本發(fā)明涉及煙草種植技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種綜合提高煙田除草和煙苗抗病能力并減少致畸發(fā)生的方法。

背景技術(shù)：

化學(xué)農(nóng)藥在農(nóng)作物病蟲害防治，保障農(nóng)業(yè)豐收發(fā)揮了巨大作用，在農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化進(jìn)程中仍將繼續(xù)發(fā)揮重要作用。但是，在我們使用農(nóng)藥的過(guò)程中，如不能科學(xué)合理的使用，如超量施用、不對(duì)癥施用、亂混亂用，不僅達(dá)不到防治病蟲草害的目的，反而對(duì)保護(hù)對(duì)象造成傷害，如出現(xiàn)藥害，農(nóng)作物不能正常生長(zhǎng)發(fā)育，嚴(yán)重的枯萎死亡。

廣東曾有煙葉產(chǎn)區(qū)因水稻田施用二氯喹啉酸防治雜草后，第二年種植煙草則出現(xiàn)生長(zhǎng)畸形，煙葉質(zhì)量明顯下降，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響煙農(nóng)種煙的積極性，阻礙了煙區(qū)的穩(wěn)定和發(fā)展。針對(duì)該問(wèn)題，廣東省煙草公司聯(lián)合相關(guān)科研院所開(kāi)展了研究攻關(guān)，查明致畸原因是因土壤殘留二氯喹啉酸等除草劑致煙草畸形生長(zhǎng)。二氯喹啉酸，俗稱：稗無(wú)蹤、殺稗豐、稗凈等。是防除稻田稗草的特效選擇性除草劑，屬激素型喹啉羧酸類除草劑，雜草中毒癥狀與生長(zhǎng)素類作用相似，主要用于防治稗草且適用期長(zhǎng)，頗受農(nóng)戶青睞。但近年來(lái)，隨著二氯喹啉酸使用頻率增加，其藥害問(wèn)題也日趨嚴(yán)重，須引起足夠重視。那么，如何合理科學(xué)使用二氯喹啉酸后，獲得在有效除去雜草的基礎(chǔ)上煙葉不發(fā)生藥害致畸是本領(lǐng)域目前急需解決的技術(shù)難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有對(duì)二氯喹啉酸合理科學(xué)使用的技術(shù)不足，提供一種綜合提高煙田除草和煙苗抗病能力的方法。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

提供一種綜合提高煙田除草和煙苗抗病能力并減少致畸發(fā)生的方法，包括以下步驟：

S1.檢測(cè)煙田土壤中二氯喹啉酸的含量；

S2.調(diào)整煙田土壤中二氯喹啉酸的含量使處于1.04×10^-2～2.08×10^-2mg/kg之間；

其中，當(dāng)土壤中二氯喹啉酸的含量小于1.04×10^-2mg/kg時(shí)，向土壤中施加適量二氯喹啉酸；當(dāng)土壤中二氯喹啉酸的含量大于2.08×10^-2mg/kg時(shí)，將煙田空置48.6～66.7天后在移栽入煙苗或者向所述土壤中施加活性炭。

優(yōu)選地，所述活性炭的施加量是46.88～750kg/hm²。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述活性炭的施加量是187.5kg/hm²。

優(yōu)選地，所述活性炭的施加方法是分別以48.75～750kg/hm²的活性炭用量將活性炭均勻拌入煙田土壤，然后再移栽5～6片真葉期的煙苗。

本發(fā)明提供所述的方法在防治煙苗病毒病方面的應(yīng)用。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明根據(jù)土壤中殘留的二氯喹啉酸含量范圍針對(duì)性采取科學(xué)措施，使得土壤中殘留二氯喹啉酸被科學(xué)控制在安全的濃度范圍內(nèi)，一是能夠發(fā)揮二氯喹啉在上茬作物種植時(shí)的除草作用；二是在安全濃度范圍內(nèi)，二氯喹啉酸還能夠在一定程度上持續(xù)抑制煙田雜草的生長(zhǎng)；三是在安全濃度范圍內(nèi)，煙株發(fā)生致畸的可能性不但被嚴(yán)格控制或降低，而且煙株的抗病活性因子被激發(fā)，增強(qiáng)了抗病機(jī)能；四是緩和耕作用地矛盾，避免了因田塊土壤殘留二氯喹啉酸而無(wú)法種植煙葉，以致造成煙農(nóng)經(jīng)濟(jì)損失、影響煙草種植生產(chǎn)布局的情況發(fā)生，有利于連片種植的布局規(guī)劃，推進(jìn)現(xiàn)代煙草農(nóng)業(yè)建設(shè)。

