本發(fā)明涉及一種新的食用菌菌種及其栽培，尤其涉及一種厚褶奧德蘑新菌種、栽培方法及其用途。
背景技術(shù)：
厚褶奧德蘑Oudemansiella crassifolia，亦稱寬褶小奧德蘑，屬于真菌界、擔(dān)子菌門、傘菌目、泡頭菌科、小奧德蘑屬。厚褶奧德蘑Oudemansiella crassifolia由Corner于1994年在馬來西亞首次采集并發(fā)表(Corner,Gdns'Bull.,Singapore，1994)，然后在中國由楊祝良于2009年發(fā)現(xiàn)并記載。
目前食用菌的產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛，我國食用菌每年的產(chǎn)量達(dá)到2000萬噸以上，占全球70％以上。在食用菌產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展的今天，越來越多的珍稀食用菌品種逐漸進(jìn)入人們的視野，許多原有的珍稀品種逐漸被馴化，如竹蓀、茶薪菇、離褶傘等。小奧德蘑屬有三十多個(gè)品種，其中絕大多數(shù)可以食用，且富含營養(yǎng)成分及功效成分，個(gè)別品種如粘小奧德蘑(O.mucida)可產(chǎn)生粘蘑菌素(mucidin)，拮抗真菌，對小白鼠肉瘤180、艾氏癌的抑制率分別為80％和90％，效果顯著。因此小奧德蘑屬在食用菌、藥用菌馴化栽培和保健品開發(fā)研究中具有十分廣闊的前景。厚褶奧德蘑屬于肉質(zhì)傘菌，其味道鮮美，口感脆嫩，開發(fā)前景較好。同時(shí)，它屬于木生菌，產(chǎn)量較高、栽培性狀穩(wěn)定，肉質(zhì)較厚耐貯存，產(chǎn)業(yè)化前景看好。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
第一方面，本發(fā)明提供一種厚褶奧德蘑新菌種，該菌種采集自廣東肇慶鼎湖山國家級自然保護(hù)區(qū)，經(jīng)鑒定為厚褶奧德蘑新菌種，命名為厚褶奧德蘑Oudemansiella crassifolia HMGIM-S140148，于2016年3月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路珞珈山)，保藏編號為CCTCC NO：M 2016088。
第二方面，本發(fā)明提供一種上述厚褶奧德蘑新菌種的栽培方法，包括組織分離菌種，制作母種，制作原種，制作生產(chǎn)種，栽培培養(yǎng)及出菇管理。
本發(fā)明的組織分離菌種的培養(yǎng)基為發(fā)明人經(jīng)反復(fù)摸索得到的分離培養(yǎng)基，按照質(zhì)量百分比為木屑麩皮汁18-22％，優(yōu)選為20％，瓊脂1.8-2.2％，優(yōu)選為2％，其余為水。
其中，木屑麩皮汁的制備方法為：將木屑：麩皮：水按照體積比1.5-2.5:0.8-1.2:9-11混合，優(yōu)選體積比2：1：10，煮沸10-30分鐘，得到木屑麩皮汁，木屑進(jìn)一步優(yōu)選為闊葉樹木屑。
第三方面，本發(fā)明還提供上述厚褶奧德蘑新菌種在制備抗氧化藥物/抗氧化食品中的用 途，特別是厚褶奧德蘑新菌種的提取物或發(fā)酵液在制備抗氧化藥物/抗氧化食品中的用途。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供一種厚褶奧德蘑新菌種，并且還提供了相應(yīng)的人工栽培方法。該厚褶奧德蘑的人工栽培穩(wěn)定、出菇率高，味道鮮美，并且經(jīng)檢測，有效成分含量豐富，抗氧化作用強(qiáng)，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
具體實(shí)施方式
厚褶奧德蘑新菌種
本發(fā)明提供的一種厚褶奧德蘑新菌種，分離自廣東肇慶鼎湖山國家級自然保護(hù)區(qū)，經(jīng)分子生物學(xué)鑒定和形態(tài)學(xué)鑒定為厚褶奧德蘑新菌種，通過組織分離得到原始菌株，命名為厚褶奧德蘑Oudemansiella crassifolia HMGIM-S140148，于2016年3月7日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為：湖北省武漢市武昌區(qū)八一路珞珈山)，保藏編號為CCTCC M 2016088。
