本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛組培工廠化育苗方法。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛在臨床上及中藥復(fù)方中被廣泛應(yīng)用。鐵皮石斛的應(yīng)用主要以采集野生資源為主，隨著野生資源的日漸枯竭，人工鐵皮石斛種植大量興起。而目前大多數(shù)鐵皮石斛人工種植種苗都來自于分株、扦插和種子無菌播種繁殖，前兩種方式徒耗大量資源并且發(fā)展緩慢，后種方式屬于有性繁殖，有一定的生產(chǎn)效率，但是該方法存在種苗變異性大，性質(zhì)表現(xiàn)不一致導(dǎo)致藥材理化指標(biāo)波動(dòng)太大，不能滿足中藥材GAP對(duì)藥材質(zhì)量控制的平穩(wěn)性。田間篩選高產(chǎn)、抗病、外觀、口感良好的鐵皮石斛單叢進(jìn)行理化指標(biāo)分析，理化指標(biāo)符合中國藥典要求后利用其單株莖段進(jìn)行克隆，對(duì)于優(yōu)質(zhì)種苗商品化的生產(chǎn)和資源的合理利用具有重要的意義?，F(xiàn)有石斛組培工廠化育苗基本參考其他蘭科屬生產(chǎn)的培養(yǎng)基、添加物以及培養(yǎng)條件，雖然生產(chǎn)有一定效率，但是種苗培養(yǎng)過程依然存在原球莖、叢芽及幼苗褐化、黃化等死亡等現(xiàn)象。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的問題是提供一種鐵皮石斛組培工廠化育苗方法。通過一系列簡(jiǎn)單易行的方法對(duì)田間種質(zhì)進(jìn)行篩選，培養(yǎng)過程中操作方法、培養(yǎng)基、添加物、以及培養(yǎng)條件改良來改善目前鐵皮石斛組織培養(yǎng)生產(chǎn)的缺點(diǎn)。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一種鐵皮石斛組培工廠化育苗方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)種源篩選：石斛生長(zhǎng)旺季6～9月份對(duì)外觀少病蟲害，生長(zhǎng)健壯的單叢種苗進(jìn)行逐一標(biāo)記，采集前每月噴施三次EM菌、黃腐酸鈣和蕓苔素，采收季節(jié)11～3月對(duì)所標(biāo)記封頂成熟的種苗進(jìn)行中國藥典相應(yīng)理化指標(biāo)作全檢，對(duì)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的種苗進(jìn)行莖段采集；
(2)外植體預(yù)處理：將石斛鮮條莖段放入加入適量洗潔精的35～45℃溫水中浸泡30～60分鐘，將浸泡好的石斛莖段的葉鞘剝掉不能傷及節(jié)上潛伏芽，葉鞘剝掉的莖段切成每一節(jié)一個(gè)段，用異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣50～200mg/L浸泡30～60分鐘，然后用清水清洗吸水紙吸干表面水分待用；
(3)外植體滅菌：將莖段用75％酒精浸10～15秒，立即放入0.1％升汞中8～12分鐘，并不時(shí)輕晃，最后取出莖段用無菌水清洗4～5次，再用無菌吸水紙吸干表面水分待用；
(4)莖段腋芽誘導(dǎo)：將切好莖段接入改良1號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)10～15天，腋芽開始萌動(dòng)，之后使用色溫4000K LED照明燈光照8～10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1000～1200lex，溫度23～26℃；
(5)叢芽誘導(dǎo)：待腋芽長(zhǎng)到0.5～1cm時(shí)，切下芽體放入含有異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣50～200mg/L無菌水中浸泡20～30分鐘，每5分鐘搖晃一次，每次一分鐘，然后用無菌吸水紙吸干表面水分轉(zhuǎn)入改良2號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)40～50天即可出現(xiàn)小叢芽。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照10～12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800～2000lex，溫度23～26℃；
(6)叢芽增殖：將叢芽轉(zhuǎn)入改良3號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)40～50天，叢芽幾乎增殖長(zhǎng)滿整個(gè)接種瓶。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照10～12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800～2000lex，溫度23～26℃；
(7)壯苗：將高0.3cm以上的叢芽接入改良4號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)50～60天，瓶?jī)?nèi)1.5cm以上小苗和1.5cm以下的小苗比例在7∶3～5∶5之間，將1.5cm以下小苗循環(huán)轉(zhuǎn)入改良4號(hào)培養(yǎng)基中即可實(shí)現(xiàn)周年保持一定數(shù)量的生產(chǎn)。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照10～12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800～2000lex，溫度23～26℃；