附圖說(shuō)明

圖1二氯喹啉酸對(duì)煙草POD酶活力的影響結(jié)果。

圖2二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片SOD活性的動(dòng)態(tài)分析。

圖3二氯喹啉酸處理煙草葉片的過(guò)氧化物酶電泳圖。

圖4二氯喹啉酸處理煙草根的過(guò)氧化物酶電泳圖。

圖5二氯喹啉酸處理煙草葉的超氧化物歧化酶電泳圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。下述實(shí)施例僅用于示例性說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。除非特別說(shuō)明，下述實(shí)施例中使用的試劑 為常規(guī)市購(gòu)或商業(yè)途徑獲得的試劑，除非特別說(shuō)明，下述實(shí)施例中使用的方法和設(shè)備為本領(lǐng)域常規(guī)使用的方法和設(shè)備。

實(shí)施例1

二氯喹啉酸在供試土壤及水樣中的降解動(dòng)態(tài)基本上遵循一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，即：Ct＝C₀e^－kt，t_1/2＝ln2/k。表1中列出了隨機(jī)抽取的土壤樣品中二氯喹啉酸殘留消解方程的參數(shù)，在樣品中二氯喹啉酸的殘留量Ct與降解時(shí)間t之間的相關(guān)系數(shù)r均在0.87以上。樣品中二氯喹啉酸的半衰期范圍為48.6d～66.7d。

表1 二氯喹啉酸在土壤樣品中的殘留降解結(jié)果

實(shí)施例2

1.超氧化物歧化酶活性的測(cè)定

試劑配制：0.05mol·L^-1磷酸緩沖液(pH7.8)；提取介質(zhì)：50mmol·L^-1pH7.8磷酸緩沖液(內(nèi)含1％聚乙烯吡咯烷酮)；130mmol·L^-1甲硫氨酸(Met)溶液：稱1.399gMet，用磷酸緩沖液溶解并定容至100mL；750μmol·L^-1NBT：稱取0.06133gNBT，用磷酸緩沖液溶解并定容至100mL，避光保存；

100μmol·L^-1EDTA-Na₂：稱取0.037224gEDTA-Na₂，定容1000mL；20μmol·L^-1核黃素溶液：稱取0.0075g核黃素，定容至100mL，避光保存。

酶液的制備：取第四片展開(kāi)煙草葉片，去中脈，準(zhǔn)確稱取0.3g(共三份)于預(yù)冷的研缽中，加入預(yù)冷的提取介質(zhì)1.5mL(分三次加入，一次研磨，兩次沖洗)，在冰浴中研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，-4℃13000rpm下冷凍離心20min，上清夜即為SOD粗提液。

表2顯色反應(yīng)試劑配置

顯色反應(yīng)：取透明度好、質(zhì)地相同的試管，樣品測(cè)定管和對(duì)照(一支遮光，2支照光)，按表2加入試劑?；靹蚝?，給1支對(duì)照管罩上比試管稍長(zhǎng)的雙層黑色硬紙?zhí)渍诠?，與其他各管同時(shí)置于4000lx紫外燈下反應(yīng)5min(要求各管照光情況一致，反應(yīng)溫度控制在25～35℃之間，視酶活性高低適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)時(shí)間)。

2.樣品超氧化物歧化酶活性的測(cè)定：

至反應(yīng)結(jié)束后，用黑布罩蓋上試管，終止反應(yīng)。以遮光的對(duì)照管作為空白，分別在560nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管的吸光度，按下式計(jì)算超氧化物歧化酶(SOD)活性。