對本發(fā)明的厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的子實(shí)體DNA基因組進(jìn)行提取，PCR擴(kuò)增ITS序列進(jìn)行比對鑒定，發(fā)現(xiàn)與厚褶奧德蘑Oudemansiella crassifolia相似性高達(dá)95％以上，經(jīng)過形態(tài)學(xué)鑒定，鑒定結(jié)果為厚褶奧德蘑Oudemansiella crassifolia新菌種。
本發(fā)明的厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的外觀形態(tài)特征為：子實(shí)體小至中等，菌蓋直徑18-38mm，圓形，開始稍平至凸起，后輕微扁平，有時(shí)候略凹。菌蓋灰黃至黃褐色，邊緣呈黃白至灰黃色，潮濕時(shí)粘。菌肉黃白色，菌蓋中心厚1.5-3mm。菌褶邊緣略膨出，近直生，淡黃白色，每厘米4-6片，排列緊密至稍稀疏。菌柄12-30×1.5-5mm，圓柱形，偶見近圓柱形，菌柄中生，纖維狀，彎曲，表面黃白色到橙灰色，無菌環(huán)，菌柄基部略膨大，無菌托。
本發(fā)明的厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的氨基酸含量高，鎂、鐵及鋅含量豐富。
厚褶奧德蘑新菌種的栽培方法
本發(fā)明還提供一種厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的栽培方法，包括組織分離菌種，制作母種，制作原種，制作生產(chǎn)種，栽培培養(yǎng)及出菇管理。
組織分離菌種是進(jìn)行新菌種栽培的第一步，進(jìn)行組織分離菌種的培養(yǎng)基即分離培養(yǎng)基是發(fā)明人反復(fù)試驗(yàn)得到，分離培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比為木屑麩皮汁18-22％，優(yōu)選為20％，瓊脂1.8-2.2％，優(yōu)選為2％，其余為水。
上述分離培養(yǎng)基中的木屑麩皮汁是采用木屑、麩皮和水進(jìn)行煮沸得到，在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，木屑麩皮汁的制備是通過將木屑：麩皮：水按照體積比1.5-2.5:0.8-1.2:9-11混合，優(yōu)選體積比2：1：10，煮沸10-30分鐘，例如20分鐘，得到木屑麩皮汁，木屑進(jìn)一步優(yōu)選為 闊葉樹木屑，例如青岡木屑。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，分離培養(yǎng)基的制備通過：將闊葉樹木屑如青岡木屑與麩皮和水按照體積比1.5-2.5:0.8-1.2:9-11混合，優(yōu)選體積比2：1：10，煮沸10-30分鐘后，將瓊脂加入溶解，滅菌得到分離培養(yǎng)基。
在得到分離培養(yǎng)基后，將菌種接種至分離培養(yǎng)基，于25℃±1℃恒溫培養(yǎng)，待菌絲長滿斜面后完成組織分離菌種，可以進(jìn)行下一步的制作母種步驟。
在制作母種步驟中，制作母種的培養(yǎng)基為綜合PDA培養(yǎng)基，綜合PDA培養(yǎng)基Potato Dextrose Agar(Medium)是馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的簡稱，是一種常用的培養(yǎng)基，可以在市面上購買得到，本發(fā)明提供一種綜合PDA培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)為馬鈴薯18-20％、葡萄糖1.5-2％、瓊脂2-2.5％、磷酸二氫鉀0.15-0.3％、硫酸鎂0.05-0.15％、維生素B1微量，其余為水。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，綜合PDA培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、瓊脂2％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸鎂0.15％、維生素B1微量，其余為水。
制作綜合PDA培養(yǎng)基后，將分離的菌種接入綜合PDA培養(yǎng)基中，于25℃±1℃恒溫暗培養(yǎng)，待菌絲長滿PDA培養(yǎng)基后完成制作母種，通常情況下，菌絲長滿PDA培養(yǎng)基的時(shí)間在7天-15天之間。
