技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種LED光源下龍牙百合鱗片繁育種球的方法，屬植物無(wú)性繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
龍牙百合(Lilinm brownie var viridulum Baker)是三大著名食用之一，我國(guó)名、特、優(yōu)蔬菜，也是集食藥兼用食品，深受國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)歡迎。江西萬(wàn)載縣主要特產(chǎn)產(chǎn)業(yè)之一，栽培歷史悠久。種球是龍牙百合主要栽培種苗，目前龍牙百合種球主要通過(guò)大田鱗片扦插、組培等技術(shù)繁育。大田鱗片扦插繁殖效率低、管理粗放、多發(fā)病害等缺點(diǎn)。組培技術(shù)要求較高、投入大、多使用化學(xué)藥劑等缺點(diǎn)。
為生產(chǎn)提供一種LED光源下龍牙百合鱗片繁育種球的方法。有關(guān)LED光源主要集中植物工廠化生產(chǎn)莖葉蔬菜、果用蔬菜等方面。公開(kāi)號(hào)CN103947525公開(kāi)了一種利用LED光源進(jìn)行生菜室內(nèi)生產(chǎn)的方法，該專利主要是營(yíng)養(yǎng)液水培環(huán)境下提供混合LED光源栽培生菜；公開(kāi)號(hào)CN105284446公開(kāi)了一種利用LED植物生長(zhǎng)光源促進(jìn)茄果類蔬菜育苗的方法，該專利主要自制300nm~470nm波長(zhǎng)LED光源下茄果類蔬菜育苗。公開(kāi)號(hào)CN105875228公開(kāi)了一種用LED燈對(duì)黃瓜育苗的補(bǔ)光方法，該專利主要采用紅藍(lán)光組合對(duì)黃瓜幼苗進(jìn)行補(bǔ)光；公開(kāi)號(hào)CN105210877公開(kāi)了一種龍牙百合快速繁殖方法，該專利主要調(diào)節(jié)組培培養(yǎng)基條件提高誘導(dǎo)率 并縮短再生周期；公開(kāi)號(hào)CN105706708公開(kāi)了一種利用龍牙百合鱗片繁育龍牙百合種球的方法，該專利采用大棚避雨、覆膜、夏季大棚蓋遮陽(yáng)網(wǎng)降溫栽培繁育方法。脫毒龍牙百合組培技術(shù)江西省科學(xué)院生物資源研究所已解決，見(jiàn)江洪如等發(fā)表論文《龍牙百合莖尖脫毒快繁及種球培育技術(shù)》和王碧琴等發(fā)表論文《外源物質(zhì)對(duì)龍牙百合試管苗生物量的影響研究》。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是，針對(duì)龍牙百合鱗片繁殖種球效率低、鱗片易遭病害、安全性低、不便植物工廠化生產(chǎn)種球等問(wèn)題，提供一種LED光源下龍牙百合鱗片繁育種球的方法。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是，一種LED光源下龍牙百合鱗片繁育種球的方法，包括以下步驟：
（1）選擇龍牙百合種球并低溫處理：
選擇以脫毒龍牙百合組培苗為種球大田已種植3年生無(wú)腐爛、無(wú)傷口、新鮮、商品化龍牙百合種球。種球用紙包裹，再包裹一層塑料膜，放入5℃低溫處理至少7天。
（2）鱗片消毒：
洗凈鱗片置于50℃培育箱中處理10分鐘后, 用無(wú)菌水沖洗5次，在70%酒精浸泡15秒，無(wú)菌水沖4次；在超凈工作臺(tái)下迅速平放于已高溫高壓消毒培養(yǎng)皿底面無(wú)紡布上，立即蓋上培養(yǎng)皿蓋。