式中：SOD總活性以每克鮮重酶單位表示；

A₀——照光對(duì)照管的光吸收值；

A_s——樣品管的光吸收值；

V₁——樣液總體積(mL)；

V_T——測(cè)定時(shí)樣品用量(mL)；

W——樣品鮮重(g)。

3.過(guò)氧化物酶(POD)活性的測(cè)定

參考薛應(yīng)龍(1985)的方法，

試劑配制：18mmol·L^-1愈創(chuàng)木酚溶液：0.11g愈創(chuàng)木酚用磷酸緩沖液定容至50mL，現(xiàn)配現(xiàn)用；1％雙氧水。

酶液提?。好敢禾崛》椒ㄍ趸锲缁富钚缘臏y(cè)定中酶液的制備。

4.樣品過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定：

2.8mL含18mmol·L^-1愈創(chuàng)木酚的磷酸緩沖液，加入0.1mL的粗酶提液(對(duì)照用0.1mL的磷酸緩沖液代替)，最后再加入0.1mL的1％雙氧水溶液，用1cm比色皿測(cè)定反應(yīng)2min后反應(yīng)體系在470nm處的吸光度OD470；每個(gè)樣品重復(fù)3次，酶活性用單位鮮重葉片在單位時(shí)間內(nèi)光密度的變化值表示(ΔOD470nm·g^-1·min^-1)。

5.二氯喹啉酸對(duì)煙草過(guò)氧化物酶的影響實(shí)驗(yàn)

電泳凝膠液儲(chǔ)備液的配制：30％丙烯酰胺(Acr)；1％甲叉雙丙烯酰胺(Bis)；10％的過(guò)硫酸銨(AP，冰箱貯藏，不得超過(guò)5d)；分離膠緩沖液(3mol·L^-1Tris-HCl，pH8.8：稱取36.6gTris加30mL蒸餾水和48mL1mol·L^-1HCl，再用酸度計(jì)調(diào)pH至8.8，定容至100mL；濃縮膠緩沖液貯備液配置：(0.5mol·L^-1Tris-HCl，pH6.8)：稱取6.0g Tris加40mL蒸餾水和約20mL 1mol·L^-1HCl，再用酸度計(jì)調(diào)pH至6.8，定容至100mL；電極緩沖液(0.25mol·L^-1Tris，1.92mol·L^-1甘氨酸，pH8.3)：稱取3g Tris、14.4g甘氨酸，重蒸水定容至100mL，用時(shí)稀釋10倍；N、N、N、N-四甲基乙二胺(TEMED)；

提樣緩沖液：稀釋4倍的濃縮膠緩沖液；

樣品處理液：5mL甘油，0.5mL0.1％溴酚藍(lán)，5mL濃縮膠緩沖液，加水14.5mL。

表3丙烯酰胺凝膠配制表

分離膠30mL，濃縮膠10mL，可根據(jù)需要按比例增減各成分的體積。

根據(jù)需要從表3中選擇適當(dāng)濃度值，配置凝膠。過(guò)氧化物酶選7.5％分離膠較合適，超氧化物歧化酶用10％分離膠，可溶性蛋白可根據(jù)需要配置。將配制好的凝膠置真空干燥氣，抽氣10min，再加入TEMED15μL，混勻后用玻棒引流注入膠室。加到離凹槽3cm處為止，立即用注射器輕輕在膠溶液上面鋪1cm的水層，但不要攪亂丙烯酰胺膠面。待分離膠和水層之間出現(xiàn)清晰的界面時(shí)，表示聚合已完成。用注射器小心吸出上層覆蓋水層，按表3加入配置好的濃縮膠，抽氣后加入5μLTEMED，混合后加到分離膠上層，插入樣品梳。

酶樣制備：取第四片展開(kāi)煙草葉片，除去中脈，準(zhǔn)確稱取1g，加入少量提取緩沖液，置冰浴研磨勻漿后定容至1.5mL，13000r·min^-1離心15min，上清液為粗酶液。取此液0.5mL加入等體積處理液。用微量注射器吸取30μL混合液，注入樣品槽內(nèi)。

