1.一種防治棉花黃萎病的復(fù)合微生物菌肥,其特征在于,該微生物菌肥的原料配比為:阿布拉鏈霉菌菌粉10-30份,田無(wú)鏈霉菌菌粉10-30份,土壤短芽孢桿菌菌粉10-30份,克勞氏芽孢桿菌菌粉10-30份,桔綠木霉菌粉10-30份,黃腐酸鉀10-30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治棉花黃萎病的復(fù)合微生物菌肥,其特征在于,其制備方法,包括以下步驟:
步驟一、阿布拉鏈霉菌菌粉的制備
取出阿布拉鏈霉菌菌種保藏管,用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)7天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為阿布拉鏈霉菌種子液;
二級(jí)種子擴(kuò)培:將上述制備的阿布拉鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至滅菌的阿布拉鏈霉菌液體二級(jí)種子培養(yǎng)基上,500L的發(fā)酵罐裝液量為350L,通氣量為每分鐘液氣比為1:0.8,28-30℃培養(yǎng)36-48小時(shí),待菌體含量達(dá)到80g/L時(shí),即可作為阿布拉鏈霉菌二級(jí)種子液;
發(fā)酵:將上述制備的阿布拉鏈霉菌二級(jí)種子液以20%的接種量接種至滅菌的阿布拉鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與阿布拉鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的阿布拉鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-10cm,控溫28-32℃,前兩天空氣濕度保持為60%-75%,過(guò)后空氣濕度保持為40%-50%,發(fā)酵3-5天,檢測(cè)其孢子含量不低于30億CFU/g,即可低溫風(fēng)干,待水分含量低于10%,粉碎過(guò)100目篩,即得到阿布拉鏈霉菌菌粉;
其中,所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基:硝酸鉀:1克,可溶性淀粉:20克,磷酸氫二鉀:0﹒5克,硫酸鎂:0﹒5克,氯化鈉:0﹒5克,硫酸亞鐵:0﹒01克,瓊脂:20克,蒸餾水補(bǔ)足1000ml,PH7﹒2~7﹒4;
其中,所述的阿布拉鏈霉菌二級(jí)液體種子培養(yǎng)基:菜粕粉2%,木薯粉2%,氯化鈉0.2%,碳酸鈣1%,硫酸鎂0.1%,PH7﹒2~7﹒4;
其中,所述的阿布拉鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:粗玉米皮80%,菜粕2%,木薯粉1%,石粉9%,麩皮8%,硫酸錳0.004%,磷酸氫二鉀0.1%,硫酸鎂0.05%,固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟二、田無(wú)鏈霉菌菌粉的制備
取出田無(wú)鏈霉菌菌種保藏管,用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)7天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為田無(wú)鏈霉菌種子液;
二級(jí)種子擴(kuò)培:將上述制備的田無(wú)鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至滅菌的田無(wú)鏈霉菌液體二級(jí)種子培養(yǎng)基上,500L的發(fā)酵罐裝液量為350L,通氣量為每分鐘液氣比為1:0.8,28-30℃培養(yǎng)36-48小時(shí),待菌體含量達(dá)到60g/L時(shí),即可作為田無(wú)鏈霉菌二級(jí)種子液;
發(fā)酵:將上述制備的田無(wú)鏈霉菌二級(jí)種子液以20%的接種量接種至滅菌的田無(wú)鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與田無(wú)鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的田無(wú)鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-10cm,控溫28-32℃,前兩天空氣濕度保持為60%-75%,過(guò)后空氣濕度保持為40%-50%,發(fā)酵3-5天,檢測(cè)其孢子含量不低于50億CFU/g,即可低溫風(fēng)干,待水分含量低于10%,粉碎過(guò)100目篩,即得到田無(wú)鏈霉菌菌粉;
其中,所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基與步驟一中的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基相同;
其中,所述的田無(wú)鏈霉菌二級(jí)液體種子培養(yǎng)基:棉粕粉2%,玉米粉2%,氯化鈉0.2%,碳酸鈣1%,硫酸鎂0.1%,磷酸氫二鉀0.1%,PH7﹒2~7﹒4;
其中,所述的田無(wú)鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:甘蔗渣80%,菜粕2%,木薯粉1%,石粉9%,粗玉米皮8%,硫酸錳0.004%,磷酸氫二鉀0.1%,硫酸鎂0.05%,固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟三、土壤短芽孢桿菌菌粉的制備
取出土壤短芽孢桿菌保藏管,用無(wú)氮固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)72小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有無(wú)氮固體培養(yǎng)基,在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí),用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫,接種至裝有300L土壤短芽孢桿菌種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中,開(kāi)攪拌120r/min,前8小時(shí)通氣量為100L/min,8-24小時(shí)后通氣量為200L/min ,24小時(shí)后通氣量為300L/min ,30℃培養(yǎng)32-48小時(shí),待總菌數(shù)含量不低于20億cfu/ml,即可作為土壤短芽孢桿菌種子液;
