1.一種鐵皮石斛組培工廠化育苗方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)種源篩選:石斛生長(zhǎng)旺季6~9月份對(duì)外觀少病蟲(chóng)害,生長(zhǎng)健壯的單叢種苗進(jìn)行逐一標(biāo)記,采集前每月噴施三次EM菌、黃腐酸鈣和蕓苔素,采收季節(jié)11~3月對(duì)所標(biāo)記封頂成熟的種苗進(jìn)行中國(guó)藥典相應(yīng)理化指標(biāo)作全檢,對(duì)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的種苗進(jìn)行莖段采集;
(2)外植體預(yù)處理:將石斛鮮條莖段放入加入適量洗潔精的35~45℃溫水中浸泡30~60分鐘,將浸泡好的石斛莖段的葉鞘剝掉不能傷及節(jié)上潛伏芽,葉鞘剝掉的莖段切成每一節(jié)一個(gè)段,用異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣50~200mg/L浸泡30~60分鐘,然后用清水清洗吸水紙吸干表面水分待用;
(3)外植體滅菌:將莖段用75%酒精浸10~15秒,立即放入0.1%升汞中8~12分鐘,并不時(shí)輕晃,最后取出莖段用無(wú)菌水清洗4~5次,再用無(wú)菌吸水紙吸干表面水分待用;
(4)莖段腋芽誘導(dǎo):將切好莖段接入改良1號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)10~15天,腋芽開(kāi)始萌動(dòng),之后使用色溫4000K LED照明燈光照8~10小時(shí)/天,光照強(qiáng)度1000~1200lex,溫度23~26℃;
(5)叢芽誘導(dǎo):待腋芽長(zhǎng)到0.5~1cm時(shí),切下芽體放入含有異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣50~200mg/L無(wú)菌水中浸泡20~30分鐘,每5分鐘搖晃一次,每次一分鐘,然后用無(wú)菌吸水紙吸干表面水分轉(zhuǎn)入改良2號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)40~50天即可出現(xiàn)小叢芽。培養(yǎng)條件:使用色溫4000K LED照明燈光照10~12小時(shí)/天,光照強(qiáng)度1800~2000lex,溫度23~26℃;
(6)叢芽增殖:將叢芽轉(zhuǎn)入改良3號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)40~50天,叢芽幾乎增殖長(zhǎng)滿整個(gè)接種瓶。培養(yǎng)條件:使用色溫4000K LED照明燈光照10~12小時(shí)/天,光照強(qiáng)度1800~2000lex,溫度23~26℃;
(7)壯苗:將高0.3cm以上的叢芽接入改良4號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)50~60天,瓶?jī)?nèi)1.5cm以上小苗和1.5cm以下的小苗比例在7∶3~5∶5之間,將1.5cm以下小苗循環(huán)轉(zhuǎn)入改良4號(hào)培養(yǎng)基中即可實(shí)現(xiàn)周年保持一定數(shù)量的生產(chǎn)。培養(yǎng)條件:使用色溫4000K LED照明燈光照10~12小時(shí)/天,光照強(qiáng)度1800~2000lex,溫度23~26℃;
(8)生根出苗:將高1.5cm以上小苗接入改良5號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)80~90天,苗平均高度4~5cm,根系發(fā)達(dá)、葉色濃厚即可開(kāi)瓶馴化。培養(yǎng)條件:使用色溫4000K LED照明燈光照12~14小時(shí)/天,光照強(qiáng)度2000~2500lex,溫度23~26℃。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛組培工廠化育苗方法,其特征在于:所述改良培養(yǎng)基配方如下:
改良1號(hào)培養(yǎng)基:硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.05-0.2mg/L、6-芐基腺嘌呤0.2-0.6mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH:5.6-6.0、水為去氯自來(lái)水;
改良2號(hào)培養(yǎng)基:硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.2-0.3mg/L、6-芐基腺嘌呤2-3mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH:5.6-6.0、水為去氯自來(lái)水;
改良3號(hào)培養(yǎng)基:硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0.5-1.5mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH:5.6-6.0、水為去氯自來(lái)水;
改良4號(hào)培養(yǎng)基:硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5-0.1g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0.05-0.2mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH:5.6-6.0、水為去氯自來(lái)水;
改良5號(hào)培養(yǎng)基:硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀950mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、香蕉凍干粉7-10g/L、黃腐酸鈣0.5-0.1g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、活性炭0.7-1g/L、白糖15g/L、瓊脂4-5g/L、PH:5.6-6.0、水為去氯自來(lái)水。