過(guò)氧化物酶的染色：稱取0.1g聯(lián)苯胺，加少量無(wú)水乙醇溶解，依次加入5mol·L^-1的HAc10mL，1.5mol·L^-1的NaAc10mL，H₂O70mL，最后加入3～5滴H₂O₂。將此顯色液傾入放有電泳凝膠片的直徑20cm培養(yǎng)皿中，不斷攪動(dòng)，顯色后最后用7％醋酸固定。求出酶帶相對(duì)偏移率Rf值。

6.二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片超氧化物歧化酶的影響

分離膠和濃縮膠的配置方式見(jiàn)表2。電泳時(shí)，超氧化物歧化酶的進(jìn)樣量30μL， 電泳是在4℃的冰箱中進(jìn)行，電泳時(shí)間為4h。分離膠濃度為10％，濃縮膠為3％。

酶樣制備：取第四片展開(kāi)煙草葉片，除去中脈，準(zhǔn)確稱取1g，加入少量提取緩沖液，置冰浴研磨勻漿后定容至1.5mL，13000r·min^-1離心15min，上清液為粗酶液。取此液0.5mL加入等體積處理液。用微量注射器吸取30μL混合液，注入樣品槽內(nèi)。

超氧化物歧化酶的染色：將凝膠浸泡在2.45×10^-4mol·L^-1NBT溶液中20min，然后轉(zhuǎn)移到含0.028mol·L^-1的四甲基乙二胺，2.8×10^-5mol·L^-1核黃素和0.036mol·L^-1磷酸緩沖液(pH值7.8)中浸泡20min，最后將膠放在0.05mol·L^-1磷酸緩沖液(pH值7.8)、1×10^-4mol·L^-1EDTA溶液中用紫外光照射20min，顯色。求出酶帶相對(duì)偏移率Rf值。

7.二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片過(guò)氧化物酶活性的動(dòng)態(tài)分析

煙草處理方法和采樣方法：剪取移栽后第20天的煙苗第四片展開(kāi)的煙葉，擦凈組織表面的污物，去中脈剪碎混勻。稱取0.3g，共三份放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3mL96％乙醇研成勻漿，再加乙醇，研磨至組織發(fā)白。用濾紙(提前濕潤(rùn))過(guò)濾到25mL棕色容量瓶中，定容。測(cè)定二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片POD活性的影響。

從圖1可以看出，二氯喹啉酸對(duì)煙草POD酶活力的影響是隨施用量增加而增強(qiáng)。移植后28d，不同施藥量處理較對(duì)照酶活力增強(qiáng)。對(duì)照煙草葉片中過(guò)氧化物酶活力為17.47OD·g^-1·min^-1，二氯喹啉酸濃度為1.04×10^-2mg/kg、2.08×10^-2mg/kg、4.17×10^-2mg/kg、8.33×10^-2mg/kg、1.67×10^-1mg/kg處理煙草葉片中過(guò)氧化物酶活力分別為29.61OD·g^-1·min^-1、23.73OD·g^-1·min^-1、30.33OD·g^-1·min^-1、41.00OD·g^-1·min^-1、57.73OD·g^-1·min^-1，處理較對(duì)照分別提高69.47％、35.80％、73.61％、134.69％、230.45％。

8.二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片超氧化物歧化酶活性的動(dòng)態(tài)分析

煙草處理方法和采樣方法同葉綠素含量的測(cè)定，測(cè)定二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片SOD活性的影響。從圖2可以看出，移植后14d，二氯喹啉酸濃度為1.04×10^-2mg/kg、2.08×10^-2mg/kg、4.17×10^-2mg/kg、8.33×10^-2mg/kg、1.67×10^-1mg/kg處理煙草SOD活性較對(duì)照有升高趨勢(shì)，分別較對(duì)照提高9.21％、 32.60％、109.36％、136.16％、151.94％。移植后21d處理較對(duì)照差異不顯著。

