一種模式擬南芥的嫁接方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物嫁接領(lǐng)域，尤其涉及一種模式植物擬南芥的嫁接方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 開展園藝作物砧木與接穗間相互作用機(jī)制的研究，對(duì)于科學(xué)選擇砧穗組合具有重 要意義。但由于人們對(duì)園藝作物遺傳背景了解較少，限制了進(jìn)一步深入闡述砧穗互作的分 子機(jī)制。模式植物擬南芥以種子繁殖，出苗整齊，生長(zhǎng)周期短，遺傳背景清晰，是進(jìn)行分子機(jī) 理研究的非常合適的材料。關(guān)于擬南芥嫁接技術(shù)相關(guān)報(bào)道較少，且由于擬南芥植株小，下胚 軸細(xì)弱，材質(zhì)較軟等問題，在嫁接過程中容易存在以下問題，最終降低嫁接成活率：
[0003] 擬南芥植株小，下胚軸細(xì)弱，不易進(jìn)行嫁接操作，如何培養(yǎng)獲得下胚軸粗壯的適宜 嫁接操作的擬南芥植株是一個(gè)亟需解決的問題。擬南芥嫁接對(duì)其下胚軸進(jìn)行切割時(shí)，存在 切口易被刀片壓扁，難以保持切口圓整，嫁接面變小，影響嫁接口愈合的問題。擬南芥材質(zhì) 較軟，嫁接后不能像木本植物那樣直立培養(yǎng)，平置是用到的最多的培養(yǎng)方法，但平置培養(yǎng) 時(shí)，由于擬南芥葉片對(duì)生，接穗葉片的生長(zhǎng)極易導(dǎo)致嫁接口的錯(cuò)位，降低嫁接成活率。嫁接 后，砧木根的生長(zhǎng)勢(shì)勢(shì)必會(huì)有一個(gè)相對(duì)較低的時(shí)期，而此時(shí)接穗部分極易于下胚軸部位自 行長(zhǎng)出側(cè)根，從而保證自身植株的生長(zhǎng)，而側(cè)根的萌發(fā)會(huì)影響嫁接口的愈合及砧木主根的 生長(zhǎng)，降低嫁接成活率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供的一種模式植物擬南芥的嫁接 方法，以提高擬南芥嫁接的成活率。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明技術(shù)方案包括：
[0006] -種模式植物擬南芥的嫁接方法，其包括以下步驟：
[0007] A、將擬南芥種子經(jīng)表面消毒后，接種于高溫高壓滅菌的添加4%蔗糖的1/2MS固體 培養(yǎng)基中，經(jīng)4°C低溫春化處理后，置于弱光下處理3天-5天，再轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)3天-5天，待下 胚軸生長(zhǎng)至6毫米-8毫米，將下胚軸粗壯、長(zhǎng)勢(shì)一致、兩片子葉平展且真葉剛剛萌發(fā)的6天-8 天苗齡的擬南芥植株用于嫁接；
[0008] B、用鑷子分別取出作為砧木和接穗的擬南芥實(shí)生苗，置于事先準(zhǔn)備的多個(gè)無菌 1.2%濃度瓊脂糖凝膠板上，將另一無菌1.2%濃度瓊脂糖凝膠板蓋于相應(yīng)實(shí)生苗下胚軸 上，并于下胚軸偏上部位置迅速切斷嫁接材料，要求切口圓整，并保證接穗材料的下胚軸部 分較短，而砧木材料的下胚軸部分較長(zhǎng)；
[0009] C、將切好的嫁接材料轉(zhuǎn)入0.7-0.8%濃度瓊脂凝膠上，將瓊脂凝膠切除一段寬為 0.5厘米-1厘米的長(zhǎng)條;將長(zhǎng)為5毫米、內(nèi)徑/外徑為0.5/1.5的塑料管以垂直于瓊脂凝膠切 口邊緣的方式平置于凝膠上，并保證塑料管管口距離切口的距離為2毫米;將砧木與接穗分 別插入塑料管內(nèi)進(jìn)行固定，使材料緊密接觸，并使接穗材料的葉片部分置于切除條狀凝膠 處;切割一塊大于砧木根部面積的1/2MS+3 %蔗糖固體培養(yǎng)基，蓋在砧木的根部，擠出氣泡， 使凝膠與培養(yǎng)基緊密結(jié)合，形成嫁接體；
[0010] D、將嫁接體置于21°C環(huán)境下垂直培養(yǎng)7天，待嫁接口愈合后，將成活的嫁接苗轉(zhuǎn)入 以1/4MS為液體培養(yǎng)基的水培設(shè)備中繼續(xù)培養(yǎng)，期間接穗下胚軸如有側(cè)根發(fā)出，則及時(shí)剪 去。
[0011] 所述的嫁接方法，其中，上述步驟A中具體為培養(yǎng)用于嫁接擬南芥植株之蔗糖濃度 篩選過程如下：