在母種制作完成后，需要進(jìn)行原種制作，原種制作的原種料，按照質(zhì)量百分比為棉籽殼38-43％、優(yōu)選40％，木屑35-40％、優(yōu)選38％，麩皮18-20％、優(yōu)選20％，碳酸鈣1-2％、優(yōu)選2％。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，原種料的組分為：按照質(zhì)量百分比計(jì)40％棉籽殼、38％木屑、20％麩皮、2％碳酸鈣。
原種制作需要將制備的母種接種至原種料袋中，原種料袋通過將原種料的成分裝入菌種袋中，例如聚丙烯菌種袋中，在原種料中打洞，例如采用小木棒在原種料中打洞，在袋口套環(huán)及蓋子，得到原種料袋。
采用原種料制備原種料袋在食用菌栽培中是常規(guī)操作，可以采用食用菌栽培方法中的其他一些常規(guī)制備原種料袋的步驟進(jìn)行。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，提供一種制作原種料袋的方法，按照原種料成分比例稱取棉籽殼，經(jīng)水泡濕，例如浸泡過夜，再按成分比例混入木屑、麩皮、碳酸鈣，裝入聚丙烯菌種袋中，裝好料后用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，然后在袋口套上塑料環(huán)，扣上配套的蓋子，滅菌，得到原種料袋。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述聚丙烯菌種袋為13cm×25cm的耐高溫的聚丙烯菌種袋，所述每個(gè)菌種袋中裝入原種料的量為折合干料250g-300g。
將制作的母種接種入原種料中，于25℃±1℃恒溫暗培養(yǎng)，待菌絲長滿原種料后完成制作原種制作，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，菌絲長滿原種料的時(shí)間在25天-35天之間。
在原種制作完成后，可以進(jìn)行生產(chǎn)種制作，生產(chǎn)種制作的生產(chǎn)種料按照質(zhì)量百分比為棉籽殼38-43％、優(yōu)選40％，木屑35-40％、優(yōu)選38％，麩皮18-20％、優(yōu)選20％，碳酸鈣1-2％、優(yōu)選2％。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，生產(chǎn)種料的組分為：按質(zhì)量百分比計(jì)40％棉籽殼、38％木屑、20％麩皮、2％碳酸鈣。
生產(chǎn)種制作需要將制備的原種接種至生產(chǎn)種料袋，生產(chǎn)種料袋的制備與原種料袋的制備方法基本一致，通過將生產(chǎn)種料的成分裝入菌種袋中，例如聚丙烯菌種袋中，在生產(chǎn)種料中打洞，例如采用小木棒在生產(chǎn)種料中打洞，在袋口套環(huán)及蓋子，得到生產(chǎn)種料袋。
采用生產(chǎn)種料制備生產(chǎn)種料袋在食用菌栽培中是常規(guī)操作，可以采用食用菌栽培方法中的其他一些常規(guī)制備生產(chǎn)種料袋的步驟進(jìn)行。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，按照生產(chǎn)種料成分比例稱取棉籽殼，經(jīng)水泡濕，例如浸泡過夜，再按成分比例混入木屑、麩皮、碳酸鈣，裝入聚丙烯菌種袋中，裝好料后用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，然后在袋口套上塑料環(huán)，扣上配套的蓋子，滅菌，得到生產(chǎn)種袋料。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述聚丙烯菌種袋為15cm×30cm的耐高溫的聚丙烯菌種袋，所述每個(gè)菌種袋中裝入生產(chǎn)種料的量為折合干料350g-400g。
將制作的原種接種入生產(chǎn)種料中，于25℃±1℃恒溫暗培養(yǎng)，待菌絲長滿生產(chǎn)種料后完成生產(chǎn)種制作，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，菌絲長滿生產(chǎn)種料的時(shí)間在25天-35天之間。
制備得到生產(chǎn)種以后，可以將生產(chǎn)種接入栽培料袋進(jìn)行栽培培養(yǎng)，在25℃±1℃、空氣相對濕度60-70％避光培養(yǎng)，待栽培料袋中的菌絲長滿栽培料后，繼續(xù)遮光后熟培養(yǎng)至菌絲完成后熟期。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述菌絲長滿栽培料的培養(yǎng)時(shí)間約為25天-35天之間，繼續(xù)遮光后熟培養(yǎng)完成后熟期的特征為菌棒開始轉(zhuǎn)為帶彈性，菌絲有扭結(jié)小原基開始出現(xiàn)，該遮光后熟培養(yǎng)的時(shí)間約為12天-18天，進(jìn)一步例如為14天-15天。