9.二氯喹啉酸對(duì)煙草過(guò)氧化物酶的影響

二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片過(guò)氧化物酶的影響見(jiàn)圖3所示，圖3中，A為正常煙草，B、C、D、E、F分別為二氯喹啉酸濃度為1.04×10^-2mg/kg、2.08×10^-2mg/kg、4.17×10^-2mg/kg、8.33×10^-2mg/kg、1.67×10^-1mg/kg處理煙草葉片的過(guò)氧化物同工酶在30d時(shí)的電泳結(jié)果。從圖3可以看出，煙草的過(guò)氧化物同工酶有10條酶帶(E1～E10)。對(duì)照煙葉和二氯喹啉酸不同施用量處理后煙葉的酶帶存在一定的差異。二氯喹啉酸處理后的酶帶顏色較對(duì)照明顯加深，隨著二氯喹啉酸施用量的增加，酶帶的顏色有加深的趨勢(shì)。二氯喹啉酸處理煙草較對(duì)照多出一條酶帶E1。結(jié)果表明，二氯喹啉酸能使煙草過(guò)氧化物酶活性增強(qiáng)，對(duì)過(guò)氧化物酶有激活作用，致使酶帶顏色加深，二氯喹啉酸處理酶帶較對(duì)照酶增多，活性增強(qiáng)。

表4不同濃度二氯喹啉酸處理煙草葉片POD酶帶的Rf值

二氯喹啉酸對(duì)煙草根部過(guò)氧化物酶的影響見(jiàn)圖4所示的二氯喹啉酸對(duì)煙草根部過(guò)氧化物酶影響的電泳試驗(yàn)圖。比較明顯的可以看到9條酶帶(E1～E9)。二氯喹啉酸不同濃度處理煙葉的電泳酶帶較對(duì)照煙草酶帶顏色明顯加深，并且又多一條酶帶E1。這一結(jié)果表明，二氯喹啉酸處理能夠?qū)е聼煵莞窟^(guò)氧化物酶的活力增強(qiáng)，致使酶帶增多，顏色變深。圖4中，A為對(duì)照煙草，B、C、D、E、F、G分別為二氯喹啉酸濃度為1.04×10^-2mg/kg、2.08×10^-2mg/kg、4.17×10^-2mg/kg、8.33×10^-2mg/kg、1.67×10^-1mg/kg處理煙草根的過(guò)氧化物酶在 移植后30d時(shí)電泳圖。

表5不同濃度二氯喹啉酸處理煙草根部POD酶帶的Rf值

10.二氯喹啉酸對(duì)煙草葉片超氧化物歧化酶的影響見(jiàn)圖5所示。圖5中，A為對(duì)照煙草，B、C、D、E、F、G分別為土壤中二氯喹啉酸濃度為1.04×10^-2mg/kg、2.08×10^-2mg/kg、4.17×10^-2mg/kg、8.33×10^-2mg/kg、1.67×10^-1mg/kg煙草葉片在移植30d時(shí)超氧化物酶電泳圖。從圖5可以看出，煙草的超氧化物酶帶有四條，分別是E1、E2、E3、E4。移植后30d，處理煙草超氧化物酶活性較對(duì)照差異不顯著。

表6不同濃度二氯喹啉酸對(duì)煙草根部SOD酶帶Rf值的測(cè)定

本發(fā)明通過(guò)研究總結(jié)，煙草施用二氯喹啉酸后刺激脂膜過(guò)氧化物的產(chǎn)生，產(chǎn)生大量的活性氧，因此表現(xiàn)出POD活性的提高和SOD酶活性增強(qiáng)。后期積累的活性氧超出防御酶系統(tǒng)的清除能力，POD酶活性表現(xiàn)出活性下降。本發(fā)明結(jié)果表明POD和SOD在一定程度上都有升高，從而在清除煙草體內(nèi)自由基起作用。

實(shí)施例3二氯喹啉酸處理后對(duì)煙草生長(zhǎng)影響及除草效果實(shí)驗(yàn)

1.實(shí)驗(yàn)癥狀觀察

根據(jù)葉寬抑制率的不同制定煙草生長(zhǎng)畸形分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：葉寬抑制率在20％以下，表示該藥劑對(duì)煙草基本上無(wú)致畸作用，以“0”表示；I級(jí)：葉片輕度受害，新葉可伸張，葉寬抑制率在20％～40％，以“+”表示；II級(jí)：中度受害，新葉稍可伸張，葉寬抑制率在40％～60％，以“++”表示；III級(jí)：嚴(yán)重受害，新葉不能正常伸張，葉寬抑制率在60％以上，以“+++”表示。