[0013] 3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的嫁接方法，其特征在于，上述步驟B中具體為不同的切口 部位對(duì)擬南芥根生長(zhǎng)情況及嫁接成活率的篩選過程如下：

[0015] 本發(fā)明提供的一種模式擬南芥的嫁接方法，采用本發(fā)明的嫁接方法可以解決由于 擬南芥植株細(xì)弱帶來的操作困難，切口不圓整，嫁接成活率低等問題，通過培養(yǎng)基配方的篩 選得到最適嫁接的粗壯擬南芥植株;并通過瓊脂糖砧板濃度的篩選，得到最圓整的植株切 口；通過調(diào)整砧木與接穗下胚軸長(zhǎng)度，得到接穗側(cè)根萌發(fā)率最低且側(cè)根生長(zhǎng)量最短的嫁接 體;嫁接時(shí)將培養(yǎng)基切除一條可以避免由于葉片生長(zhǎng)導(dǎo)致的嫁接口錯(cuò)位與成活率降低的情 況出現(xiàn);而嫁接培養(yǎng)基不添加蔗糖且根部覆蓋含蔗糖培養(yǎng)基可以保證砧木根部正常生長(zhǎng)的 同時(shí)減少側(cè)根生長(zhǎng);嫁接成活后通過水培的方式減少側(cè)根的萌發(fā)，并方便了側(cè)根的剪除操 作。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 本發(fā)明提供了一種模式擬南芥的嫁接方法，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果 更加清楚、明確，以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅 用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017] 本發(fā)明提供了一種模式擬南芥的嫁接方法，其包括以下步驟：
[0018] 1、嫁接材料準(zhǔn)備:擬南芥種子經(jīng)表面消毒后，接種于高溫高壓滅菌的添加4%蔗糖 的1/2MS固體培養(yǎng)基中，經(jīng)4°C低溫純春處理后，置于弱光下處理3-5天，轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)3-5 天，待下胚軸生長(zhǎng)至6-8毫米，將下胚軸粗壯、長(zhǎng)勢(shì)一致、兩片子葉平展且真葉剛剛萌發(fā)的6-8天苗齡的擬南芥植株用于嫁接。為了培養(yǎng)出下胚軸粗壯、長(zhǎng)度合適的易于嫁接操作的擬南 芥植株，蔗糖濃度的篩選。表1為不同蔗糖濃度對(duì)擬南芥植株生長(zhǎng)的影響。
[0019]表1

[0021] 當(dāng)然也可以采用其他方式，比如表2所示的，以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同輔助 成分，觀察擬南芥植株的生長(zhǎng)狀況如下：
[0022] 表 2

[0024] 由于添加成分不能幫助選擇最健壯，下胚軸粗度最合適植株，故以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng) 基，添加不同濃度蔗糖。
[0025] 2、切割：用鑷子分別取出作為砧木和接穗的擬南芥實(shí)生苗，置于事先準(zhǔn)備的無菌 1.2%濃度瓊脂糖凝膠板上，將另一無菌瓊脂糖凝膠蓋于實(shí)生苗下胚軸上，并于下胚軸偏上 部位置迅速切斷嫁接材料，要求切口圓整，并保證接穗材料的下胚軸部分較短，而砧木材料 的下胚軸部分較長(zhǎng)，以減少接穗部分側(cè)根的萌發(fā)率。經(jīng)觀察，直接在砧板上進(jìn)行切割的擬南 芥下胚軸切割面極易出現(xiàn)扁化現(xiàn)象，而隨著瓊脂糖濃度的提高，切口會(huì)隨之圓整，當(dāng)瓊脂糖 濃度提升到1.2%時(shí)，切口的圓整度最好。而砧木與接穗下胚軸長(zhǎng)度的不同也會(huì)對(duì)側(cè)根萌發(fā) 率及嫁接成活率產(chǎn)生影響，表3為不同的切口部位對(duì)擬南芥?zhèn)雀L(zhǎng)情況及嫁接成活率的 影響。
[0026] 表 3

