-826。具體反應(yīng)流程如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中Ha卜IIa2o與R的對應(yīng)關(guān)系如表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][l,2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b:)的制備可通過下面的方法以3-甲基4-氧代咪唑[5，l-d][l，2，3，5]四嗪-8-甲酰胺(替莫唑胺)為原料，按照[WangYF.MalcolmFQStevens,AntitumorImidazotetrazines35.NewSyntheticRoutestotheAntitumorDrugTemozolomide[J]，JOrgChem，1997，62(21):7288-7294.]的方法合成中間體化合物3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-(1][1，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)，再按照羧酸制備酰氯的方法即將3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][l，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)溶于15ml二氯亞砜中，加入兩滴DMF，攪拌加熱回流2h，濃縮除去二氯亞砜后，加入15ml甲苯洗滌后濃縮得到3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-dj[1,2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)，收率68%，m.p.141.5143.8°C。具體反應(yīng)流程如下媽OH<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>側(cè)鏈苯磺?；辉鄣趸?IIa)與3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][1，2，3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)通過肖滕-鮑曼(Schotten-Baumann)法制得3，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，卜d]并1，2,3，5-四嗪-8-甲酸苯磺?；辉鄣趸ヮ惢衔?II)，即本發(fā)明的目標(biāo)化合物。具體的反應(yīng)流程為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>、OOIIaII本發(fā)明的3，4-二氫-3-甲基-4氧代咪唑[5，1-d]并l，2，3，5-四嗪-8-甲酸苯磺?；辉鄣趸ヮ惢衔锟梢种萍?xì)胞凋亡或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。本發(fā)明基于替莫唑胺本身的抗腫瘤作用，結(jié)合NO誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，應(yīng)用藥物設(shè)計(jì)的基本理論，設(shè)計(jì)合成結(jié)構(gòu)類型新穎的另一具有NO釋放活性的NO供體化合物，即3，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d]并l,2,3，5-四嗪-8-甲酸苯磺?；辉鄣趸ヮ惢衔?。在抗癌活性試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物在同樣的條件下對于六種癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒性要大，相同劑量下對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(SKMG4)的毒性均優(yōu)于替莫唑胺，其中化合物113對DU145(colon)，HCT-15,Lncap，PC-3，HL-60，SKMG-4六種人體瘤細(xì)胞株的生長具有一定的抑制作用，腫瘤細(xì)胞存活率均在10%左右?；衔颕l5對直腸癌細(xì)胞株(HCT-15)具有顯著的抑制作用，說明此化合物具有潛在的抗直腸癌的活性，并且這些化合物還表現(xiàn)出一定的抗白血病的活性，其中Il2和Il3兩種化合物的作用比較明顯，值得深入研究。具體實(shí)施例方式以下通過具體實(shí)施例和試驗(yàn)例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，不以任何形式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。實(shí)施例l3,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l,2，3，5-四嗪-8-甲酸3-(3-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丙酯(IIO的制備在干燥的單口燒瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][1，2，3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將3-(3-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丙醇(IIa,)3g(lOmmol)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用200—300目硅膠柱層析[洗脫液為乙酸乙酯石油醚=1:6(v:v)]，得到白色固體2.23g,收率46.8%,mp.m.4174.5。C。ESI-MSm/z:499.6[M+23]+;IR(KBr,v(cm")):3123,1558(芳環(huán))，1724(C=0)，1609(C=N),1453,1166(S=0),1383,1354(N=N),1250，997(C-O);'H-NMRS:2.44(m，2H，CH2),4.04(s,3H,CH3),4.70(s，2H，OCH2)，4.66(t，2H,CH20),7.58(t,2H,ArH),7.73(t,H，ArH)，8.02(d，2H,屈)，8.46(s，H，CH);ElementalAnalysisC17H15N708SFound:(%)C42.94,H2.93，N20.65;Calcd:(%)C42.77，H3.14，N20.55。