發(fā)酵:將上述制備的土壤短芽孢桿菌種子液以10%-20%的比例接種至土壤短芽孢桿菌固體培養(yǎng)基上,混勻,在淺盤上發(fā)酵,堆料厚度為5-10cm,控制發(fā)酵溫度為30-40℃,發(fā)酵36-48小時(shí),待芽孢含量不低于50億cfu/g,即可曬干,待水分含量低于10%,粉碎過(guò)100目篩,即得到土壤短芽孢桿菌菌粉;
其中,所述無(wú)氮固體培養(yǎng)基:蔗糖10g,磷酸氫二鉀0.2g,硫酸鎂0.2g,氯化鈉0.2g,硫酸鈣0.1g,碳酸鈣5g,瓊脂18g,蒸餾水1000mL,pH7.2;
其中,所述土壤短芽孢桿菌種子培養(yǎng)基:糖蜜20g/L,玉米淀粉10 g/L, 棉粕粉40 g/L,硫酸鎂0.4 g/L,硫酸錳0.6g/L,磷酸二氫鉀0.6 g/L,碳酸鈣10 g/L, pH7.0,各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
其中,所述的土壤短芽孢桿菌固體培養(yǎng)基:甘蔗渣57%,麩皮35%,棉粕5%,石粉1%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟四、克勞氏芽孢桿菌菌粉的制備
取出克勞氏芽孢桿菌保藏管,用營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)48小時(shí),在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基,在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫,接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中,開(kāi)攪拌120r/min,前10小時(shí)通氣量為200L/min,10小時(shí)后通氣量為320L/min ,30℃培養(yǎng)16-24小時(shí),待總菌含量不低于20億cfu/ml,即可作為克勞氏芽孢桿菌種子液;
發(fā)酵:將上述制備的克勞氏芽孢桿菌種子液以總接種量的10%-20%的接種量加至克勞氏芽孢桿菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基中,混勻,在淺盤上發(fā)酵,堆料厚度為5-10cm,控制發(fā)酵溫度為30-40℃,發(fā)酵36-48小時(shí),待芽孢含量不低于80億cfu/g,即可曬干,待水分含量低于10%,粉碎過(guò)100目篩,即得到克勞氏芽孢桿菌菌粉;
其中,所述營(yíng)養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基:蛋白胨10.0 g/L, 牛肉膏3.0 g/L,氯化鈉5.0 g/L,瓊脂20 g/L ,pH 7.2 ± 0.2;
其中,所述液體種子培養(yǎng)基:糖蜜35 g/L, 豆粕粉20 g/L,硫酸鎂0.6g/L,硫酸錳0.5 g/L,磷酸二氫鉀0.3 g/L,碳酸鈣5.0 g/L,pH7.0;
其中,所述的克勞氏芽孢桿菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基:麩皮50%,粗玉米皮 42%,棉粕5%,石粉1%,啤酒糟2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟五、桔綠木霉菌粉的制備
桔綠木霉種子液的制備:取出桔綠木霉菌種保藏管,用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇,30℃培養(yǎng)6天,在平板下挑取單個(gè)菌落劃線接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天,待菌苔長(zhǎng)滿茄子瓶,產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫,調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml,即為桔綠木霉種子液;
發(fā)酵:將上述制備的桔綠木霉種子液以2%的接種量接種至滅菌的桔綠木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上,菌種與桔綠木霉固體培養(yǎng)基混合均勻后,將接好種的桔綠木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上,物料高度為5-10cm,控溫28-32℃,濕度保持為60%-75%,發(fā)酵4-6天,檢測(cè)其總孢子含量不低于30億CFU/g,即可低溫風(fēng)干,待水分含量低于10%,粉碎過(guò)100目篩,即得到桔綠木霉菌粉;
其中,所述的PDA固體培養(yǎng)基:土豆200g,蔗糖20g,水1000mL,瓊脂20g;
其中,所述的桔綠木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基:甘蔗渣85%,芝麻渣粕2%,玉米芯5%,石粉4%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氫二鉀0.4%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基含水量50%-60%;各培養(yǎng)基滅菌的條件為:0.10-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘;
步驟六、將上述步驟中的阿布拉鏈霉菌菌粉10-30份,田無(wú)鏈霉菌菌粉10-30份,土壤短芽孢桿菌菌粉10-30份,克勞氏芽孢桿菌菌粉10-30份,桔綠木霉菌粉10-30份與黃腐酸鉀10-30份混勻,包裝即為復(fù)合微生物菌肥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治棉花黃萎病的復(fù)合微生物菌肥,其特征在于,該復(fù)合微生物菌肥在防治黃萎病的方法為拌種,拌種的用量為每千克種子用50-150克復(fù)合微生物菌肥均勻拌種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治棉花黃萎病的復(fù)合微生物菌肥,其特征在于,該復(fù)合微生物菌肥在防治黃萎病的方法為澆根,澆根的使用方法為:將復(fù)合微生物菌粉稀釋100-200倍,每棵棉花澆根復(fù)合微生物菌粉稀釋液50-100毫升。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治棉花黃萎病的復(fù)合微生物菌肥,其特征在于,該復(fù)合微生物菌肥在防治黃萎病的方法為底施:在翻地之前均勻施入本復(fù)合微生物菌肥5-10kg。