[0028] 3、嫁接:將切好的嫁接材料轉(zhuǎn)入0.7-0.8 %濃度瓊脂凝膠上，將瓊脂凝膠切除一段 寬為0.5厘米-1厘米的長(zhǎng)條;將長(zhǎng)為5毫米、內(nèi)徑/外徑為0.5/1.5的塑料管以垂直于瓊脂凝 膠切口邊緣的方式平置于凝膠上，并保證塑料管管口距離切口的距離為2毫米;將砧木與接 穗分別插入塑料管內(nèi)進(jìn)行固定，使材料緊密接觸，并使接穗材料的葉片部分置于切除條狀 凝膠處;切割一塊大于砧木根部面積的1/2MS+3 %蔗糖固體培養(yǎng)基，蓋在砧木的根部，擠出 氣泡，使凝膠與培養(yǎng)基緊密結(jié)合;保證根部正常碳源和滲透壓的同時(shí)，盡量減少接穗下胚軸 側(cè)根的萌發(fā);這一步驟可在解剖鏡下操作。
[0029] 4、嫁接體培養(yǎng):將嫁接體置于21°C環(huán)境下垂直培養(yǎng)7天，待嫁接口愈合后，將成活 的嫁接苗轉(zhuǎn)入以1/4MS為液體培養(yǎng)基的水培設(shè)備中繼續(xù)培養(yǎng)，期間接穗下胚軸如有側(cè)根發(fā) 出，及時(shí)剪去。
[0030] 當(dāng)然，以上說明僅僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，本發(fā)明并不限于列舉上述實(shí)施例，應(yīng) 當(dāng)說明的是，任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本說明書的教導(dǎo)下，所做出的所有等同替代、明 顯變形形式，均落在本說明書的實(shí)質(zhì)范圍之內(nèi)，理應(yīng)受到本發(fā)明的保護(hù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種模式擬南芥的嫁接方法，其包括以下步驟： A、 將擬南芥種子經(jīng)表面消毒后，接種于高溫高壓滅菌的添加4%蔗糖的1/2MS固體培養(yǎng) 基中，經(jīng)4°C低溫春化處理后，置于弱光下處理3天-5天，再轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)3天-5天，待下胚軸 生長(zhǎng)至6毫米-8毫米，將下胚軸粗壯、長(zhǎng)勢(shì)一致、兩片子葉平展且真葉剛剛萌發(fā)的6天-8天苗 齡的擬南芥植株用于嫁接； B、 用鑷子分別取出作為砧木和接穗的擬南芥實(shí)生苗，置于事先準(zhǔn)備的多個(gè)無菌1.2% 濃度瓊脂糖凝膠板上，將另一無菌1.2%濃度瓊脂糖凝膠板蓋于相應(yīng)實(shí)生苗下胚軸上，并于 下胚軸偏上部位置迅速切斷嫁接材料，要求切口圓整，并保證接穗材料的下胚軸部分較短， 而砧木材料的下胚軸部分較長(zhǎng)； C、 將切好的嫁接材料轉(zhuǎn)入0.7-0.8 %濃度瓊脂凝膠上，將瓊脂凝膠切除一段寬為0.5厘 米-1厘米的長(zhǎng)條;將長(zhǎng)為5毫米、內(nèi)徑/外徑為0.5/1.5的塑料管以垂直于瓊脂凝膠切口邊緣 的方式平置于凝膠上，并保證塑料管管口距離切口的距離為2毫米;將砧木與接穗分別插入 塑料管內(nèi)進(jìn)行固定，使材料緊密接觸，并使接穗材料的葉片部分置于切除條狀凝膠處;切割 一塊大于砧木根部面積的1/2MS+3 %蔗糖固體培養(yǎng)基，蓋在砧木的根部，擠出氣泡，使凝膠 與培養(yǎng)基緊密結(jié)合，形成嫁接體； D、 將嫁接體置于21°C環(huán)境下垂直培養(yǎng)7天，待嫁接口愈合后，將成活的嫁接苗轉(zhuǎn)入以1/ 4MS為液體培養(yǎng)基的水培設(shè)備中繼續(xù)培養(yǎng)，期間接穗下胚軸如有側(cè)根發(fā)出，則及時(shí)剪去。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嫁接方法，其特征在于，上述步驟A中具體為培養(yǎng)用于嫁接擬 南芥植株之蔗糖濃度篩選過程如下：3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嫁接方法，其特征在于，上述步驟B中具體為不同的切口部位 對(duì)擬南芥接穗側(cè)根生長(zhǎng)情況及嫁接成活率的篩選過程如下：
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種模式植物擬南芥的嫁接方法，其包括以下步驟：將下胚軸粗壯、長(zhǎng)勢(shì)一致、且真葉剛剛萌發(fā)的6天?8天苗齡的擬南芥植株用于嫁接；將用于嫁接的砧木和接穗材料置于1.2％瓊脂糖凝膠中間，于下胚軸處橫切，并保證接穗材料的下胚軸部分較短，而砧木材料的下胚軸部分較長(zhǎng)；在瓊脂凝膠上使材料切口緊密接觸，并切割一塊大于砧木根部面積的1/2MS+3％蔗糖固體培養(yǎng)基，蓋在砧木的根部，形成嫁接體；將嫁接體置于21℃環(huán)境下垂直培養(yǎng)7天；待嫁接口愈合后將嫁接體轉(zhuǎn)入以1/4MS為液體培養(yǎng)基的水培設(shè)備中培養(yǎng)。本發(fā)明解決了由于擬南芥植株細(xì)弱帶來的操作困難，切口不圓整，接穗側(cè)根頻生，嫁接成活率低等問題。
【IPC分類】A01G31/00, A01G1/06
【公開號(hào)】CN105706873
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610075067
【發(fā)明人】楊英杰, 王然, 賀育娟, 葛孟清
【申請(qǐng)人】青島農(nóng)業(yè)大學(xué)