實(shí)施例23，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑5,l-dl并l，2,3，5-四嗪-8-甲酸4-(3-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丁酯(Il2)的制備在干燥的單口燒瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][1，2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將4-G-苯磺酰基-l,2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧丁醇(IIa2)3g(lOmmol)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用2()0—300目硅膠柱層析[洗脫液為乙酸乙酯石油醚(609(TC"l:l(v:v)]，得到白色固體2.23g,收率45.7%，mp.163.8~165.5°C。ESI-MSm/z:491.6[M+l]+;IR(KBr，v(cm—')):3136，1551(芳環(huán))，1752(C=0)，1602(C=N)，1396,1171.4(S=0)，1385，1308(N=N)，1241,997(C-O);'H-NMRS:2.09(m,4H，CH2),4.01(S,H,CH3)，4.54(t,2H，CH20)，4.58(t，2H,OCH2)，7.58(t,2H，ArH)，7.71(t，H，ArH),8.02(s，H，ArH)，8.05(d,2H，ArH),8.44(s，H，CH3);ElementalAnalysisC18H17N708SFound:(%)C43.81,H3.40,N19.85;Calcd:(%)C43.99，H3.46，N19.96。實(shí)施例33,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d]并1，2,3，5-四嗪-8-甲酸(3-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧-3-丁酯(113)的制備在干燥的單口燒瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][L,2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將3-苯磺?；?l,2,5-噁二唑-2-氧化物4-)氧-3-丁醇(IIa3)3g(lOmmol)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用200—300目硅膠柱層析[洗脫液為乙酸乙酯石油醚(6090'C戶l:l(v:v)]得白色固體，收率51.2%，mp137.6139.3。C。ESI-MSm/z:491.6[M+l]+;1R(KBr，v(cm")):3113，1556(芳環(huán))，1755(C=0),1614(C=N),1456,1166.8(S=0),1385，1352(N=N)，1240，1048(C-O);里H-醒RS:1.56(d,3H,CH3)，2.36(m，2H，CH2),4.03(s，3H,CH3)，4.64(t，2H，CH20)，5.25(m,H，CH),7.62(t，2H，ArH)，7.71(t，H，ArH)，8.02(d，2H，緒)，8.44(s，H，CH);ElementalAnalysisC18Hi7N708SFound(%):C43.69,H3.59,N19.74;Calcd(%):C43.99，H3.46，N19.96。實(shí)施例43,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l，2，3，5-四嗪-8-甲酸5-(3-苯磺?；?1,2,5-噁二唑-2氧化物-4-)氧戊酯(II4)的制備在干燥的單口燒瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][1，2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將3g(lOmmol)5-(3-苯磺酰基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧戊醇(Ha4)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用200—300目硅膠柱層析[洗脫液為乙酸乙酯-正己烷(l:5)]，重結(jié)晶得白色絮狀固體，收率51.2%，mp134.5~136.2。C。ESI-MSm/z:527.6[M+23]+;IR(KBr，v(cm")):3137，1556(芳環(huán))，1729(C=0)，1605(C=N)，1456,1173(S=0),1360(N=N)，1241，1049(C-0);'H-NMRS:1.72(m,2H，CH2)，L91(m,2H，CH2)，L97(m,2H，CH2)，4.03(s，3H,CH3)，4.45(t,2H.CH20)，4.54(t,2H，OCH2)，7.61(t，2H,ArH),7.74(t,H,ArH)，8.00(d，2H，ArH),8.44(s,H，CH);ElementalAnalysisCi9Hl9N708S:Found(%):C45.04，H3.80，N19.62;Calcd(%):C45.15,H3.76,N19.40。實(shí)施例53，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l，2，3，5-四嗪-8-甲酸3-(3-苯磺?；?1,2,5-噁二唑-2氧化物-4-)氧苯甲酯(Hs)的制備在干燥的單口燒瓶中加入3_甲基-4-氧代咪唑[5，l-d][1，2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14gUOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將3-G-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧苯甲醇(IIa5)3g(lOmmol)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用200_300目硅膠柱層析[洗脫液為二氯甲院:石油醚(609(rC^9:l(v:v)]得白色固體，收率51.2%,mp107.5-1IO.