二氯喹啉酸主要防治的雜草是稗草，本實(shí)驗(yàn)以稗草的株數(shù)和鮮重變化統(tǒng)計(jì)分析二氯喹啉酸對(duì)雜草的防治效果。

在煙草5～6片真葉期移入二氯喹啉酸添加濃度為1.04×10^-2mg/kg、1.50×10^-2mg/kg、2.08×10^-2mg/kg、4.17×10^-2mg/kg、8.33×10^-2mg/kg、1.67×10^-1mg/kg藥土中，分別在7d、14d、21d、28d、35d觀察煙草受害情況；在35d取0.1m²土樣，統(tǒng)計(jì)樣方內(nèi)稗草的株數(shù)并稱取鮮重。

表7二氯喹啉酸處理煙草的癥狀表現(xiàn)

從表7可見(jiàn)，不同的施藥量對(duì)煙草影響的程度不同。當(dāng)濃度為1.67×10^-1mg/kg時(shí)，煙草在7d時(shí)就能表現(xiàn)受害癥狀，在移植后14d后，煙草新生葉片就開(kāi)始發(fā)生畸形，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，畸形的癥狀更加明顯，主要畸形都發(fā)生在新生葉片，而對(duì)下部葉片影響不是很大。當(dāng)濃度為8.33×10^-2mg/kg，移植后14d，煙草畸形癥狀開(kāi)始出現(xiàn)，畸形程度較濃度為1.67×10^-1時(shí)小。當(dāng)用藥量再降低時(shí)，煙草發(fā)生畸形的時(shí)間相當(dāng)，只是畸形程度變小。而濃度為1.04×10^-2mg/kg～2.08×10^-2mg/kg，煙草基本不產(chǎn)生畸形，只是葉色較對(duì)照稍微加深，葉緣微卷。

從煙草產(chǎn)生的畸形癥狀的時(shí)間和發(fā)生癥狀的部位可以看出，煙草對(duì)二氯喹啉酸是很敏感的，土壤中濃度高于2.08×10^-2mg/kg就會(huì)產(chǎn)生畸形。并且隨著施用量的加大，畸形癥狀更加明顯。煙草發(fā)生的畸形癥狀主要發(fā)生在新生葉片，煙草下部葉片不表現(xiàn)畸形。因此可以推斷，二氯喹啉酸被煙草吸收后由基部向頂部傳導(dǎo)，對(duì)煙草頂端生長(zhǎng)點(diǎn)部位造成影響，使受害煙草表現(xiàn)出畸形癥狀。

表8二氯喹啉酸對(duì)稗草生長(zhǎng)的影響

由表8可見(jiàn)，二氯喹啉酸在低濃度下仍對(duì)稗草生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。在濃度為1.67×10^-1時(shí)，對(duì)稗草株數(shù)防效和鮮重減少均在70％左右；在濃度為1.04×10^-2時(shí)，對(duì)稗草株數(shù)防效和鮮重減少還保持在30％以上。

2.二氯喹啉酸對(duì)煙草生長(zhǎng)的影響

由表8可以看出，隨著二氯喹啉酸濃度的增加，煙草株高、葉寬和葉長(zhǎng)的抑制率增加。

表8二氯喹啉酸對(duì)煙草生長(zhǎng)的影響

由表9可以看出，移植后30d，隨二氯喹啉酸濃度的增加，煙草株高、葉寬、葉長(zhǎng)抑制率增加。葉寬抑制率較移植后15d抑制率增大。

表9二氯喹啉酸對(duì)煙草生長(zhǎng)的影響

注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有相同字母者表示在5％水平差異不顯著(DMRT法)。

由表10可以看出，二氯喹啉酸對(duì)煙草上部葉片有明顯的抑制作用，隨著濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)煙草葉寬抑制程度加大。

