本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于組織冰凍切片保存的試劑盒。

背景技術(shù)：

組織切片是絕大多數(shù)形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)，不管是臨床病理診斷還是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究，都離不開組織形態(tài)學(xué)的支撐。常規(guī)的組織切片主要包括冰凍切片和石蠟切片，兩者的優(yōu)缺點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1、冰凍切片操作簡(jiǎn)單快捷，能較好地保存組織抗原，但易產(chǎn)生冰晶破壞組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并且組織切片不能太薄(10-100μm)；2、石蠟切片可將組織切得非常薄(3-5μm)；但操作繁瑣耗時(shí)，常導(dǎo)致組織抗原的丟失。

組織經(jīng)蔗糖浸泡后，可以避免冰凍切片時(shí)組織內(nèi)冰晶的產(chǎn)生。同時(shí)由于共聚焦顯微成像的發(fā)明，即便是針對(duì)較厚的組織切片時(shí)也能清晰地呈現(xiàn)組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)。因此在許多生命科學(xué)研究工作中，尤其是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，冰凍切片日益成為主導(dǎo)的組織切片。

組織冰凍切片雖有上述諸多優(yōu)勢(shì)，但在實(shí)際的研究工作中還存在以下致命缺點(diǎn)：組織塊(如1mm³大小)常?？梢郧谐鰩装購埱衅淮沃恍栌玫绞畯堊笥业慕M織切片，剩下的絕大多數(shù)切片來不及有效利用，主要是因?yàn)檫@些組織切片在一周內(nèi)會(huì)腐爛變質(zhì)，即便是加入疊氮鈉等防腐劑也很難保存一個(gè)月。如果是不重要的組織，存在這種缺點(diǎn)無關(guān)緊要；但針對(duì)珍貴的研究材料，任何組織切片的浪費(fèi)顯得尤為可惜。

有鑒于此，有必要提供一種能長(zhǎng)久保存組織冰凍切片的試劑盒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種用于組織冰凍切片保存的試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了一種用于組織冰凍切片保存的試劑盒，包括保存液及儲(chǔ)樣杯。

所述保存液包括以下組分：氯化鈉75mm(mmol/l)、氯化鉀1.5mm、十二水·磷酸氫二鈉5.6mm、磷酸二氫鉀1.0mm、疊氮化鈉3.1mm、乙二胺四乙酸2mm、45％的丙三醇(vol/vol)。

所述儲(chǔ)樣杯包括杯體與所述杯體配套密封的杯蓋，所述杯體是帶有底部、頂部開口大于底部的結(jié)構(gòu)，所述杯蓋蓋于所述杯體上時(shí)，所述杯蓋上有延伸出杯體的蓋耳。

所述杯體頂部設(shè)有外螺紋，與所述杯蓋上設(shè)有的內(nèi)螺紋密封。

所述杯體為圓柱形或方形。

所述杯蓋為軟膠頂蓋。

所述杯體的材質(zhì)為透明硬質(zhì)塑料。

所述杯體的容量為12-17ml。

所述杯體為圓柱形時(shí)，其底部直徑為1.3-1.8cm，高度為2.0-2.8cm，頂部直徑為1.4-2.0cm，高度為底部直徑的1.5-1.7倍。

所述保存液的量為200ml。

所述儲(chǔ)樣杯的量為100個(gè)。

由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

本發(fā)明的用于組織冰凍切片保存的試劑盒，配制簡(jiǎn)單，保存液的配制原料均為常規(guī)的生化試劑，使用方便，只需有冰箱即可，提高了珍貴樣本的利用率，為科研工作節(jié)省了人力成本和物質(zhì)成本。

本發(fā)明的用于組織冰凍切片保存的試劑盒，利用了丙三醇能保鮮的特性，將其與磷酸鹽緩沖液按適當(dāng)比例混合，同時(shí)加上其它防腐劑和金屬離子螯合劑，使其不僅能長(zhǎng)久地保存組織冰凍切片(長(zhǎng)達(dá)兩年以上)，而且其較低的粘稠度也方便研究人員使用。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例的用于組織冰凍切片保存的試劑盒中儲(chǔ)樣杯的杯體的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2是本發(fā)明實(shí)施例的用于組織冰凍切片保存的試劑盒中儲(chǔ)樣杯的杯蓋的結(jié)構(gòu)示意圖。

其中：1為杯體，2為杯蓋，3為蓋耳。

具體實(shí)施方式

為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

本發(fā)明實(shí)施例所用原料如下：氯化鈉(nacl)，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯化鉀(kcl)，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；十二水·磷酸氫二鈉(na2hpo4·12h2o)，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸二氫鉀(kh2po4)，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；丙三醇(c3h8o3)，購自sigma公司；疊氮化鈉(nan3)，購自sigma公司；乙二胺四乙酸(edta)，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

