1.一種提高母本綿羊產(chǎn)奶量的方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟1、試驗動物的選擇
(1)雜交父本羊為東弗里森奶綿羊;
(2)雜交母本湖羊為成年湖羊;
步驟2、雜交
東湖一代,即F1,含1/2東弗里森羊血液,是純種東弗里森公羊與純種湖羊雜交后代;含1/4東弗里森羊血液湖羊為東湖一代公羊與純種湖羊母羊交配后代;所有母羊均利用人工授精技術(shù)配種;
步驟3、體重測定
對相同飼養(yǎng)管理條件下同期出生的湖羊、東湖一代羊、含1/4東弗里森羊血液湖羊的初生重、2月齡重、4月齡重進行測定、記錄;
步驟4、產(chǎn)奶量測定
分別選擇相同飼養(yǎng)管理條件下同期產(chǎn)羔母羊3只,用羔羊體重稱重法對產(chǎn)奶量進行測定、記錄;
步驟5、乳腺組織受體基因的mRNA表達量測定
5.1采樣
用手術(shù)法采集哺乳期東湖一代羊試驗組和湖羊?qū)φ战M乳腺組織樣,置于多聚甲醛中帶回實驗室,固定48h后,修樣至1cm3;
5.2制樣
5.2.1脫水將固定后的組織樣依次置于70%酒精30min、80%酒精1h、90%酒精1h、100%酒精1h,1h后換一次酒精;
5.2.2透明用等比列配制的無水乙醇、二甲苯混合溶液浸泡2h,再用二甲苯I浸泡10min,換二甲苯,再泡5min;
5.2.3浸蠟在等比列配制的二甲苯、石蠟液的混合液中浸2h,石蠟I液中浸2h、石蠟II液中浸2h,然后置于60℃烤箱中烘干;
5.2.4包埋將預(yù)熱包埋劑倒入簡易紙盒,然后將浸蠟后的組織樣放在室溫下靜置;
5.2.5切片將包埋好的蠟塊置于石蠟切片機上,切成5um薄片,再進行展片、粘片、標記后,置于切片架上,在37℃條件下烘干;
5.3染色
(1)HE染色脫蠟依次將石蠟切片置于二甲苯I液10min、二甲苯II液5min、100%乙醇I液3min、100%乙醇II液3min、90%乙醇3min、80%乙醇3min、70%乙醇3min;
(2)染色蘇木精染色2min,水洗除去染液,加5%冰醋酸分化30s,用蒸餾水洗5min,再用伊紅染色1min,然后在顯微鏡下觀察;
(3)脫色將玻片依次置于70%酒精、80%酒精、90%酒精、100%酒精I液、100%酒精II液中脫色各1min,然后分別在二甲苯I液和二甲苯II液脫色5min;
(4)封片取出切片,擦干二甲苯,滴上樹膠,蓋上蓋玻片,在室溫條件下晾干;
(5)照相:用顯微照相機照相后,進行圖像分析;
5.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
通過HE染色對東湖一代羊和湖羊乳腺組織結(jié)構(gòu)進行比較。