本發(fā)明屬于豬繁殖技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及豬精液長效稀釋粉及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
豬人工授精技術(shù)是用人工器械采集公豬精液并對精液進行品質(zhì)檢查和稀釋后，再用器械將精液注入發(fā)情母豬生殖道內(nèi)，以代替公豬自然交配的一種配種方法，20世紀(jì)80年代在世界范圍內(nèi)迅速普及，目前在使用比較廣的歐洲和北美等地區(qū)，普及率已超過80％，是進行科學(xué)養(yǎng)豬、實現(xiàn)養(yǎng)豬生產(chǎn)現(xiàn)代化的重要手段，它有如下優(yōu)點：(1)節(jié)省公豬，并減少每頭公豬的使用次數(shù)，克服時間和區(qū)域差異，可以方便地適時配種；(2)節(jié)省人力、物力、財力，提高經(jīng)濟效益，減少疾病的傳播；(3)提高配種率，由于可以利用顯微鏡、密度儀等儀器對精子質(zhì)量進行監(jiān)控，有效提高了配種受胎率，并可及時調(diào)整精子質(zhì)量較差的公豬；(4)增加遺傳性能優(yōu)良的公豬的利用率，擴大良種覆蓋率，有利于品種改良和聯(lián)合育種。
在開展豬的人工授精工作中，必須配制公豬精液的稀釋液，以便稀釋保存。
申請?zhí)?01310478237.6公開了一種豬精液稀釋劑，申請?zhí)?01010133910.9公開了一種豬精液常溫保存稀釋劑及其制備和稀釋方法，保存精液時間均只有3天；申請?zhí)?01410164618.1的豬抗病毒精液稀釋液，保存精液時間只有4天。
申請?zhí)枮?01410527131.5的發(fā)明公開了一種豬抗病毒長效精液稀釋液配方及制備方法，保存精液的時間為5-7天，其缺陷是在制備時配方中的聚乙烯乙醇需要在加熱電磁攪拌器上溶解于150ml 30-50℃的蒸餾水中，攪拌20-40分鐘，制備步驟麻煩。
與本發(fā)明密切相關(guān)的申請?zhí)?01210238501.4的發(fā)明公開了一種長效豬精液稀釋粉及其制備方法，豬精液的保存時間為10-12天，但是其中的雞卵黃干粉制備方法復(fù)雜，制備過程中被污染的幾率大，需要相應(yīng)的干燥設(shè)備，質(zhì)保期短。
所以開發(fā)出保存豬精液時間長、制備簡便的豬精液稀釋粉對人工授精技術(shù)具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種長效性的豬精液稀釋粉及其應(yīng)用，本發(fā)明取材容易、制備簡便、易于貯存，應(yīng)用本發(fā)明的豬長效精液稀釋粉的精液保存時間可長達(dá)9-11天。
本發(fā)明的另一個目的，是提供一種豬精液長效稀釋粉的應(yīng)用方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種豬精液長效稀釋粉，它是由如下重量份的組分混合而成：葡萄糖4-6g，二水檸檬酸三鈉5-7g，一水檸檬酸2-3g，乙二胺四乙酸7-8g，碳酸氫鈉5-6g，氯化鉀2-3g，三羥甲基氨基甲烷6-7g，半胱氨酸0.1-0.3g，海藻糖2-3g，抗菌素恩諾沙星0.3-0.5g和硫酸多黏菌素0.05-0.07g。
作為優(yōu)選方案，本發(fā)明由如下重量份的組分混合而成：葡萄糖5.06g，二水檸檬酸三鈉6.12g，一水檸檬酸2.30g，乙二胺四乙酸7.38g，碳酸氫鈉5.54g，氯化鉀2.37g，三羥甲基氨基甲烷6.85g，半胱氨酸0.21g，海藻糖2.11g，抗菌素恩諾沙星0.42g和硫酸多黏菌素0.06g。