(8)生根出苗：將高1.5cm以上小苗接入改良5號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)80～90天，苗平均高度4～5cm，根系發(fā)達(dá)、葉色濃厚即可開瓶馴化。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2000～2500lex，溫度23～26℃。
改良培養(yǎng)基配方如下：
改良1號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.05-0.2mg/L、6-芐基腺嘌呤0.2-0.6mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良2號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.2-0.3mg/L、6-芐基腺嘌呤2-3mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良3號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0.5-1.5mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良4號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5-0.1g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0.05-0.2mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良5號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀950mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、香蕉凍干粉7-10g/L、黃腐酸鈣0.5-0.1g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、活性炭0.7-1g/L、白糖15g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水。
有益效果：該鐵皮石斛組培工廠化育苗方法通過簡(jiǎn)單易行的方法對(duì)田間雜亂種質(zhì)進(jìn)行篩選，篩選出高產(chǎn)、抗病、外觀、口感良好且質(zhì)量符合中國藥典標(biāo)準(zhǔn)的鐵皮石斛莖段，極大的縮短了品種篩選時(shí)間；培養(yǎng)過程中MS培養(yǎng)基中大量元素的改良、添加物中增加黃腐酸鈣和新型食品抗氧化劑異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣、培養(yǎng)條件使用色溫4000K的led光源的照明、以及在生產(chǎn)壯苗過程中循環(huán)轉(zhuǎn)接一定規(guī)格的小苗，提高了組培苗的生長(zhǎng)速度，減少了生產(chǎn)過程中小苗褐化、黃化、生長(zhǎng)不良的狀況和組培苗的周轉(zhuǎn)次數(shù)，提高了工廠化生產(chǎn)效率。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：
該鐵皮石斛組培工廠化育苗方法包括如下步驟：
(1)種源篩選：石斛生長(zhǎng)旺季6～9月份對(duì)外觀少病蟲害，生長(zhǎng)健壯的單叢種苗進(jìn)行逐一標(biāo)記，采集前每月噴施三次EM菌、黃腐酸鈣和蕓苔素，采收季節(jié)11～3月對(duì)所標(biāo)記封頂成熟的種苗進(jìn)行中國藥典相應(yīng)理化指標(biāo)作全檢，對(duì)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的種苗進(jìn)行莖段采集；
(2)外植體預(yù)處理：將石斛鮮條莖段放入加入適量洗潔精的35℃溫水中浸泡60分鐘，將浸泡好的石斛莖段的葉鞘剝掉不能傷及節(jié)上潛伏芽，葉鞘剝掉的莖段切成每一節(jié)一個(gè)段，用異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣50mg/L浸泡60分鐘，然后用清水清洗吸水紙吸干表面水分待用；
(3)外植體滅菌：將莖段用75％酒精浸10秒，立即放入0.1％升汞中8分鐘，并不時(shí)輕晃，最后取出莖段用無菌水清洗5次，再用無菌吸水紙吸干表面水分待用；
(4)莖段腋芽誘導(dǎo)：將切好莖段接入改良1號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)10天，腋芽開始萌動(dòng)，之后使用色溫4000K LED照明燈光照10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1000lex，溫度26℃；
(5)叢芽誘導(dǎo)：待腋芽長(zhǎng)到0.5cm時(shí)，切下芽體放入含有異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣50mg/L無菌水中浸泡30分鐘，每5分鐘搖晃一次，每次一分鐘，然后用無菌吸水紙吸干表面水分轉(zhuǎn)入改良2號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)50天即可出現(xiàn)小叢芽。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800lex，溫度23℃；
(6)叢芽增殖：將叢芽轉(zhuǎn)入改良3號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天，叢芽幾乎增殖長(zhǎng)滿整個(gè)接種瓶。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2000lex，溫度26℃；
