1.一種蛹蟲(chóng)草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法,其特征在于:該方法包括以下步驟:
步驟(1)液體蛹蟲(chóng)草菌種獲?。簠⒄宅F(xiàn)有液體蛹蟲(chóng)草菌種的制作方法在玻璃輸液瓶中進(jìn)行制作、培養(yǎng);
步驟(2)蛹體封閉連續(xù)定量注射接種:在超凈工作臺(tái)下將步驟(1)中裝有液體蛹蟲(chóng)草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開(kāi),用橡膠塞封口;然后將醫(yī)用一次性無(wú)菌輸液管一端插入橡膠塞上,另一端與獸醫(yī)用連續(xù)可調(diào)注射器密閉連接,使玻璃輸液瓶?jī)?nèi)的液體蛹蟲(chóng)草菌種通過(guò)無(wú)菌輸液管流到獸醫(yī)用連續(xù)可調(diào)注射器內(nèi),最后通過(guò)調(diào)整注射器并將針頭扎進(jìn)蛹體內(nèi)來(lái)實(shí)現(xiàn)定量注射接種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛹蟲(chóng)草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法,其特征在于:所述液體蛹蟲(chóng)草菌種獲取包括以下步驟:
(a)蛹蟲(chóng)草斜面培養(yǎng)基制作:取去皮馬鈴薯200g,切成2cm×2cm×2cm方塊,加清水1000ml煮至熟而不爛程度,過(guò)濾,取上清液用之,加入葡萄糖20g、瓊脂18g,攪拌溶解后,加清水定容至1000ml,pH自然,121℃高壓滅菌30分鐘,分裝于Φ15×150試管中,每只試管分裝培養(yǎng)基15ml,擺成斜面待用;
(b)野生蛹蟲(chóng)草菌種分離培養(yǎng):野生蛹蟲(chóng)草在長(zhǎng)白山余脈采集所得;將野生蛹蟲(chóng)草用75%酒精消毒處理,切成0.5cm×0.5cm小塊,接種到步驟(a)蛹蟲(chóng)草斜面培養(yǎng)基試管中,在23℃條件下培養(yǎng)10天,得固體菌種,保存?zhèn)溆茫?/p>
(c)蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基制作:取去皮馬鈴薯200g,切成2cm×2cm×2cm方塊,加清水1000ml煮至熟而不爛程度,過(guò)濾,取上清液用之,加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀0.5g,攪拌溶解后,加清水定容至1000ml,pH自然,分裝于500ml玻璃輸液瓶中,每瓶分裝300ml,瓶口用脫脂棉塞上,用牛皮紙封口,121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,晾至30℃以下進(jìn)行接種;
(d)液體蛹蟲(chóng)草菌種制作:在步驟(c)裝有液體培養(yǎng)基的玻璃輸液瓶中接入步驟(b)培養(yǎng)的固體菌種,每瓶接入5mm×5mm菌塊4塊,在23℃條件下旋轉(zhuǎn)式搖床振蕩培養(yǎng)5-7天,菌絲充滿(mǎn)液體培養(yǎng)基后即可使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛹蟲(chóng)草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法,其特征在于:步驟(d)所述振蕩培養(yǎng)參數(shù)為80-120r/min。