一種豬精液長效稀釋粉的應(yīng)用方法，包括如下步驟：采集公豬精液，測定得到滲透壓為301.25±14.52mmol/kg、PH值為7.04±0.05，根據(jù)豬精液長效稀釋粉的配制目的--對精子無害，能提供精子營養(yǎng)，pH范圍適合精子存活，滲透壓適當(dāng)，原料易得、配置簡單，長效保存，進行組分的篩選工作，篩選得到的各組分是：葡萄糖、二水檸檬酸三鈉(C6H5Na307.2H2O)、一水檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、碳酸氫鈉(NaHCo3)、氯化鉀(Kcl)、三羥甲基氨基甲烷(TRIS)、半胱氨酸、海藻糖、抗菌素恩諾沙星和硫酸多黏菌素、牛血清白蛋白(BSA)。
根據(jù)測定公豬精液得到的滲透壓和PH值以及課題組先期的預(yù)配方試驗結(jié)果，將牛血清白蛋白、半胱氨酸、海藻糖、抗菌素恩諾沙星和硫酸多黏菌素作為主要變化因素，梯度水平為4，采用L16(45)正交表進行試驗，3個重復(fù)(3頭公豬的精液)，篩選配方。然后對配方作進一步優(yōu)化，調(diào)節(jié)理化參數(shù)，以滲透壓為主，進行滲透壓梯度試驗，按最佳滲透壓將配方進一步優(yōu)化，考慮到牛血清白蛋白價格昂貴，直接導(dǎo)致成本上升，不利于大規(guī)模推廣應(yīng)用，決定棄用。每個試驗周期為11天左右，直到絕大多數(shù)精液樣品活力降低到0.6以后停止檢測，分析獲得最佳的配方，優(yōu)化后的配方稀釋精液，保存9-11天，精子活力為0.60。
本發(fā)明的有益效果是：
自然交配時，一頭公豬每年可承擔(dān)25頭母豬進行本交的配種負(fù)荷，而采用人工授精，一頭公豬1年可配250頭以上母豬，人工授精與本交相比較，其優(yōu)點是可以節(jié)省公豬的飼養(yǎng)量。應(yīng)用本發(fā)明長效稀釋粉稀釋豬精液進行人工授精，可以減少人工授精過程中的消毒和配稀釋液、稀釋精液的次數(shù)，豬精液在一定長的時間內(nèi)保存起來以便隨時使用，節(jié)能省事。用本發(fā)明配制的豬精液長效稀釋粉稀釋的豬精液在溫度為17℃的恒溫條件下，可以保存9-11天。
具體實施方式
下面通過實施例對本發(fā)明做進一步詳細(xì)說明，實施例僅用來說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍；實施例所用原料采用分析純級別，所有步驟均在凈化空間進行，凈化空間的潔凈度要求為30萬級。
實施例1
一種豬精液長效稀釋粉，用如下重量份的組分混合而成：葡萄糖4.80g，二水檸檬酸三鈉5.80g，一水檸檬酸2.18g，乙二胺四乙酸7.00g，碳酸氫鈉5.25g，氯化鉀2.25g，三羥甲基氨基甲烷6.50g，半胱氨酸0.20g，海藻糖2.00g，抗菌素恩諾沙星0.40g和硫酸多黏菌素0.06g。
(1)實施例原料采用分析純級別，稱量、真空包裝后密封，得到稀釋粉，2-8℃的條件下保存。
(2)使用稀釋粉時，用加熱至35-37℃的二次蒸餾水?dāng)嚢?，混合均勻，定容?000ml，得到精液稀釋液，1小時后用于豬精液的稀釋。
(3)豬精液采集后，將氣味、顏色正常的豬精液先用精子密度儀檢測密度，再在預(yù)熱37℃玻片上100倍顯微鏡下鏡檢精子活力，活力達(dá)0.9級以上的豬精液用公式計算稀釋的份數(shù)：重量×密度×活力÷30＝份數(shù)(30是指每份精液有效精子數(shù)30億)。
(4)精液稀釋液與豬精液溫差不能超過1℃，并且通過調(diào)整精液稀釋液的溫度使豬精液與精液稀釋液的溫度盡可能的接近，不能反向操作。