實(shí)施例1

一種用于組織冰凍切片保存的試劑盒，包括保存液200ml，儲(chǔ)樣杯一包(100個(gè))，使用說明書一份。

保存液的配方如下：nacl75mm，kcl1.5mm，na2hpo4·12h2o5.6mm，kh2po41.0mm，nan33.1mm，edta2mm，45％的丙三醇(vol/vol)；溶于去離子水中，過濾，真空除氧，4℃避光保存。

保存液的制備方法包括以下步驟：

第一步，將8克nacl、0.2克kcl、3.63克na2hpo4·12h2o、0.24克kh2po4、0.37克nan3和10.6克edta分別加入800毫升的去離子水中，并用玻璃棒攪拌使其充分溶解，然后定容到1000毫升。

第二步，取110毫升的上述緩沖液與90毫升的丙三醇充分混勻。

第三步，用0.4微米的過濾器(millipore，美國)過濾，再用真空泵(北京六一，中國)除氧，然后密封并放入4℃冰箱避光保存。

保存液中最主要的保鮮成分為丙三醇，其濃度為30％以上時(shí)均有保鮮作用，隨著濃度的提高其保鮮效果越強(qiáng)，但是濃度越高粘稠度增加不利于使用。綜合權(quán)衡利弊，將其濃度設(shè)定為45％，使用效果最好(試驗(yàn)證明即便保存三年以上的組織仍未損壞)。此處用的溶劑為磷酸鹽緩沖液，其它等滲液(如三羥甲基氨基甲烷—鹽酸緩沖液、生理鹽水等)也可考慮，但在這些所有可能的配方中，本發(fā)明的技術(shù)方案相對(duì)效果最好。

本發(fā)明實(shí)施例的用于組織冰凍切片保存的試劑盒中儲(chǔ)樣杯包括杯體1與所述杯體1配套密封的杯蓋2，所述杯體1是帶有底部、頂部開口大于底部的結(jié)構(gòu)，所述杯蓋2蓋于所述杯體1上時(shí)，所述杯蓋2上有延伸出杯體1的蓋耳3；其結(jié)構(gòu)示意圖如圖1和圖2所示，圖1是本發(fā)明實(shí)施例的用于組織冰凍切片保存的試劑盒中儲(chǔ)樣杯的杯體的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本發(fā)明實(shí)施例的用于組織冰凍切片保存的試劑盒中儲(chǔ)樣杯的杯蓋的結(jié)構(gòu)示意圖。

本實(shí)施例中，杯體1頂部設(shè)有外螺紋，與杯蓋2上設(shè)有的內(nèi)螺紋密封，杯體1的容量為12-17ml，材質(zhì)為透明硬質(zhì)塑料，杯體1的形狀可以為圓柱形或方形，當(dāng)其為圓柱形時(shí)，底部直徑為1.3-1.8cm，高度為2.0-2.8cm，頂部直徑為1.4-2.0cm，高度為底部直徑的1.5-1.7倍，儲(chǔ)樣杯優(yōu)選的底部直徑為1.5cm，頂部直徑為1.8cm，高度為2.5cm，杯蓋2為軟膠頂蓋。

本實(shí)施例中，杯體1的容量為12-17ml，儲(chǔ)樣杯為平底、透明、硬質(zhì)塑料、廣口的設(shè)計(jì)?，F(xiàn)有產(chǎn)品沒有專門用于組織切片的小號(hào)容器，雖可臨時(shí)借用其它的小號(hào)試劑瓶，但大規(guī)模使用仍然不是非常方便。本實(shí)施例中的儲(chǔ)樣杯是專為組織長(zhǎng)期保存而設(shè)計(jì)，不僅保存的組織切片取用方便，而且也非常適合實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的大批量使用。

用于組織冰凍切片保存的試劑盒的使用方法如下：對(duì)于需要進(jìn)行長(zhǎng)期保存的組織冰凍切片，首先將需要保存的切片轉(zhuǎn)入儲(chǔ)樣杯，并用pbs緩沖液洗滌三次(3×5分鐘)；然后吸干pbs緩沖液并加入4ml保存液混勻；最后密閉，4℃避光保存。

實(shí)施例2

以15月齡阿爾茨海默病(ad)轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織切片的保存和取用為例。

