本發(fā)明涉及植物擴繁技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用細菌進行多肉植物繁殖的方法及該細菌的用途。

背景技術(shù)：

多肉植物又稱多漿植物、肉質(zhì)植物，是指在植物營養(yǎng)器官中至少有一器官具有發(fā)達的薄壁組織以儲藏水分，外型比一般植物顯得肥厚、膨大和多汁。2012年根據(jù)瑞士國際多肉植物協(xié)會專家的統(tǒng)計，多肉植物隸屬于83科、690屬，約12500種。我國常見栽培的有60余科，逾萬種。多肉植物最早風(fēng)靡于日本、韓國等東亞國家，目前在這些國家已經(jīng)形成了完整的、較成熟的培育篩選產(chǎn)業(yè)。近年來，國內(nèi)多肉植物市場還在持續(xù)不斷升溫，但在多肉植物的科研領(lǐng)域還處于初級階段，大部分集中在引種馴化階段，也有人開始了組培、育種等方面的研究。北京、上海、廈門、天津等地的一些植物園和經(jīng)營者在多肉植物的科研方面走在了前列，尚未形成技術(shù)優(yōu)勢，無法與國外的多肉產(chǎn)品相抗衡。目前，雖然有部分企業(yè)陸續(xù)開始通過組織培養(yǎng)途徑開展多肉植物的快速繁殖，但是受困于多肉植物材料易玻璃化和生長速度緩慢等技術(shù)難題，無法建立組織培養(yǎng)體系。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提供一種多肉植物繁殖的方法，有效地避免了多肉植物組織培養(yǎng)過程中常見的玻璃化和生長速度緩慢等問題。

進一步，本發(fā)明還公開了一種細菌的用途。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

利用細菌進行多肉植物繁殖的方法，所述的細菌是放線菌homoserinibactergongjuensis，該方法包括如下步驟：

(1)外植體滅菌及誘導(dǎo)

取外植體消毒滅菌后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)產(chǎn)生胚性愈傷組織；

(2)接菌與萌發(fā)

將homoserinibactergongjuensis細菌與胚性愈傷組織共同接種于萌發(fā)培養(yǎng)基中，形成正常叢生芽；

其中，萌發(fā)培養(yǎng)基的組成為：1/2ms培養(yǎng)基+naa0.5mg·l^-1+瓊脂7g·l^-1+蔗糖30g·l^-1，ph值為5.8；

(3)壯苗與移栽

將步驟(2)培養(yǎng)的正常叢生芽接種于壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)為可移栽的叢生苗，進行移栽即可。

進一步，本發(fā)明還提供一種放線菌homoserinibactergongjuensis在多肉植物繁殖培養(yǎng)中用于防止其玻璃化的用途。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明打破常規(guī)植物組織培養(yǎng)要求的無菌環(huán)境，通過在多肉植物組織培養(yǎng)過程中接種共生細菌homoserinibactergongjuensis，能有效解決多肉植物組織培養(yǎng)過程中常見的玻璃化和生長速度緩慢等問題。

本發(fā)明所涉及的細菌homoserinibactergongjuensis為放線菌，該細菌于2014年6月首次在《journalofmicrobiology》雜志上公開，具體見第52卷第6期，527-533頁《diaminobutyricibactertongyongensisgen.nov.,sp.nov.andhomoserinibactergongjuensisgen.nov.,sp.nov.belongtothefamilymicrobacteriaceae》。

細菌homoserinibactergongjuensis可以通過市場上購買獲得，也可以由申請人重慶市風(fēng)景園林科學(xué)研究院長期提供。

附圖說明

圖1為感染homoserinibactergongjuensis細菌的爪系多肉植物生長表現(xiàn)；

圖2為未感染homoserinibactergongjuensis細菌的爪系多肉植物生長表現(xiàn)。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和具體實施方式對本發(fā)明作進一步說明。

實施例一：

多肉植物繁殖的方法，包括如下步驟：

(1)外植體滅菌及誘導(dǎo)

將成熟種子置于無菌三角瓶中，用75％的乙醇浸泡30s，無菌水沖洗3-5次，然后用15％的次氯酸鈉溶液浸泡20min，無菌水沖洗3-5次。將滅菌后的種子接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基可采用常規(guī)培養(yǎng)基，本實施例中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：ms培養(yǎng)基+ba0.5～2mg·l^-1+瓊脂7g·l^-1+蔗糖30g·l^-1，ph值為5.8。其中，ba為6-芐氨基嘌呤。

滅菌后的種子在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)3個月后，逐漸長成完整植株，取該植株的葉片接種于繼代培養(yǎng)基中，1～3個月后，誘導(dǎo)產(chǎn)生胚性愈傷組織。該胚性愈傷組織多為玻璃化狀態(tài)。