栽培料袋的制作方法與原種料袋的制作方法相同，通過將栽培料的成分裝入菌種袋中，例如聚丙烯菌種袋中，在栽培料中打洞，例如采用小木棒在生產(chǎn)種料中打洞，在袋口套環(huán)及蓋子，得到栽培料袋。
栽培料按照質(zhì)量百分比為棉籽殼48-52％、優(yōu)選50％，木屑25-30％、優(yōu)選30％，麩皮18-20％、優(yōu)選18％，碳酸鈣1-2％、優(yōu)選1％，硫酸鈣1-2％、優(yōu)選1％。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，栽培料的組分為：按質(zhì)量百分比計(jì)50％棉籽殼、30％木屑、18％麩皮、1％碳酸鈣、1％硫酸鈣。
采用栽培料制備栽培料袋在食用菌栽培中是常規(guī)操作，可以采用食用菌栽培方法中的其他一些常規(guī)制備栽培料袋的步驟進(jìn)行。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，按照栽培料成分比例稱取棉籽殼，經(jīng)水泡濕，例如浸泡過夜，再按成分比例混入木屑、麩皮、碳酸鈣、硫酸鈣，裝入聚丙烯菌種袋中，裝好料后用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，然后在袋口套上塑料環(huán)，扣上配套的蓋子，滅菌，得到栽培料袋。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述聚丙烯菌種袋為17cm×35cm的耐高溫的聚丙烯菌種袋，所述每個(gè)菌種袋中裝入生產(chǎn)種料的量為折合干料450g-500g。
在后熟培養(yǎng)完成后，就可以對厚褶奧德蘑新菌種進(jìn)行出菇管理，調(diào)整溫度25-28℃、相對濕度85-90％，每天光照10小時(shí)，光照強(qiáng)度300-500lx，并保持空氣中二氧化碳濃度小于2％，保持空氣濕潤，當(dāng)長出幼菇時(shí)，每天向幼菇噴水1-2次，直至子實(shí)體菌蓋從內(nèi)收到平伸，采收。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，采收后的栽培袋還可以繼續(xù)遮光后熟培養(yǎng)直至幼菇再次長出并采收，繼續(xù)遮光后熟培養(yǎng)直至幼菇再次長出并采收的培養(yǎng)條件與第一次培養(yǎng)并采收厚褶奧德蘑相同或不同，例如，將采收后的栽培料袋放置于25℃±1℃、空氣相對濕度60-70％的培養(yǎng)室中遮光完成后熟培養(yǎng)，再調(diào)整溫度25-28℃、相對濕度85-90％，每天光照10小時(shí)，光照強(qiáng)度300-500lx，并保持空氣中二氧化碳濃度小于2％，保持空氣濕潤，當(dāng)長出幼菇時(shí)，每天向幼菇噴水1-2次，直至子實(shí)體菌蓋從內(nèi)收到平伸，采收。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，完成后熟培養(yǎng)的栽培料袋，需要打開栽培料袋的蓋子，并且將栽培料袋豎排放置，進(jìn)行出菇管理。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中從長出幼菇到子實(shí)體成熟(子實(shí)體菌蓋從內(nèi)收到平伸)約經(jīng)過2-6天。
厚褶奧德蘑新菌種的用途
本發(fā)明還提供一種厚褶奧德蘑新菌種的用途，用于抗氧化或抗缺氧。
經(jīng)試驗(yàn)證明，厚褶奧德蘑新菌種具有抗氧化活性，包括強(qiáng)還原力、突出的羥自由基(-OH)清除性能和超氧自由基O2-抑制性能，例如厚褶奧德蘑新菌種的提取物，厚褶奧德蘑新菌種的 發(fā)酵液。
厚褶奧德蘑新菌種的提取物、厚褶奧德蘑新菌種的發(fā)酵液都可以用于抗氧化或抗缺氧，具體地，可以用于治療抗氧化的疾病或抗缺氧的疾病，例如用于制備治療抗氧化疾病的藥物或者用于抗氧化的食品/保健品，例如心血管疾病、糖尿病等。