(TC。ESI-MSm/z:542，+23]+;IR(KBr,v(cm'))::3124,1542(芳環(huán))，1740,1712(C=0),1626(C,，1451,1166(S=0)，1396,1350(N=N)，1258，1052(C-O);'H誦醒RS:3.89(s，3H,CH3),5.48(s,2H，CH2),7.46(d,2H,ArH)，7.63(d，2H,ArH),7.77(t,2H,ArH),7.90(t，H，ArH)，8.02(d,2H，ArH)，8.87(s，H,CH);ElementalAnalysisC21H15N708S:Found(%):C47.73，H3.05，N18.61.Calcd(%):C48.00，H2.86,N18.67。實(shí)施例63，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d併l,2,3,5-四嗪-8-甲酸12-(3-苯磺?；?l，2,5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十二酯(1112)的制備在干燥的單口燒瓶中加入3_甲基-4-氧代咪唑[5,1-d][1,2，3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將12-(3-苯磺?；?1,2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十二醇(IIa,2)3g(10mmol)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用200-300目硅膠柱層析[洗脫液為二氯甲垸石油醚(609(TC"5:l(v:v)]得白色固體，收率55.8%，mp123.6.5~125.7°C。ESI-MSm/z:625.8[M+23]+;IR(KBr,v(cm—1))::3138，1557(芳環(huán))，1720(C=0)，1603(C=N)，1456，1170(S=0)，1362(N=N)，1240，1048(C-O);'H-NMRS:1.70(m，2H，CH2)，1.89(m,2H，CH2)，1.93(m，16H,8xCH2),L97(m，2H，CH2)，4.02(s，3H，CH3)，4.44(t，2H，CH20),4.55(t，2H，OCH2),7.6l(t，2H,ArH)，7.74(t，H，ArH)，8.00(d，2H，ArH)，8.44(s，H，CH);ElementalAnalysisC26H33N708S:Found(%):C51.69,H5.27，N15.97.Calcd(%):C51.74,H5.47,N16.25。實(shí)施例73，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑5,l-dl并l，2，3,5-四嗪-8-甲酸18-(3-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十八酯(1118)的制備在干燥的單口燒瓶中加入3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][1,2,3，5]四嗪-8-甲酰氯(b)2.14g(lOmmol)，加入四氫呋喃使之溶解，攪拌下將18-(3-苯磺?；?l，2，5-噁二唑-2氧化物-4-)氧十八醇(IIa,8)3g(10mmol)溶于20ml四氫呋喃溶液，攪拌下逐滴加入2ml2mol/L的K2C03溶液，反應(yīng)3hr后，過濾濃縮，加入100ml水，用3X100ml乙酸乙酯萃取，合并萃取液用2X100ml水洗，100ml飽和食鹽水洗后，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮后用200-300目硅膠柱層析[洗脫液為三氯甲烷石油醚(609(TC)-6:l(v:v)]得白色固體，收率47.6%,mp205.3~207.1°C。ESI-MSm/z:733.4[M+23]+;IR(KBr，v(cm"))::3139，1556(芳環(huán))，1722(C=0)，1602(C=N)，1455,1171(S=0),1361(N=N),1244，1044(C-O);'H-醒RS丄71(m,2H,CH2),1.90(m,2H,CH2),1.94(m,28H,14xCH2),1.98(m，2H,CH2)，4.02(s,3H，CH3),4.44(t,2H,CH20)，4.55(t,2H,OCH2)，7.61(t,2H,ArH)，7.74(t,H，ArH)，8.00(d,2H，ArH)，8.44(s,H，CH);ElementalAnalysisC32H45N708S:Found(%):C54.24,H6.27，N14.07.Calcd(0/0):C54.08,H6.34，N13.80。試驗(yàn)例1抗癌活性試驗(yàn)一.材料1.試驗(yàn)材料癌細(xì)胞株及培養(yǎng)基DU145(colon),HCT-15(colon)，Lncap(prostate),PC-3(prostate),HL-60(promyelocyticleukemia),SKMG-4(glioma)用RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco-BRL,GrandIsland,NY,USA)配成懸液，加入10。/。經(jīng)加熱滅活的胎牛血清(FCS,Gibco),100IU/ml青霉素lOOIU/ml鏈霉素;T47D(breast),MDA-MB231(breast)(ATCC)，同樣用RPMI1640培養(yǎng)液配成懸液，加入10%經(jīng)加熱滅活的胎牛血清，100IU/ml青霉素及100ng/ml鏈霉素，另加5嗎/ml胰島素。癌細(xì)胞株均購買于美國組織培養(yǎng)中心(ATCC,Rocksville，Maryland,USA).2.試布J:MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2陽yl]-2，5-diphenyltetrazoliumbromide;Sigma)3.