繼代培養(yǎng)基可采用常規(guī)培養(yǎng)基，本實施例中，繼代培養(yǎng)基的組成為：ms培養(yǎng)基+ba0.5～2mg·l^-1+瓊脂7g·l^-1+蔗糖30g·l^-1，ph值為5.8。

采用種子作為外植體進行滅菌處理，其消毒滅菌相對于葉片較容易，將滅菌后的種子接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，3個月即可生長為完整植株。該植株處于無菌條件下，取該植株的葉片再進行繼代培養(yǎng)，可獲得大量的無菌材料。

(2)接菌與萌發(fā)

將homoserinibactergongjuensis細菌與胚性愈傷組織共同接種于萌發(fā)培養(yǎng)基中，2周后細菌菌落布滿培養(yǎng)基，顏色呈黃色透亮狀，培養(yǎng)基表面無明顯菌落。2個月后，胚性愈傷萌發(fā)出大量深綠色正常叢生芽。

可以將攜帶homoserinibactergongjuensis細菌的多肉植物組織與未感染該細菌的胚性愈傷組織共同接種于萌發(fā)培養(yǎng)基中；也可以將長有homoserinibactergongjuensis細菌的培養(yǎng)基與未感染該細菌的胚性愈傷組織共同接種于萌發(fā)培養(yǎng)基中。無論采用哪種方法，只要使誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織感染homoserinibactergongjuensis細菌即可。

其中，萌發(fā)培養(yǎng)基的組成為：1/2ms培養(yǎng)基+naa0.5mg·l^-1+瓊脂7g·l^-1+蔗糖30g·l^-1，ph值為5.8。其中，naa為萘乙酸。

下表為在1/2ms培養(yǎng)基中添加不同濃度naa的實驗效果對比，配方1、對比配方1和對比配方2中，ph值均保持為5.8.

0.5mg·l^-1naa是萌發(fā)培養(yǎng)基中的關(guān)鍵因素，它決定了homoserinibactergongjuensis細菌能否存活。爪系胚性愈傷能否萌發(fā)形成深綠色正常芽，取決于培養(yǎng)基中homoserinibactergongjuensis細菌能否正常生長。homoserinibactergongjuensis細菌有別于常規(guī)細菌，一是生長速度慢。接種后兩周表現(xiàn)出明顯生長，一般細菌接種后3-5天即可在培養(yǎng)基表面形成明顯菌落；二是對生長培養(yǎng)基的專一性強。homoserinibactergongjuensis細菌誘導(dǎo)萌發(fā)的深綠色正常芽在后期壯苗培養(yǎng)基中，會自然消失，homoserinibactergongjuensis細菌不會在培養(yǎng)基中蔓延生長。

感染homoserinibactergongjuensis細菌的爪系植物組織材料見圖1，由圖中可以看出，感染了homoserinibactergongjuensis細菌的爪系植物材料顏色呈黃色透亮狀，并有部分深綠色正常叢生芽萌發(fā)，生長較快。

未感染homoserinibactergongjuensis細菌的爪系植物組織材料見圖2。由圖中可以看出，未感染homoserinibactergongjuensis細菌的爪系植物材料顏色呈嫩綠色，并多為玻璃化狀態(tài)，分化出的正常芽呈黃色，生長緩慢。

(3)壯苗

將正常叢生芽以2～3個芽為一叢，接種于壯苗培養(yǎng)基中，7天后長出大量不定根，1個月后，長成株高為2cm，葉色深綠的叢生苗。

壯苗培養(yǎng)基的組成為：1/2ms培養(yǎng)基+ba0～0.5mg·l^-1+瓊脂7g·l^-1+活性炭0～1.0g·l^-1+蔗糖30g·l^-1，ph值為5.8。

(4)移栽

將生長健壯的叢生苗洗去根部瓊脂后，種植于水洗椰糠中，1個月后，即可成活。

實施例二：

與實施例一不同的是，在本實施例中，外植體采用從母株采集的葉片，在進行滅菌之前，先對葉片進行預(yù)處理，具體方法如下：將從母株采集的葉片置于清潔、通風(fēng)、干燥的環(huán)境中，7天后，待葉柄傷口處形成保護層，于連續(xù)晴日的中午，將葉片置于肥皂水中浸泡20min，然后流水沖洗1h，之后在超凈工作臺中進行滅菌，滅菌方法與種子相同。最后將滅菌后的葉片接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，1～3個月后，在葉片傷口處形成胚性愈傷組織。

在進行葉片滅菌之前，先進行預(yù)處理，使葉柄傷口處形成保護層，防止葉片含水量太高而發(fā)生腐爛。將葉片作為誘導(dǎo)材料誘導(dǎo)產(chǎn)生胚性愈傷組織，不需要對植株進行培養(yǎng)，可直接獲取誘導(dǎo)材料，大大減少工作量及培養(yǎng)時間。

最后需要說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制技術(shù)方案，盡管申請人參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，那些對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本技術(shù)方案的宗旨和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。