厚褶奧德蘑新菌種的提取物可以為厚褶奧德蘑新菌種菌絲體的提取物，采用溶劑對厚褶奧德蘑新菌種菌絲體進(jìn)行提取得到，溶劑可以選用醇(如甲醇、乙醇、異丙醇)、水、酯(例如乙酸乙酯)、酮(例如丙酮)等或者這些溶劑的混合物。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，提供了一種厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體的水提取物，將厚褶奧德蘑新菌種菌絲體與水按照菌絲體干重質(zhì)量和水體積比1:30的比例，溫度80℃進(jìn)行提取，得到厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體的水提取物。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，提供了一種厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體的乙醇提取物，將厚褶奧德蘑新菌種菌絲體與無水乙醇按照菌絲體干重質(zhì)量和無水乙醇體積比1:30的比例，溫度70℃進(jìn)行提取，得到厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體的乙醇提取物。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，提供了一種厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體和發(fā)酵液的得到方式，將厚褶奧德蘑新菌種接種至PDA固體培養(yǎng)基中，28℃±1℃恒溫培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基后再將菌絲體轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng)液中，25℃±1℃恒溫振蕩培養(yǎng)至發(fā)酵液澄清后，過濾，分別得到厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體和厚褶奧德蘑新菌種的發(fā)酵液。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，制備厚褶奧德蘑新菌種的菌絲體和發(fā)酵液的PDA固體培養(yǎng)基含馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL；PDA培養(yǎng)液含馬鈴薯200g、葡萄糖20g、1000mL水。
厚褶奧德蘑新菌種的提取物、厚褶奧德蘑新菌種的發(fā)酵液可以用于制備抗氧化疾病藥物/食品/保健品，例如一種抗氧化疾病的藥物，包含厚褶奧德蘑新菌種的提取物和/或厚褶奧德蘑新菌種的發(fā)酵液，以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
氧化應(yīng)激是指體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡傾向于氧化，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤，蛋白酶分泌增加，產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物。氧化應(yīng)激是由自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負(fù)面作用，并被認(rèn)為是導(dǎo)致衰老和疾病的一個(gè)重要因素。同時(shí)，體內(nèi)氧化反應(yīng)的失衡也是導(dǎo)致許多疾病如心腦血管疾病、糖尿病的關(guān)鍵原因。
以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1：
厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的栽培方法及得到的子實(shí)體
一、栽培方法如下：
1、培養(yǎng)基制作：
(1)分離培養(yǎng)基為：按照質(zhì)量百分比為青岡木屑麩皮汁為20％，瓊脂為2％，其余為水；
分離培養(yǎng)基的制備：將青岡木屑與麩皮和水按照體積比2：1：10混合，煮沸20分鐘后，將瓊脂加入溶解，分裝試管，在0.11MPa大氣壓、121℃高溫高壓濕熱滅菌30min，得到分離培養(yǎng)基。
(2)母種培養(yǎng)基為：按照質(zhì)量百分比計(jì)馬鈴薯20％、葡萄糖2％、瓊脂2％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸鎂0.15％、維生素B1微量，其余為水；
(3)原種料為：按照質(zhì)量百分比計(jì)40％棉籽殼、38％木屑、20％麩皮、2％碳酸鈣；