(7)壯苗：將高0.3cm以上的叢芽接入改良4號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)50天，瓶?jī)?nèi)1.5cm以上小苗和1.5cm以下的小苗比例是7∶3，將1.5cm以下小苗循環(huán)轉(zhuǎn)入改良4號(hào)培養(yǎng)基中即可實(shí)現(xiàn)周年保持一定數(shù)量的生產(chǎn)。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1900lex，溫度24℃；
(8)生根出苗：將高1.5cm以上小苗接入改良5號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)82天，苗平均高度4cm，根系發(fā)達(dá)、葉色濃厚即可開瓶馴化。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照13小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2200lex，溫度25℃。
實(shí)施例2：
該鐵皮石斛組培工廠化育苗方法包括如下步驟：
(1)種源篩選：石斛生長(zhǎng)旺季6～9月份對(duì)外觀少病蟲害，生長(zhǎng)健壯的單叢種苗進(jìn)行逐一標(biāo)記，采集前每月噴施三次EM菌、黃腐酸鈣和蕓苔素，采收季節(jié)11～3月對(duì)所標(biāo)記封頂成熟的種苗進(jìn)行中國藥典相應(yīng)理化指標(biāo)作全檢，對(duì)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的種苗進(jìn)行莖段采集；
(2)外植體預(yù)處理：將石斛鮮條莖段放入加入適量洗潔精的35～45℃溫水中浸泡35分鐘，將浸泡好的石斛莖段的葉鞘剝掉不能傷及節(jié)上潛伏芽，葉鞘剝掉的莖段切成每一節(jié)一個(gè)段，用異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣160mg/L浸泡50分鐘，然后用清水清洗吸水紙吸干表面水分待用；
(3)外植體滅菌：將莖段用75％酒精浸14秒，立即放入0.1％升汞中11分鐘，并不時(shí)輕晃，最后取出莖段用無菌水清洗5次，再用無菌吸水紙吸干表面水分待用；
(4)莖段腋芽誘導(dǎo)：將切好莖段接入改良1號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)13天，腋芽開始萌動(dòng)，之后使用色溫4000K LED照明燈光照9小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1100lex，溫度25℃；
(5)叢芽誘導(dǎo)：待腋芽長(zhǎng)到0.9cm時(shí)，切下芽體放入含有異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣160mg/L無菌水中浸泡27分鐘，每5分鐘搖晃一次，每次一分鐘，然后用無菌吸水紙吸干表面水分轉(zhuǎn)入改良2號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)48天即可出現(xiàn)小叢芽。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2000lex，溫度25℃；
(6)叢芽增殖：將叢芽轉(zhuǎn)入改良3號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)48天，叢芽幾乎增殖長(zhǎng)滿整個(gè)接種瓶。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1900lex，溫度26℃；
(7)壯苗：將高0.3cm以上的叢芽接入改良4號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)58天，瓶?jī)?nèi)1.5cm以上小苗和1.5cm以下的小苗比例在5∶5之間，將1.5cm以下小苗循環(huán)轉(zhuǎn)入改良4號(hào)培養(yǎng)基中即可實(shí)現(xiàn)周年保持一定數(shù)量的生產(chǎn)。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800lex，溫度23℃；
(8)生根出苗：將高1.5cm以上小苗接入改良5號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)87天，苗平均高度5cm，根系發(fā)達(dá)、葉色濃厚即可開瓶馴化。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照13小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2500lex，溫度25℃。
實(shí)施例3：
該鐵皮石斛組培工廠化育苗方法包括如下步驟：
(1)種源篩選：石斛生長(zhǎng)旺季6～9月份對(duì)外觀少病蟲害，生長(zhǎng)健壯的單叢種苗進(jìn)行逐一標(biāo)記，采集前每月噴施三次EM菌、黃腐酸鈣和蕓苔素，采收季節(jié)11～3月對(duì)所標(biāo)記封頂成熟的種苗進(jìn)行中國藥典相應(yīng)理化指標(biāo)作全檢，對(duì)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的種苗進(jìn)行莖段采集；
(2)外植體預(yù)處理：將石斛鮮條莖段放入加入適量洗潔精的35～45℃溫水中浸泡55分鐘，將浸泡好的石斛莖段的葉鞘剝掉不能傷及節(jié)上潛伏芽，葉鞘剝掉的莖段切成每一節(jié)一個(gè)段，用異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣200mg/L浸泡40分鐘，然后用清水清洗吸水紙吸干表面水分待用；
