1.一種異源精子誘導翹嘴鱖人工雌核發(fā)育的方法,其特征在于,其主要步驟如下:
S1:冷凍保存斑鱖異源精子:采用Hanks冷凍稀釋液對斑鱖精子進行冷凍低溫(-24℃)保存,保存期為24h。解凍時,將冷凍精液管在25℃水浴中解凍備用;
S2:班鱖精子的遺傳失活:解凍后的斑鱖精液,按1:4的比例經Hanks冷凍液稀釋后放入一個直徑10cm的培養(yǎng)皿中,在冰盒上手動搖勻后連同冰盒一起放置在水平搖床上,然后用兩根15W UV紫外照射管充分照射25分鐘,照射距離17cm;照射后,將滅活的精液虹吸至一個5mL的Ep管中,放入冰盒中保存;
S3:獲得翹嘴鱖的卵子:2齡以上的性成熟雌魚通過注射外源催產激素發(fā)情后,采用干法將卵子擠入干燥的器皿中,放入冰盒中保存;
S4:啟動卵子雌核發(fā)育:將S2得到的遺傳失活的翹嘴鱖精子與S3得到的翹嘴鱖成熟卵子搖勻混合受精,受精時間30s;
S5:卵子單倍體染色體組加倍:受精后,轉移到淡水中進行冷休克處理,水溫4℃,冷休克處理時間約20~25min,得到二倍體卵;
S6:將S5所得到的二倍體卵轉入方形孵化槽中孵化,水溫25℃,按普通翹嘴鱖苗培育方法管理,得到翹嘴鱖雌核發(fā)育二倍體魚苗,二倍體雌核發(fā)育魚苗的誘導率為10~25%;
S7:用微衛(wèi)星標記鑒定雌核發(fā)育魚苗。
2.根據(jù)權利要求1所述的異源精子誘導翹嘴鱖人工雌核發(fā)育的方法,其特征在于,所述S1中Hanks冷凍稀釋液由以下原料配制而成:KCL 0.4g,NaCL 8.00g,NaHCO3 0.35g,KH2PO4 0.06g,Na2HPO4·7H2O 0.09g,Na2HPO4·12H2O 0.10g,MgSO4·7H2O 0.10g,MgCL2·6H2O 0.10g,CaCL2 0.14g,Glucose 1.00g;加蒸餾水配至1升。
3.根據(jù)權利要求1所述的異源精子誘導翹嘴鱖人工雌核發(fā)育的方法,其特征在于,所述S2中紫外照射管照射強度為3396μW(cm3·s)。
4.根據(jù)權利要求1所述的異源精子誘導翹嘴鱖人工雌核發(fā)育的方法,其特征在于,所述S3中外源催產激素由以下原料在23℃~27℃的溫度條件下混合而成:促黃體素釋放激素類似物(LRH-A2)4μg/Kg~6μg/Kg和絨毛膜促性腺激素(HCG)800IU/Kg~1200IU/Kg。
5.根據(jù)權利要求1所述的異源精子誘導翹嘴鱖人工雌核發(fā)育的方法,其特征在于,所述S5中冷休克處理起始時間是在卵子受精后2-3min。
6.根據(jù)權利要求1所述的異源精子誘導翹嘴鱖人工雌核發(fā)育的方法,其特征在于,所述S5中冷休克處理時間為25min。