原種料袋的制備過程為：稱取棉籽殼，經(jīng)水泡濕過夜，按比例混入木屑、麩皮、碳酸鈣，裝入13cm×25cm耐高溫的透明聚丙烯菌種袋中，折合每袋裝干料250-300g，裝好料后在袋口套上塑料環(huán)，扣上配套的蓋子，在0.147MPa大氣壓、128℃高溫高壓濕熱滅菌90min，冷卻備用，得到可以直接使用的原種料袋；
(4)生產(chǎn)種料為：按質(zhì)量百分比計(jì)40％棉籽殼、38％木屑、20％麩皮、2％碳酸鈣；
生產(chǎn)種料袋的制作過程基本與原種料袋相同，但所用菌種袋為15cm×30cm耐高溫的透明聚丙烯菌種袋。折合每袋裝干料350-400g；
(5)栽培料為：按質(zhì)量百分比計(jì)50％棉籽殼、30％木屑、18％麩皮、1％碳酸鈣、1％硫酸鈣；
栽培料袋的制作過程基本與原種料袋相同，但配方中在混入木屑、麩皮、碳酸鈣時(shí)按比例一并混入硫酸鈣，所用菌種袋采用17cm×35cm耐高溫的透明聚丙烯菌種袋，折合每袋裝干料450-500g；
2、組織分離菌種：將厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088子實(shí)體接種至分離培養(yǎng)基25℃±1℃暗培養(yǎng)至菌絲基本長滿培養(yǎng)基得到組織分離的菌種；
3、將組織分離的菌種接種至母種培養(yǎng)基，25℃±1℃暗培養(yǎng)至菌絲基本長滿培養(yǎng)基得到母種，母種長滿的時(shí)間約需要7天至15天；
4、將母種接種至原種料袋中，確保母種埋入原種料中，25℃±1℃暗培養(yǎng)至菌絲基本吃滿料得到原種，該過程約需要30天左右；
5、將原種接種至生產(chǎn)料袋中，確保原種埋入生產(chǎn)料中，25℃±1℃暗培養(yǎng)至菌絲基本吃滿料得到生產(chǎn)種，該過程約需要30天左右；
6、將生產(chǎn)種接種至栽培料袋中，在25℃±1℃、相對濕度60-70％避光培養(yǎng)，待菌絲長 滿栽培料后(該過程約需要30天左右)，繼續(xù)遮光后熟培養(yǎng)至菌絲完成后熟期(該過程約需要15天左右)，完成后熟期特征為菌棒開始轉(zhuǎn)為帶彈性，菌絲有扭結(jié)小原基開始出現(xiàn)；
7、打開栽培袋蓋子，把栽培袋豎排放置，袋與袋之間留有空隙，在25-28℃、相對濕度85-90％的環(huán)境中，每天光照10小時(shí)，光照強(qiáng)度300-500lx，并保持空氣中二氧化碳濃度小于2％，保持空氣濕潤，當(dāng)長出幼菇時(shí)，每天向幼菇噴施水霧1-2次，直至子實(shí)體菌蓋從內(nèi)收到平伸，說明子實(shí)體已趨成熟，此時(shí)可以采收，從長出幼菇到子實(shí)體成熟約經(jīng)過3天-5天。
8、采收后的栽培袋還可以繼續(xù)遮光后熟培養(yǎng)直至幼菇再次長出并采收，將采收后的栽培料袋放置于25℃±1℃、空氣相對濕度60-70％的培養(yǎng)室中遮光完成后熟培養(yǎng)，再重復(fù)步驟7至采收。
二、栽培結(jié)果：
1、出菇期：該菌種的出菇期長達(dá)2個(gè)月，可出菇3潮；
2、產(chǎn)量：每個(gè)菇袋每潮出菇100克左右，總體生物轉(zhuǎn)化率約在80％左右；
3、子實(shí)體性狀：子實(shí)體菌蓋表面有粘液，前期深褐色，后期顏色變淺，柄長5-10厘米，菌蓋呈傘形，肉厚，較肥嫩。
實(shí)驗(yàn)例1：
人工栽培的厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088子實(shí)體的營養(yǎng)成分測定
對本發(fā)明人工栽培得到的厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088子實(shí)體和卵孢小奧德蘑分別進(jìn)行營養(yǎng)成分測定，包括水解氨基酸，多糖，蛋白質(zhì)及微量元素鎂、鐵、鋅的測定，氨基酸的測定方法參照GB/T 5009.124-2003方法，粗多糖的測定方法參照NY/T 1676-2008/7，蛋白質(zhì)的測定方法參照GB/T 5009.5-2010/第一法，鎂和鐵的測定方法參照GB/T 5009.90-2003，鋅的測定方法參照GB/T 5009.14-2003/第一法，測定的結(jié)果如表1所示。
表1：厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088子實(shí)體和卵孢小奧德蘑子實(shí)體的營養(yǎng)成分對比表
