1.河蜆三倍體純系高效育成方法,包括如下步驟:
(1)他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑,加入到河蜆人工飼養(yǎng)飼料中,制成喂養(yǎng)料,其中他莫昔芬含量為10~20g/500g喂養(yǎng)料,待用;
(2)投喂:在母蜆產(chǎn)卵前5~10天,按常規(guī)飼料投喂方法對母蜆進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料,每天兩次,早上8:00每100g母蜆投喂10~20g,下午6:00每100g母蜆投喂10~15g;至其卵發(fā)育成熟,然后,取公蜆放在一起,使其自然產(chǎn)卵受精,得受精卵,備用;
(3)熱休克處理:把步驟(2)的受精卵放入溫度為20~24℃恒溫水槽中,在一次卵裂前2~3min,把溫度快速升至39~42℃,保持3~5min;然后取出,放入正常孵育水中待用;
(4)雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中,再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液,其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為80~140mg/l,睪酮的濃度為20~80mg/l;
(5)取步驟(3)處理后的受精卵放入按步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液中,常溫浸泡10~30s,然后取出放于孵化池中正常孵化,至受精卵的胚體在擔輪幼體期之后脫膜,脫膜后進入面盤幼體期;
(6)取步驟(5)中面盤幼體,投喂氯米芬幼體料;配比量為每kg幼體料加10~15g氯米芬,投喂量為每萬只10~20g加有氯米芬的幼體料,直至結(jié)束浮游生活后沉入水底;從而獲得雄性河蜆四倍體純系;
(7)取步驟(6)的雄性四倍體作為父本,取普通二倍體作為母本,采用回交的方式,獲得100%三倍體。