表10二氯喹啉酸對(duì)煙草生長(zhǎng)的影響

注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有相同字母者表示在5％水平差異不顯著(DMRT法)。

綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)二氯喹啉酸的濃度控制在1.04×10^-2mg/kg～2.08×10^-2mg/kg，不僅煙株能夠正常生長(zhǎng)，而且對(duì)稗草生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，稗草株數(shù)防效和鮮重減少的比例約在30～50％之間。

實(shí)施例4二氯喹啉酸殘留的土壤中施加活性炭對(duì)煙苗生產(chǎn)影響的實(shí)驗(yàn)

1.施加活性炭對(duì)煙苗生長(zhǎng)的影響

選用直徑18cm，高20cm大小一致的花盆進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，土壤選用曬干的河泥和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室土壤混合使用，過(guò)篩。試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，5個(gè)處理二氯喹啉酸在土壤中濃度4.17×10-²mg/kg。分別以不同的活性炭用量均勻拌入土壤，本實(shí)施例以48.75kg/hm²、97.5kg/hm²、187.5kg/hm²、375kg/hm²、750kg/hm²活性炭用量進(jìn)行說(shuō)明。然后，移栽5～6片真葉期煙苗，在移栽后第15d和第30d選定頂葉下第四片展開(kāi)葉計(jì)算平均葉長(zhǎng)、葉寬，株高抑制率。從表11可以看出，移植后15d，活性炭處理煙草葉寬抑制率為-2.44％，葉長(zhǎng)抑制率為-6.57％，株高抑制率為9.60％，較對(duì)照差異不顯著。移植后30d，活性炭處理煙草葉寬抑制率為5.18％，葉長(zhǎng)抑制率為0，株高抑制率為1.09％，煙草葉寬、葉長(zhǎng)和株高較對(duì)照差異不顯著。結(jié)果表明，施用活性炭能夠很好地吸附土壤中的二氯喹啉酸，煙草生長(zhǎng)正常。

由表12可以看出，當(dāng)活性炭施用量為46.88kg/hm²，移植后15d，煙草葉寬抑制率為18.54％，葉長(zhǎng)抑制率為13.25％，株高抑制率為13.87％，較對(duì)照差異顯著。活性炭施用量為93.75kg/hm²，移植后15d，煙草葉寬抑制率為1.81％，葉長(zhǎng)抑制率為2.96％，株高抑制率為-0.23％，較對(duì)照差異不顯著。移植后30d， 葉寬抑制率為8.96％，葉長(zhǎng)抑制率為3.53％，株高抑制率為-1.94％，較對(duì)照差異不顯著。結(jié)果表明，活性炭施用量為93.75kg/hm²時(shí)，煙草生長(zhǎng)正常，畸形癥狀已經(jīng)恢復(fù)。當(dāng)活性炭施用量為187.5kg/hm²、375kg/hm²、750kg/hm²時(shí)，對(duì)煙草生長(zhǎng)不產(chǎn)生不良影響。

表11施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草生長(zhǎng)的影響

注：1)表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有相同字母者表示在5％水平差異不顯著(DMRT法)。

2)土壤中二氯喹啉酸濃度為4.17×10^-2mg/kg，活性炭(150kg/hm²)均勻拌入土壤(按2250t/hm2土重計(jì))。

表12施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草生長(zhǎng)的影響

注：1)表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有相同字母者表示在5％水平差異不顯著(DMRT法)。2)土壤中二氯喹啉酸濃度為4.17×10^-2mg/kg，在藥土中均勻拌入活性炭。

2.施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草葉片超氧化物歧化酶活性的影響采摘第四片展開(kāi)煙草葉片分別在15d、30d測(cè)定施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草葉片SOD活性的影響，結(jié)果見(jiàn)表13。表13可以看出，移植后15d，對(duì)照煙草葉片超氧化物歧化酶活性為309.45U·g^-1，未施用活性炭較對(duì)照煙草葉片SOD活性提高14.26％?；钚蕴坑昧繛?3.75kg/hm²時(shí)，煙草葉片SOD活性較對(duì)照降低5.24％，較對(duì)照差異不顯著。移植后30d，未施用活性炭較對(duì)照煙草葉片SOD活性降低59.89％。當(dāng)活性炭的用量為93.75kg/hm²時(shí)，較對(duì)照煙草葉片SOD活性提高2.94％?；钚蕴坑昧繛?3.75kg/hm²、187.5kg/hm²、375kg/hm²、750kg/hm²時(shí)，煙草SOD活性較對(duì)照差異不顯著。