(3)外植體滅菌：將莖段用75％酒精浸12秒，立即放入0.1％升汞中9分鐘，并不時(shí)輕晃，最后取出莖段用無菌水清洗4次，再用無菌吸水紙吸干表面水分待用；
(4)莖段腋芽誘導(dǎo)：將切好莖段接入改良1號(hào)培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)10天，腋芽開始萌動(dòng)，之后使用色溫4000K LED照明燈光照10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1200lex，溫度25℃；
(5)叢芽誘導(dǎo)：待腋芽長(zhǎng)到0.8cm時(shí)，切下芽體放入含有異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣180mg/L無菌水中浸泡27分鐘，每5分鐘搖晃一次，每次一分鐘，然后用無菌吸水紙吸干表面水分轉(zhuǎn)入改良2號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)42天即可出現(xiàn)小叢芽。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1900lex，溫度25℃；
(6)叢芽增殖：將叢芽轉(zhuǎn)入改良3號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)48天，叢芽幾乎增殖長(zhǎng)滿整個(gè)接種瓶。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800lex，溫度25℃；
(7)壯苗：將高0.3cm以上的叢芽接入改良4號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)58天，瓶?jī)?nèi)1.5cm以上小苗和1.5cm以下的小苗比例在7∶3之間，將1.5cm以下小苗循環(huán)轉(zhuǎn)入改良4號(hào)培養(yǎng)基中即可實(shí)現(xiàn)周年保持一定數(shù)量的生產(chǎn)。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照11小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800lex，溫度24℃；
(8)生根出苗：將高1.5cm以上小苗接入改良5號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)81天，苗平均高度4cm，根系發(fā)達(dá)、葉色濃厚即可開瓶馴化。培養(yǎng)條件：使用色溫4000K LED照明燈光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2500lex，溫度23℃。
改良培養(yǎng)基配方如下：
改良1號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.05-0.2mg/L、6-芐基腺嘌呤0.2-0.6mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良2號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.2-0.3mg/L、6-芐基腺嘌呤2-3mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良3號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0.5-1.5mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良4號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀760mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、黃腐酸鈣0.5-0.1g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0.05-0.2mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、白糖20g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水；
改良5號(hào)培養(yǎng)基：硝酸鈣200mg/L、硝酸銨500mg/L、硝酸鉀950mg/L、硫酸鎂180mg/L、磷酸二氫鉀100mg/L、螯合鐵35mg/L、硫酸錳22.3mg/L、硫酸鋅8.6mg/L、氯化鈷0.025mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.025mg/L、碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、煙酸0.5mg/L、VB6 0.5mg/L、VB1 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、土豆全粉10-15g/L、香蕉凍干粉7-10g/L、黃腐酸鈣0.5-0.1g/L、萘乙酸0.2-0.5mg/L、6-芐基腺嘌呤0mg/L、異抗壞血酸鈉或抗壞血酸鈣20-100mg/L、活性炭0.7-1g/L、白糖15g/L、瓊脂4-5g/L、PH：5.6-6.0、水為去氯自來水。
以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及實(shí)施方式內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。