儀器96孔平板(BectonDickinsonLabware，NJ，USA)，自動(dòng)化分光光度平板讀數(shù)計(jì)(DynatechMR5000)。4.藥物按照實(shí)施例15方法制備的II,U5，其中替莫唑胺購于江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司。二.實(shí)驗(yàn)方法向96孔平板的每孔內(nèi)加入O.lmL含有1000個(gè)細(xì)胞的由RPMI1640培養(yǎng)液配成的懸浮液，然后于37°C,(:02(5%)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，加入含有不同受試化合物的培養(yǎng)基，于37°C,C02(5%)，空氣，100%濕度培養(yǎng)4天，每孔加入5(^1MTT溶液(2mg/ml),37。C下培養(yǎng)4小時(shí)，吸出上清液，每孔加入150plDMSO，振搖15分鐘，平板通過自動(dòng)化分光光度平板讀數(shù)計(jì)，于540nm波長處測量每個(gè)孔的光密度(OD)。以孔中細(xì)胞未加受試化合物測得的光密度作為對照品，以下式分別計(jì)算每個(gè)化合物的細(xì)胞存活率，細(xì)胞生存能力與藥物濃度作曲線，細(xì)胞存活率為50%即為1(:5()值。(其中加藥細(xì)胞孔OD值是孔中加入細(xì)胞、藥物時(shí)測得的OD值，空白藥物孔OD值是孔中加入藥物，未加細(xì)胞時(shí)測得的OD值，對照細(xì)胞OD值是孔中加入細(xì)胞，未加藥物時(shí)測得的OD值)。加藥細(xì)胞OD值一空白藥物孔OD值細(xì)胞存活率(％>=m^^m^u^xlO0%對照細(xì)胞OD值三.實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用MTT法，研究了5個(gè)II類目標(biāo)化合物于25pg/mL時(shí)體外對六種人體瘤細(xì)胞株的生長抑制作用，其中包括兩種直腸癌細(xì)胞株(DU-145HCT-15,)，兩種前列腺癌細(xì)胞株(Lnc叩,PC-3)，早幼粒白血病細(xì)胞株(HL-60),神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(SKMG-4),并與替莫唑胺(TM)作了對比。結(jié)果見表3。表3各癌細(xì)胞株在替莫唑胺及II類化合物的25pg/mL濃度下的細(xì)胞存活率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)論從抗癌活性試驗(yàn)結(jié)果可以看出，在同樣的條件下，化合物I13對DU145(colon)，HCT-15.Lncap，PC-3，HL-60,SKMG-4六種人體瘤細(xì)胞株的生長均具有一定的抑制作用，腫瘤細(xì)胞存活率均在10%左右?；衔颕l5對直腸癌細(xì)胞株(HCT-15)具有顯著的抑制作用，說明此化合物具有潛在的抗直腸癌的活性。II類化合物與替莫唑胺相比，在抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞方面有了很大的改進(jìn)，并且這些化合物還表現(xiàn)出一定的抗白血病的活性，其中112和113兩種化合物的作用比較明顯。權(quán)利要求1.通式(II)的化合物id="icf0001"file="A2006101297900002C1.gif"wi="74"he="28"top="46"left="39"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R代表烷烴基或芳烴基。2.權(quán)利要求l所述的化合物，其中，R代表C2.20烷烴基。3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R代表-(CH2)n-,r^318,-CH(CH3)CH2CH2-。4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R代表p-CH2-Ph-，o-CHrPh-，m-CH2-Ph-。5.權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，包括以下步驟(1)通過苯硫酚的醚化、氧化、環(huán)化制得側(cè)鏈苯磺?；辉鄣趸?na);(2)以3-甲基-4-氧代咪唑[5,l-d][l,2，3，5]四嗪-8-甲酰胺為原料合成3-甲基-4-氧代咪唑[5，l.-d][1，2，3，5]四嗪-8-甲酸(a)，再經(jīng)酰氯化，制得3-甲基--4-氧代咪唑[5,卜d][1，2，3，5]四嗪_8-甲酰氯(b);(3)側(cè)鏈苯磺?；辉鄣趸?IIa)同3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d][l,2,3,5]四嗪-8-甲酰氯(b)通過肖滕-鮑曼(Schotten-Baumann)法得到3,4_二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，l-d]并l，2，3，5-四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯類化合物(11)。6.權(quán)利要求14任一所述化合物在制備抑制細(xì)胞凋亡或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種替莫唑胺的衍生物，具體涉及呋咱氮氧化物類一氧化氮供體通過酯鍵或酰胺鍵與替莫唑胺偶聯(lián)的化合物，即3，4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑[5，1-d]并1，2，3，5四嗪-8-甲酸苯磺酰基呋咱氮氧基酯類化合物。該化合物由替莫唑胺和呋咱氮氧化物類一氧化氮供體在K₂CO₃中反應(yīng)制得，具有良好的抑制細(xì)胞凋亡或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。文檔編號C07D487/00GK101190917SQ200610129790公開日2008年6月4日申請日期2006年11月30日優(yōu)先權(quán)日2006年11月30日發(fā)明者微周,張廣明,蘭王申請人:天津天士力集團(tuán)有限公司