(5)稀釋豬精液時將精液稀釋液沿容器壁緩慢倒入到豬精液中，落差不要大，以不起泡沫為準(zhǔn)，然后輕輕搖動或用消毒玻璃棒攪拌，使兩者輕柔混勻；按體積計算，如作1：2-4倍的高倍稀釋時，應(yīng)先作1：1-1.5倍的低倍稀釋，待半分鐘后在將余下的精液稀釋液沿容器壁緩慢加入，不可反過來將豬精液倒入精液稀釋液中。所有稀釋操作都要在室溫23-25℃環(huán)境下，30min內(nèi)完成。
(6)將稀釋后的豬精液緩慢裝入潔凈的精液瓶或精液袋中，以整個精液瓶或精液袋容積計算，空氣含量6-7％，密閉精液瓶或精液袋，減少精子與氧氣接觸，抑制精子的代謝，延長精液的保存時間，在23-25℃室溫下避光緩慢降溫1個小時后(也可用潔凈的干的純棉大毛巾包裹2層后)放置于17℃恒溫箱中保存，每隔8小時緩慢搖動精液，避免精子沉積造成傷亡。每隔24小時檢測一次精子活力。
(7)室內(nèi)禁止吸煙，女操作員不能使用氣味濃重的化妝品，與精液接觸的溫度計、玻璃棒、稀釋杯、稀釋水37℃預(yù)熱。在豬精液的運輸過程中要避免陽光照射、避免顛簸震動、避免溫差大起大落。使用專門的恒溫運輸箱或者泡沫箱，夏天放冰水袋，冬天放棉毛巾，保持箱內(nèi)溫度為15-20℃。
實施效果見表1
實施例2
一種優(yōu)化的豬精液長效稀釋粉，由如下重量份的組分混合而成：葡萄糖5.06g，二水檸檬酸三鈉6.12g，一水檸檬酸2.30g，乙二胺四乙酸7.38g，碳酸氫鈉5.54g，氯化鉀2.37g，三羥甲基氨基甲烷6.85g，半胱氨酸0.21g，海藻糖2.11g，抗菌素恩諾沙星0.42g和硫酸多黏菌素0.06g。
(1)實施例原料采用分析純級別，稱量、真空包裝后密封，得到稀釋粉，2-8℃的條件下保存。
(2)使用稀釋粉時，用加熱至35-37℃的二次蒸餾水?dāng)嚢?，混合均勻，定容?000ml，得到精液稀釋液，1小時后用于豬精液的稀釋。
(3)豬精液采集后，將氣味、顏色正常的豬精液先用精子密度儀檢測密度，再在預(yù)熱37℃玻片上100倍顯微鏡下鏡檢精子活力，活力達(dá)0.9級以上的豬精液用公式計算稀釋的份數(shù)：重量×密度×活力÷30＝份數(shù)(30是指每份精液有效精子數(shù)30億)。
(4)精液稀釋液與豬精液溫差不能超過1℃，并且通過調(diào)整精液稀釋液的溫度使豬精液與精液稀釋液的溫度盡可能的接近，不能反向操作。
(5)稀釋豬精液時將精液稀釋液沿容器壁緩慢倒入到豬精液中，落差不要大，以不起泡沫為準(zhǔn)，然后輕輕搖動或用消毒玻璃棒攪拌，使兩者輕柔混勻；按體積計算，如作1：2-4倍的高倍稀釋時，應(yīng)先作1：1-1.5倍的低倍稀釋，待半分鐘后在將余下的精液稀釋液沿容器壁緩慢加入，不可反過來將豬精液倒入精液稀釋液中。所有稀釋操作都要在室溫23-25℃環(huán)境下，30min內(nèi)完成。
(6)將稀釋后的豬精液緩慢裝入潔凈的精液瓶或精液袋中，以整個精液瓶或精液袋容積計算，空氣含量6-7％，密閉精液瓶或精液袋，減少精子與氧氣接觸，抑制精子的代謝，延長精液的保存時間，在23-25℃室溫下避光緩慢降溫1個小時后(也可用潔凈的干的純棉大毛巾包裹2層后)放置于17℃恒溫箱中保存，每隔8小時緩慢搖動精液，避免精子沉積造成傷亡。每隔24小時檢測一次精子活力。
(7)室內(nèi)禁止吸煙，女操作員不能使用氣味濃重的化妝品，與精液接觸的溫度計、玻璃棒、稀釋杯、稀釋水37℃預(yù)熱。在豬精液的運輸過程中要避免陽光照射、避免顛簸震動、避免溫差大起大落。使用專門的恒溫運輸箱或者泡沫箱，夏天放冰水袋，冬天放棉毛巾，保持箱內(nèi)溫度為15-20℃。試驗效果見表1
表1公豬精液在17℃恒溫下保存活力變化統(tǒng)計
本發(fā)明優(yōu)化后的長效稀釋粉稀釋的豬精液，在溫度為17℃的恒溫條件下，保存9-11天，精子活力為0.60。科學(xué)研究表明，直線前進運動的精子占總精子數(shù)在60-95％之間，人工授精母豬的妊娠率無顯著差異。