由表1的測定結(jié)果可知，除蛋白質(zhì)含量相當(dāng)以外，厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088的營養(yǎng)成分含量基本都高于卵孢小奧德蘑的營養(yǎng)成分含量，特別是厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088的水解氨基酸總和遠(yuǎn)大于卵孢小奧德蘑，含鎂、鐵及鋅含量豐富。
實(shí)驗(yàn)例2：
厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的還原力測定
對本發(fā)明人工栽培的厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088和靈芝的還原力進(jìn)行測定。
一、測定方法
1、厚褶奧德蘑和靈芝的發(fā)酵液、提取物制備
(1)培養(yǎng)基：PDA固體培養(yǎng)基含200g馬鈴薯、20g葡萄糖、20g瓊脂、1000mL水；PDA液體培養(yǎng)基含200g馬鈴薯、20g葡萄糖、1000mL水；
(2)發(fā)酵液和菌絲體的制備：將厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088和靈芝分別轉(zhuǎn)接到PDA固體培養(yǎng)基中，置于28℃恒溫培養(yǎng)待菌絲長滿后(約5-7天)，分別接種5塊培養(yǎng)菌絲的固體培養(yǎng)基(0.5cm×0.5cm)到含有100mL PDA液體培養(yǎng)基的250mL瓶中，置于25℃恒溫?fù)u床中，于110r·min-1振蕩培養(yǎng)，待發(fā)酵液澄清后取出，分別用100目濾布過濾分別得到發(fā)酵液和菌絲體；
(3)水提取物的制備：分別將厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088和靈芝的菌絲體吸干水分并于60℃烘干至恒重，液氮研磨后，分別取1.5g用蒸餾水浸提，提取條件為料液比為1∶30(質(zhì)量體積比，即菌絲體干重和蒸餾水的體積比)、提取溫度80℃，提取時(shí)間2小時(shí)，定容至50mL，分別得到厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體的水提取物和靈芝的水提取物；
(4)乙醇提取物的制備：分別將厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088和靈芝的菌絲體吸干水分并于60℃烘干至恒重，液氮研磨后，分別取1.5g用無水乙醇浸提，提取條件為料液比為 1∶30(質(zhì)量體積比，即菌絲體干重和無水乙醇的體積比)、提取溫度80℃，提取時(shí)間2小時(shí)，定容至50mL，分別得到厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體的乙醇提取物和靈芝的乙醇提取物。
2、還原力的測定
測定方法：取0.2mol·L-1磷酸緩沖液(pH6.8)和1％K3Fe(CN)6各2.5mL，加入2mL的一定濃度的提取物(待測液)，搖勻后于50℃水浴30min，加入2.5mL10％三氯乙酸，于4000r·min-1離心10min，取上清液2.5mL與2.5mL蒸餾水和0.5mL0.1％FeCl3混合，于700nm處測定光密度D。
通過以下公式計(jì)算得到提取物的還原力：
提取物的還原力＝DX-DX0-D0
其中，DX-提取物的D值，DX0-提取物的本底D值(未處理的直接測定的提取物的D值)，D0-空白對照液的D值(以磷酸緩沖液作空白對照液)。
二、測定結(jié)果
按照上述還原力測定方法，分別測定得到不同濃度的厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體水提取物、厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體乙醇提取物、厚褶奧德蘑CCTCC M2016088發(fā)酵液和靈芝菌絲體水提取物、靈芝菌絲乙醇提取物、靈芝發(fā)酵液的還原力，如表2-表3所示。
表2 6mg/ml的厚褶奧德蘑與靈芝的還原力
從表2可以看出，無論是相同濃度的菌絲體水提取物、乙醇提取物還是發(fā)酵液，厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于靈芝的還原力，特別是厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體水提取物的還原力最強(qiáng)。
表3 3mg/ml的厚褶奧德蘑與2mg/ml的厚褶奧德蘑的還原力
