本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)：

硒是人和動物體生長發(fā)育必需的微量元素，也是植物生長的有益元素。硒參與組成機體內(nèi)多種重要的功能酶，在人體中發(fā)揮著抗氧化、抗衰老、解毒排毒、防癌抗癌等多種重要的生物學(xué)功能，對維持人體健康和正常的生理代謝具有極為重要的作用。我國土壤硒資源分布不均衡且存在大面積的缺硒地區(qū)，這直接導(dǎo)致人體主要的硒來源——食物中的硒營養(yǎng)供應(yīng)不足，進而影響人體健康。

蚯蚓本身含有大量蛋白質(zhì)、種類豐富的氨基酸、維生素及礦質(zhì)元素等營養(yǎng)物質(zhì)，是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)來源材料及醫(yī)藥原料(俗稱“地龍”)。蚯蚓硒富集量大，并且可以通過生物轉(zhuǎn)化作用將無機硒轉(zhuǎn)化為有機硒，吸收富集及轉(zhuǎn)化效率較高。富硒蚯蚓可以用作畜禽、水產(chǎn)等的飼料，補充畜禽和水產(chǎn)品的營養(yǎng)需求，尤其是有機硒的需求；也可以作為提取高活性蛋白及抗腫瘤成分的醫(yī)藥原料，進而用于制作抗腫瘤藥物，具有極為重要的醫(yī)療藥用價值。目前富硒蚯蚓的培養(yǎng)方法一般為在基質(zhì)中添加較高濃度的硒，但高濃度硒長期作用會造成蚯蚓品種退化，繁殖率下降，只能培養(yǎng)一代或兩代，無法連續(xù)培養(yǎng)富硒蚯蚓，不能滿足富硒蚯蚓的長期培養(yǎng)和獲得。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中培養(yǎng)富硒蚯蚓過程中蚯蚓品種退化、繁殖率下降、無法連續(xù)培養(yǎng)的問題，為此提出一種富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法。

本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：

一種富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法，包括如下步驟：

(1)含硒基質(zhì)的制備：將發(fā)酵牛糞和菌渣按質(zhì)量比3:1混合均勻，然后加入亞硒酸鈉水溶液、調(diào)節(jié)含水量，得到硒濃度為10-20mg/kg的基質(zhì)，陳化后得到含硒基質(zhì)；

(2)在所述含硒基質(zhì)中引入原代成年蚯蚓培養(yǎng)，并在培養(yǎng)期間補充添加所述含硒基質(zhì)，待出現(xiàn)子一代幼蚓或蚓繭后取出原代蚯蚓，即得到第一代富硒蚯蚓；

(3)將步驟(2)中的子一代幼蚓或蚓繭繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)期間補充添加所述含硒基質(zhì)，待子一代蚯蚓成熟且出現(xiàn)子二代幼蚓或蚓繭后取出子一代成蚓，即得第二代富硒蚯蚓；

(4)將步驟(3)中的子二代幼蚓或蚓繭繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)期間補充添加所述含硒基質(zhì)，待子二代蚯蚓成熟且出現(xiàn)子三代幼蚓或蚓繭后取出子二代成蚓，即得第三代富硒蚯蚓。

步驟(1)中所述菌渣為蘑菇培養(yǎng)基料的殘渣，所述發(fā)酵牛糞和菌渣混合前分別過4mm篩。

步驟(1)中所述含水量為65-70％。

步驟(1)中所述陳化的時間為7-20d，溫度為12-28℃。

步驟(2)中所述原代蚯蚓為有環(huán)帶的成年赤子愛勝蚓。

步驟(2)中所述培養(yǎng)的溫度為12-28℃，時間為40-50d。

步驟(3)和(4)中所述培養(yǎng)的溫度為12-28℃，時間為45-52d。

所述補充添加的方法為：培養(yǎng)期間每隔15-20天進行添加。

步驟(2)-(4)所得富硒蚯蚓用清水洗凈，黑暗條件下清腸處理，冷凍干燥后保存。

本發(fā)明的有益效果為：

1、本發(fā)明采用低濃度硒培養(yǎng)赤子愛勝蚓，使蚯蚓具有較好的硒富集效率，實現(xiàn)富硒蚯蚓的連續(xù)培養(yǎng)，并且對蚯蚓產(chǎn)量和繁殖率基本無影響；蚯蚓體硒含量隨著蚯蚓代際繁衍而增高，這也為培育硒富集量更高的蚯蚓品種提供可能。

2、采用發(fā)酵牛糞和菌渣為基質(zhì)，菌渣的密度較小，能夠保證基質(zhì)良好的透氣性；同時蚯蚓的主要食物(發(fā)酵牛糞)的比例較高，可以消除菌渣分解時間長、短時間內(nèi)不能被蚯蚓充分利用的影響。本發(fā)明富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法適用于室外大田培養(yǎng)。

3、采用冷凍干燥處理富硒蚯蚓能夠最大限度的保留蚯蚓活性成分，減少后期加工過程中的損失。

4、蚯蚓體含有抗腫瘤和治療心血管疾病的物質(zhì)，適量硒也具有抗腫瘤和抗氧化等重要的生物學(xué)功能，因此，本發(fā)明收獲的富硒蚯蚓很可能具有蚯蚓和硒的雙重功能。采用本發(fā)明培養(yǎng)的蚯蚓具有更高的營養(yǎng)價值，可廣泛應(yīng)用于富硒蚯蚓氨基酸的生產(chǎn)，可作為畜禽及水產(chǎn)等飼料的硒補充劑，從中提取的含硒活性成分也能夠用于抗腫瘤藥物的生產(chǎn)，具有極為廣泛的應(yīng)用范圍和極大的應(yīng)用價值。