（3）選擇三種不同波長(zhǎng)的LED光源進(jìn)行光照：
選用660nm紅光、450nm藍(lán)光、300nm紫外光等三種單一LED光源；光照周期為12h?d-1，光強(qiáng)80μmol?m-2?s-1。所述LED光源燈固定于距離培養(yǎng)皿50公分上部架子上。
（4）培養(yǎng)皿底面襯有無(wú)紡布的玻璃透明帶蓋培養(yǎng)皿高溫高壓消毒：
培養(yǎng)皿底面襯有無(wú)紡布的玻璃透明帶蓋培養(yǎng)皿在高溫高壓滅菌鍋121℃消毒30分鐘。
（5）消毒控溫控濕生長(zhǎng)環(huán)境：
生長(zhǎng)環(huán)境溫度在23℃~28℃，相對(duì)濕度70％。每隔7天培養(yǎng)環(huán)境用臭氧消毒1次。
（6）在超凈工作臺(tái)下用移液器吸取無(wú)菌水定量濕潤(rùn)玻璃透明帶蓋培養(yǎng)皿底面無(wú)紡布
本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明在LED光源下對(duì)龍牙百合進(jìn)行鱗片繁育種球，該方法繁殖系數(shù)高、消毒控制生長(zhǎng)環(huán)境、可植物工廠化繁育種球。解決了龍牙百合采用常規(guī)方法鱗片繁殖種球效率低、鱗片易遭病害、安全性低的問(wèn)題。
具體實(shí)施方式
本實(shí)施例一種LED光源下龍牙百合鱗片繁育種球的方法，包括如下步驟：
(1)龍牙百合種球選取和低溫處理
收獲以脫毒龍牙百合組培苗為種球大田栽培3年生商品化龍牙百合種球，選擇無(wú)病害、無(wú)傷口、鱗片長(zhǎng)而肥大、質(zhì)量達(dá)35 g~50 g等龍牙百合鮮種球，將帶少量泥土的鮮種球曝曬2天，種球用紙包裹后，再包裹一層塑料膜，低溫處理。
(2)鱗片消毒和放置
將低溫處理一定時(shí)間的龍牙百合鮮種球，輕輕剝下鱗片，洗凈鱗片于50℃培育箱中處理10分鐘后, 用無(wú)菌水沖洗5次，在70%酒精浸泡15秒，無(wú)菌水沖4次。在超凈工作臺(tái)下迅速平放置于已高溫高壓消毒培養(yǎng)皿底面無(wú)紡布上。培養(yǎng)皿放置于支架下面為反光鏡面上。啟動(dòng)環(huán)境控制條件開(kāi)關(guān)，并開(kāi)啟LED光源。
(3)LED光源燈
選用660nm紅光、450nm藍(lán)光、300nm紫外光等三種單一LED光源獨(dú)立照射，每天連續(xù)光照12h?d-1即從06:00~18:00。LED光源燈固定于距離培養(yǎng)皿50公分上部架子上。
(4)培養(yǎng)皿底面襯有無(wú)紡布的玻璃透明帶蓋培養(yǎng)皿高溫高壓消毒
培養(yǎng)皿底面襯有無(wú)紡布的玻璃透明帶蓋培養(yǎng)皿高溫高壓滅菌鍋121℃消毒30分鐘。無(wú)紡布大小與培養(yǎng)皿底面直徑大小一致。且消毒前放置。
(5)消毒控溫控濕生長(zhǎng)環(huán)境
生長(zhǎng)環(huán)境溫度23℃~28℃，相對(duì)濕度70％。每隔7天生長(zhǎng)環(huán)境用臭氧消毒1次。溫度有空調(diào)調(diào)節(jié)，濕度由加濕器控制，并放置干濕溫度計(jì)，臭氧由臭氧發(fā)生器提供。
(6)用移液器吸取無(wú)菌水定量濕潤(rùn)帶蓋培養(yǎng)皿底面無(wú)紡布
在超凈工作臺(tái)下每隔5天用移液器吸取定量無(wú)菌水潤(rùn)濕底面無(wú)紡布。
60天后三種單一LED光源下龍牙百合鱗片繁育種球效果表1：
從結(jié)果看，660nm紅光LED光源照射種球較大較好，適合較快繁育種球。450nm藍(lán)光LED光源照射繁殖系數(shù)較高，繁育較大種球需要更長(zhǎng)時(shí)間。