從表3可以看出，在相同濃度下，厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體水提取物還原力最強(qiáng)，厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體乙醇提取物的還原力次之，厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088發(fā)酵液的還原力更低，并且還原力與濃度呈現(xiàn)一定的正相關(guān)，相同的提取物或發(fā)酵液，濃度越高，還原力越強(qiáng)。
實(shí)驗(yàn)例3:
厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的抑制羥自由基能力的測定
測定方法：采用羥自由基測定試劑盒(南京建成)，分別測厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體水提取物、厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體乙醇提取物、厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088發(fā)酵液和靈芝菌絲體水提取物、靈芝菌絲乙醇提取物、靈芝發(fā)酵液的抑制羥自由基能力，結(jié)果如表4所示。
表4抑制羥自由基能力結(jié)果
從表4可以看出，厚褶奧德蘑的菌絲體水提取物和乙醇提取物都具有強(qiáng)烈的清除羥自由基的能力，清除效果甚至好于靈芝。羥自由基(-OH)為高反應(yīng)性自由基，可以通過電子轉(zhuǎn)移、加成以及脫氫等方式與生物體內(nèi)的多種分子作用，造成糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸和脂類等物質(zhì)的氧化性損傷，使細(xì)胞壞死或突變。-OH還與衰老、腫瘤、輻射損傷和細(xì)胞吞噬等有關(guān)，抑制羥自由基(-OH)能力是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)。
實(shí)施例4:
厚褶奧德蘑新菌種CCTCC M 2016088的抗超氧陰離子自由基活力單位的測定
測定方法：采用抗超氧陰離子自由基及產(chǎn)生超氧陰離子自由基測試盒(南京建成)進(jìn)行檢測實(shí)驗(yàn)，并計(jì)算抗超氧陰離子自由基活力單位，對厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體水提取物和厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088發(fā)酵液的抗超氧陰離子自由基活力單位進(jìn)行測定。在反應(yīng)系統(tǒng)中，每升樣品在37℃反應(yīng)40分鐘所抑制的超氧陰離子自由基相當(dāng)于1mg的維生素C所抑制的超氧陰離子自由基的變化值為一個(gè)活力單位。結(jié)果如表5所示。
表5：抗超氧陰離子自由基活力單位結(jié)果
表5的結(jié)果表明，抗超氧陰離子自由基活力單位值越高，說明其所抑制的超氧陰離子自由基變化的能力越強(qiáng)，是抗氧化性越強(qiáng)的一個(gè)表現(xiàn)，厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088菌絲體水提取物和發(fā)酵液都具有突出的抗超氧陰離子自由基活性。
生物體內(nèi)氧化還原反應(yīng)中，大致有2％～5％的氧會產(chǎn)生超氧陰離子自由基，O2-即可做電子給予體，又可接收電子，化學(xué)性質(zhì)非?；顫姟2-還可分解形成更強(qiáng)的活性氧物質(zhì)，如單線態(tài)氧和-OH，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，還能以H2O2的形式產(chǎn)生-OH的前體，從而間接引發(fā)脂質(zhì)過氧化。所以抑制超氧自由基的能力也是評價(jià)抗氧化性的重要項(xiàng)目。
綜上所述，本發(fā)明的厚褶奧德蘑CCTCC M 2016088具有強(qiáng)抗氧化性，尤其是菌絲體水提取物的還原力及清除羥自由基的能力、抗超氧陰離子自由基活力非常突出，在食藥用菌甚至超出了抗氧化性強(qiáng)的靈芝。
以上所述，僅為本發(fā)明的較佳的具體實(shí)施例，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。