具體實施方式

本發(fā)明提出了一種富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法，以下實施例便于更好地理解本發(fā)明，但不限于本發(fā)明。

實施例1

富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法包括如下步驟：

(1)按照質(zhì)量比為3:1的比例稱取發(fā)酵牛糞和菌渣，分別過4mm篩，然后混合均勻，得到培養(yǎng)蚯蚓的基質(zhì)；

(2)將含有0.1g硒的亞硒酸鈉水溶液加入到10kg步驟(1)中的基質(zhì)中，加水調(diào)節(jié)基質(zhì)含水量至65％，于12-28℃陳化一周，得到硒濃度為10mg/kg的含硒基質(zhì)；

(3)在步驟(2)所述含硒基質(zhì)中引入原代成年蚯蚓，12-28℃溫度下培養(yǎng)，每隔15天添加所述含硒基質(zhì)，蚯蚓培養(yǎng)40天后，待出現(xiàn)子一代幼蚓或蚓繭后取出原代蚯蚓，即得到第一代富硒蚯蚓；

將得到的第一代富硒蚯蚓用清水洗凈后稱重，而后在黑暗條件下清腸處理24小時，冷凍干燥后測定蚓體硒含量；

(4)步驟(3)中的子一代幼蚓或蚓繭繼續(xù)在12-28℃溫度下培養(yǎng)，每隔15天添加所述含硒基質(zhì)，培養(yǎng)52天后，待子一代蚯蚓成熟且出現(xiàn)子二代幼蚓或蚓繭后取出子一代成蚓，即得第二代富硒蚯蚓；

將第二代富硒蚯蚓用清水洗凈后稱重，而后在黑暗條件下清腸處理24小時，冷凍干燥后測定蚓體硒含量；

(5)步驟(4)中的子二代幼蚓或蚓繭繼續(xù)在12-28℃溫度下培養(yǎng)，每隔15天添加所述含硒基質(zhì)，培養(yǎng)52天后，待子二代蚯蚓成熟且出現(xiàn)子三代幼蚓或蚓繭后取出子二代成蚓，即得第三代富硒蚯蚓；

將第三代富硒蚯蚓用清水洗凈后稱重，在黑暗條件下清腸處理24小時，冷凍干燥后測定蚓體硒含量。

得到的第一、二、三代蚯蚓單條重量分別為0.52g、0.49g、0.48g，凍干蚯蚓硒含量分別為28.10mg/kg、39.76mg/kg、61.29mg/kg(硒含量/蚯蚓干重)，可以看出：低硒濃度(10mg/kg)對蚯蚓生物量影響不大，蚓體硒富集量隨代際繁衍而增高。

實施例2

富硒蚯蚓連續(xù)培養(yǎng)的方法包括如下步驟：

(1)按照質(zhì)量比為3:1的比例稱取發(fā)酵牛糞和菌渣，分別過4mm篩，然后混合均勻，得到培養(yǎng)蚯蚓的基質(zhì)；

(2)將含有0.2g硒的亞硒酸鈉水溶液加入到10kg步驟(1)中的基質(zhì)中，加水調(diào)節(jié)基質(zhì)含水量至70％，于12-28℃陳化兩周，得到硒濃度為20mg/kg的含硒基質(zhì)；

(3)在步驟(2)所述含硒基質(zhì)中引入原代成年蚯蚓，12-28℃溫度下培養(yǎng)，每隔20天添加所述含硒基質(zhì)，蚯蚓培養(yǎng)40天后，待出現(xiàn)子一代幼蚓或蚓繭后取出原代蚯蚓，即得到第一代富硒蚯蚓；

將得到的第一代富硒蚯蚓用清水洗凈后稱重，而后在黑暗條件下清腸處理24小時，冷凍干燥后測定蚓體硒含量；

(4)步驟(3)中的子一代幼蚓或蚓繭繼續(xù)在12-28℃溫度下培養(yǎng)，每隔20天添加所述含硒基質(zhì)，培養(yǎng)52天后，待子一代蚯蚓成熟且出現(xiàn)子二代幼蚓或蚓繭后取出子一代成蚓，即得第二代富硒蚯蚓；

將第二代富硒蚯蚓用清水洗凈后稱重，而后在黑暗條件下清腸處理24小時，冷凍干燥后測定蚓體硒含量；

(5)步驟(4)中的子二代幼蚓或蚓繭繼續(xù)在12-28℃溫度下培養(yǎng)，每隔20天添加所述含硒基質(zhì)，培養(yǎng)52天后，待子二代蚯蚓成熟且出現(xiàn)子三代幼蚓或蚓繭后取出子二代成蚓，即得第三代富硒蚯蚓；

將第三代富硒蚯蚓用清水洗凈后稱重，在黑暗條件下清腸處理24小時，冷凍干燥后測定蚓體硒含量。

獲得的第一、二、三代單條蚯蚓生物量分別為0.51g、0.49g、0.46g，蚯蚓體硒含量分別為36.38mg/kg、90.73mg/kg、117.26mg/kg(硒含量/蚯蚓干重)，可以看出：低硒濃度(20mg/kg)對蚯蚓生物量影響不大，蚓體硒富集量隨代際繁衍而增高。