表13施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草超氧化物歧化酶活性的影響

注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有相同字母者表示在5％水平差異不顯著(DMRT法)。

3.施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草葉片過(guò)氧化物酶活性的影響

采摘第四片展開(kāi)煙草葉片分別在15d、30d測(cè)定施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草葉片POD活性的影響，結(jié)果見(jiàn)表13。由表13可以看出，對(duì)照煙草葉片POD活性移植后15d測(cè)定結(jié)果為17.62U·g^-1·min^-1，未施用活性炭時(shí)煙草葉片POD活性為37.72U·g^-1·min^-1，較對(duì)照煙草提高114.00％。活性炭施用量為187.5kg/hm²、375kg/hm²、750kg/hm²時(shí)，較對(duì)照POD活性差異不顯著。

移植后30d，對(duì)照煙草過(guò)氧化物酶活性為16.08U·g^-1·min^-1，未施用活性炭時(shí)煙草葉片POD活性為61.65U·g^-1·min^-1，較對(duì)照提高284.11％。隨著活性炭用量增加，煙草葉片POD活性是降低的，活性炭施用量為187.5kg/hm²、375kg/hm²、750kg/hm²時(shí)，較對(duì)照煙草POD活性差異不顯著?；钚蕴繉?duì)二氯喹啉酸處理的土壤造成煙草畸形有較好的緩解作用。活性炭施用量為187.5kg/hm²時(shí)，煙草不表現(xiàn)畸形癥狀。當(dāng)活性碳施用量加大時(shí)，煙草生長(zhǎng)正常較對(duì)照無(wú)明顯差異。

表14施用活性炭對(duì)二氯喹啉酸處理煙草葉片過(guò)氧化物酶活性的影響

注：表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有相同字母者表示在5％水平差異不顯著(DMRT法)。

實(shí)施例4應(yīng)用試驗(yàn)

選用直徑18cm，高20cm大小一致的花盆進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，將所有的花盆分成四組，按照以下方法進(jìn)行分組試驗(yàn)：

第一組花盆(30個(gè))中裝入的土壤是在稻-煙輪作的田中隨機(jī)選取，檢測(cè)土壤樣中二氯喹啉酸濃度為4.17×10^-2mg/kg，以187.5kg/hm²活性炭拌入土壤，移栽5～6片真葉期煙苗。

第二組花盆(30個(gè))裝入的土壤是土壤樣中二氯喹啉酸濃度為4.17×10^-2mg/kg，沒(méi)有拌入活性炭，移栽5～6片真葉期煙苗。

第三組花盆(30個(gè))裝入的土壤是初始檢測(cè)土壤樣中二氯喹啉酸濃度為4.17×10^-2mg/kg，已經(jīng)放置55天，移栽5～6片真葉期煙苗。

第四組花盆(30個(gè))裝入的土壤是土壤選用曬干的河泥和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室土壤混合使用，過(guò)篩，經(jīng)檢測(cè)土壤中不含二氯喹啉酸，移栽5～6片真葉期煙苗。

1.在各組花盆中各隨機(jī)選取10個(gè)觀察煙苗生長(zhǎng)情況，比較如表15所示：

表15煙草的癥狀表現(xiàn)

2.在各組花盆中各隨機(jī)選取10個(gè)進(jìn)行抗TMV(煙草普通花葉病毒)試驗(yàn)。將各個(gè)花盆中的煙苗的整個(gè)葉片均勻摩擦接種10μg/ml的TMV 200μL。接種3天后用TAS-ELISA檢測(cè)TMV病毒的增殖情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表16所示：

表16接種TMV后的癥狀表現(xiàn)

3.在各組花盆中各隨機(jī)選取10個(gè)進(jìn)行抗CMV(煙草黃瓜花葉病毒)試驗(yàn)，試驗(yàn)方法同上。結(jié)果見(jiàn)表17所示：

表17接種CMV后的癥狀表現(xiàn)