第一步，組織冰凍切片如下：

1、設(shè)置好冰凍切片機(jī)溫度(樣品座固定器-18℃，機(jī)箱-20℃)，切片厚度30微米；

2、將小鼠腦組織進(jìn)行冠狀面連續(xù)切片，并分成6等份。

第二步，腦組織切片的洗滌和保存如下：

1、將6份切片分別轉(zhuǎn)入6個(gè)儲(chǔ)樣杯中，每個(gè)儲(chǔ)樣杯中加入3-4毫升磷酸鹽緩沖液(pbs)，并在杯身上做好腦片信息的記錄；

2、pbs洗滌三次，每次五分鐘；

3、吸干杯中的pbs，然后加入2-3毫升的保存液并和組織切片搖晃混勻；

4、蓋好杯蓋，然后放入溫度為4℃的冰箱避光保存。

第三步，保存腦組織的取用如下：

1、用畫眉筆從其中一個(gè)儲(chǔ)樣杯中挑取4-6張(依當(dāng)事人具體情況而定)組織切片放入盛有pbs的玻璃皿(普瑞美斯，武漢)中，然后在該儲(chǔ)樣杯上做好記錄并放回冰箱繼續(xù)保存；

2、將取出的組織切片用pbs洗三次，每次五分鐘；

3、洗好的組織切片即可正常進(jìn)行后續(xù)染色操作。

實(shí)施例3

以中腦動(dòng)脈栓塞小鼠缺血模型的腦組織切片保存為例。

第一步，組織冰凍切片如下：

1、設(shè)置好冰凍切片機(jī)溫度(樣品座固定器-18℃，機(jī)箱-20℃)，切片厚度30微米；

2、將小鼠腦組織進(jìn)行冠狀面連續(xù)切片，并分成6等份。

第二步，腦組織切片的洗滌和保存如下：

1、將6份切片分別轉(zhuǎn)入6個(gè)儲(chǔ)樣杯中，每個(gè)儲(chǔ)樣杯中加入3-4毫升磷酸鹽緩沖液(pbs)，并在杯身上做好腦片信息的記錄；

2、pbs洗滌三次，每次五分鐘；

3、吸干杯中的pbs，然后加入2-3毫升的保存液并和組織切片搖晃混勻；

4、蓋好杯蓋，然后放入溫度為4℃的冰箱避光保存。

第三步，保存腦組織的取用如下：

1、用畫眉筆從其中一個(gè)儲(chǔ)樣杯中挑取4-6張(依當(dāng)事人具體情況而定)組織切片放入盛有pbs的玻璃皿(普瑞美斯，武漢)中，然后在該儲(chǔ)樣杯上做好記錄并放回冰箱繼續(xù)保存；

2、將取出的組織切片用pbs洗三次，每次五分鐘；

3、洗好的組織切片即可正常進(jìn)行后續(xù)染色操作。

實(shí)施例4

以人腦膠質(zhì)瘤的冰凍切片保存為例。

第一步，膠質(zhì)瘤病理組織的固定和蔗糖浸泡如下：

1、固定：將手術(shù)取出的病理組織立即浸泡到4％多聚甲醛溶液(普瑞美斯，武漢)中，并放入溫度為4℃的冰箱中保存48小時(shí)；

2、沉底：將固定后的組織轉(zhuǎn)入盛有30％蔗糖(普瑞美斯，武漢；約8-10毫升)的儲(chǔ)樣杯中，并放入溫度為4℃的冰箱中直至組織沉底(約48小時(shí))。

第二步，組織冰凍切片如下：

1、設(shè)置好冰凍切片機(jī)溫度(樣品座固定器-18℃，機(jī)箱-20℃)，切片厚度30微米；

2、將小鼠腦組織進(jìn)行冠狀面連續(xù)切片，并分成6等份。

第三步，腦組織切片的洗滌和保存如下：

1、將6份切片分別轉(zhuǎn)入6個(gè)儲(chǔ)樣杯中，每個(gè)儲(chǔ)樣杯中加入3-4毫升磷酸鹽緩沖液(pbs)，并在杯身上做好腦片信息的記錄；

2、pbs洗滌三次，每次五分鐘；

3、吸干杯中的pbs，然后加入2-3毫升的保存液并和組織切片搖晃混勻；

4、蓋好杯蓋，然后放入溫度為4℃的冰箱避光保存。

第四步，保存腦組織的取用如下：

1、用畫眉筆從其中一個(gè)儲(chǔ)樣杯中挑取4-6張(依當(dāng)事人具體情況而定)組織切片放入盛有pbs的玻璃皿(普瑞美斯，武漢)中，然后在該儲(chǔ)樣杯上做好記錄并放回冰箱繼續(xù)保存；

2、將取出的組織切片用pbs洗三次，每次五分鐘；

3、洗好的組織切片即可正常進(jìn)行后續(xù)染色操作。

顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式的限定，對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)，這里無法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。