專(zhuān)利名稱(chēng)：翹嘴鱖精子超低溫冷凍保存及復(fù)蘇方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及翹嘴鱖精子超低溫冷凍保存及復(fù)蘇方法
背景技術(shù)：
翹嘴鱖(Siniperca chuatsi)是久享盛譽(yù)的淡水名貴經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一，不但肉質(zhì)細(xì) 嫩，味道鮮美，而且蛋白質(zhì)含量高，營(yíng)養(yǎng)豐富，深授廣大消費(fèi)者的青睞。然而寄生蟲(chóng)、細(xì)菌、病 毒等引起的疾病的爆發(fā)造成鱖魚(yú)大規(guī)模死亡，致死率達(dá)100%，給水產(chǎn)工業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng) 濟(jì)損失。特別是濫捕現(xiàn)象嚴(yán)重，環(huán)境污染加劇，翹嘴鱖野生種質(zhì)遭到嚴(yán)重退化，因此保護(hù)種 質(zhì)資源、防止物種滅絕勢(shì)在必行。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能夠便宜、高效、長(zhǎng)期保存翹嘴鱖精子的 超低溫冷凍及復(fù)蘇方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為選擇雄性成熟翹嘴鱖，對(duì)其進(jìn)行催熟，采精，添加抗凍液，液氮冷凍保存后，解凍， 進(jìn)行人工授精。所述雄性成熟翹嘴鱖是形態(tài)正常、生長(zhǎng)良好、無(wú)疾病、達(dá)到性成熟的原種或良種， 對(duì)其進(jìn)行激素誘導(dǎo)促使性腺完全成熟。按每千克體重注射3mg PG和200 μ g LRH-A2, 24h 后采精，所用抗凍液是以D-15為基礎(chǔ)液，其中含有抗凍劑10% DMS0。冷凍方法是將精液與 D-15稀釋液按1 3稀釋?zhuān)?°C平衡30min后，加入10% DMSO混勻，分裝，在液氮面上方6cm 處平衡lOmin，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。解凍方法是將凍存管在液氮蒸氣 中平衡5分鐘，迅速置于37°C水浴鍋中快速晃動(dòng)至融化。人工授精是將翹嘴鱖卵擠入容器 中，按IO5 1的精卵數(shù)量比滴加入化凍后的精液拌勻，再滴加適量激活溶液SM，拌勻，使卵 受精。本發(fā)明具有操作時(shí)間短、誘導(dǎo)效果好、毒性作用少、損傷程度小、成活率高等優(yōu)點(diǎn)。 其在翹嘴鱖的種質(zhì)保存、遺傳育種、可持續(xù)養(yǎng)殖及病害防治等方面有著重要的理論意義和 應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式翹嘴鱖精子超低溫冷凍保存方法、復(fù)蘇及工藝親魚(yú)的選擇形態(tài)正常、生長(zhǎng)良好、無(wú)疾病、達(dá)到性成熟的原種或良種。配子的采集在翹嘴鱖繁殖期按每千克體重注射3mg PG和200 μ g LRH-A2, 24h后 輕壓魚(yú)腹，采集無(wú)血污的精液于干燥燒杯中。鮮精活力檢測(cè)先用細(xì)口吸管吸一滴水于載玻片上，對(duì)準(zhǔn)視野，然后用針尖挑取上 述精液立即于顯微鏡下邊攪勻邊觀察其活力。冷凍方法將精液與D-15稀釋液按1 3稀釋?zhuān)?°C平衡30min后，加入10%DMS0
3混勻，分裝，在液氮面上方6cm處平衡lOmin，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。解凍方法將凍存管在液氮蒸氣中平衡5分鐘，迅速置于37°C水浴鍋中快速晃動(dòng) 至融化。凍精活力檢測(cè)先用細(xì)口吸管吸一滴SM于載玻片上，對(duì)準(zhǔn)視野，然后用針尖挑取 上述精液立即于顯微鏡下邊攪勻邊觀察其活力。人工授精將卵置于容器中，按IO5 1的精卵數(shù)量比滴加入化凍后的精液拌勻， 再滴加適量激活溶液SM，拌勻，使卵受精。
權(quán)利要求
翹嘴鱖精子超低溫冷凍保存及復(fù)蘇方法，其特征在于選擇形態(tài)正常、生長(zhǎng)良好、無(wú)疾病、達(dá)到性成熟的原種或良種，對(duì)其進(jìn)行激素誘導(dǎo)，促使精子成熟，采精，添加抗凍液，液氮冷凍保存后，解凍，進(jìn)行人工授精。
2.按照權(quán)利要求1所述翹嘴鱖精子超低溫冷凍保存及復(fù)蘇方法，其特征在于(1)在翹嘴鱖繁殖期按每千克體重注射3mgPG和200 μ g LRH-A2, 24h后輕壓魚(yú)腹，即 可取精。(2)所用抗凍液是以D-15為基礎(chǔ)液，其中含有抗凍劑10%DMS0。(3)冷凍方法是將精液與D-15稀釋液按1 3稀釋?zhuān)?°0平衡30!^11后，加入10%01^0 混勻，分裝，在液氮面上方6cm處平衡lOmin，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。(4)解凍方法是將凍存管在液氮蒸氣中平衡5分鐘，迅速置于37°C水浴鍋中快速晃動(dòng) 至融化。(5)人工授精方法是將翹嘴鱖卵擠在容器中，按IO5 1的精卵數(shù)量比滴加化凍后的精 液拌勻，再滴加適量激活溶液SM，拌勻，使卵受精。
全文摘要
本發(fā)明涉及翹嘴鱖精子超低溫冷凍保存和復(fù)蘇方法，選擇形態(tài)正常、生長(zhǎng)良好、無(wú)疾病、達(dá)到性成熟的親魚(yú)，對(duì)其用3mg/kg PG和200μg/kg LRH-A2腹腔注射進(jìn)行誘導(dǎo)催熟，24h后輕壓魚(yú)腹，獲取無(wú)血污的精液，將其與D-15稀釋液按1∶3稀釋?zhuān)?℃平衡30min后，加入10％DMSO混勻，分裝，在液氮面上方6cm處平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。37℃水浴，激活液SM激活，將翹嘴鱖卵擠出置于容器中，按105∶1的精卵數(shù)量比滴加入解凍后的精液拌勻，再滴加適量激活溶液SM，拌勻，使卵受精。該發(fā)明保存的精子質(zhì)量高，具備授精能力，其在翹嘴鱖的種質(zhì)保存、遺傳育種、可持續(xù)養(yǎng)殖及病害防治等方面有著重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A01K61/00GK101904330SQ20091003289
公開(kāi)日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2009年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者丁淑燕, 嚴(yán)維輝, 張明生, 李躍華, 潘建林, 葛家春, 許志強(qiáng), 郝忱, 黃亞紅 申請(qǐng)人:江蘇省淡水水產(chǎn)研究所;南京大學(xué)