稻瘟病菌無毒基因AvrPib及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開了一種稻瘟病菌無毒基因 AvrPib 及其應(yīng)用。所述無毒基因具有SEQIDNO：1所示的帶有啟動(dòng)子的DNA序列或SEQIDNO：2所示的cDNA序列?；谒龌虻慕Y(jié)構(gòu)及其應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果，可以設(shè)計(jì)新型農(nóng)藥的分子靶點(diǎn)；將該基因和相應(yīng)的抗病基因共價(jià)導(dǎo)入水稻等寄主植物可以培育抗病新品種；根據(jù)該基因序列產(chǎn)生的特異性分子標(biāo)記可應(yīng)用于田間稻瘟病菌群體監(jiān)測(cè)；所得到的監(jiān)測(cè)結(jié)果也可用于指導(dǎo)抗病品種合理布局；所述基因具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)于水稻生產(chǎn)和育種等研究具有重大意義。
【專利說明】稻瘟病菌無毒基因^!^/7/'/?及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種稻瘟病菌無毒基因JKTftl及其應(yīng) 用。

【背景技術(shù)】
[0002] 水稻Z.)是全世界數(shù)十億人口賴以生存的重要糧食作物和重要的 工業(yè)原料，同時(shí)也是多種病蟲害的宿主。由病原真菌#^§?<3/70從e 引起的稻癌病是 世界水稻生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一，每年都造成10?30%的水稻產(chǎn)量損失。而且該菌 還能夠侵染麥類、谷類等50多種禾本科植物。
[0003] 從環(huán)境保護(hù)與農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的觀點(diǎn)來看，抗病品種的育成與利用是防治稻瘟病 最安全有效的方法。但是，由于稻瘟病菌群體的多樣性及易變性，使得抗病品種的抗性不穩(wěn) 定，以致抗病品種的感病化問題一直沒有得到解決。稻瘟病菌菌株能否在特定品種上侵染、 致病是由該病原菌菌株的無毒基因的產(chǎn)物與寄主植物的抗病基因產(chǎn)物之間的互作決定的。 因此，對(duì)無毒基因產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的分析與研究，是了解病原菌小種和寄主品種?；曰プ鞯纳?化基礎(chǔ)。從病原菌無毒基因著手，可望闡釋稻瘟病菌與水稻的互作關(guān)系，以及病原菌的致 病機(jī)理，從而為稻瘟病抗病育種打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，對(duì)于植物病害的預(yù)防和控制具有重要的 指導(dǎo)意義。
[0004] 迄今，已克隆的9個(gè)稻瘟病菌無毒基因根據(jù)其功能可以分為兩類。第一類無毒基 因編碼種間特異性的激發(fā)子。這一類包括了對(duì)彎葉畫眉草carra/a)表現(xiàn)非 致病特異性的(pathogenicity on weeping Iovegrass)基因家族。在這個(gè)基因家族 中，首先通過圖位克隆的方法被分離、克隆，該基因起著阻止稻瘟病菌株侵染彎葉畫眉 草的作用（Sweigard et al. 1995，Plant Cell 7: 1221-1233)。用/轉(zhuǎn)化對(duì)彎葉畫眉 草有致病性的野生型菌株，轉(zhuǎn)化子失去了彎葉畫眉草的致病性，卻完全保留了對(duì)其它寄主 的致病性。這說明盡管是一個(gè)決定寄主范圍的基因，但其功能與經(jīng)典定義的無毒基因 是一樣的。/ 7/?之編碼富含甘氨酸的親水性蛋白，內(nèi)含一個(gè)信號(hào)肽。
[0005] 第二類無毒基因?yàn)橥ǔＲ饬x上的無毒基因，即編碼品種特異性(?；裕┑募ぐl(fā) 子。這一類基因包括(以前稱 及但這3個(gè)基因在稻癌病菌生長(zhǎng)發(fā)育方面具有什么樣的功能還有 待于進(jìn)一步的研究。
[0006] 盡管到目前為止，隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，大約已經(jīng)有40個(gè)稻瘟病菌無毒 基因完成了染色體的初步定位，但已被克隆的無毒基因卻只有9個(gè)。在這9個(gè)稻瘟病菌 無毒基因中，/覺7 (Kang et al. 1995，Molecular Plant-Microbe Interactions 8: 939-948)和(前出，Sweigard et al. 1995)都是控制稻瘟病菌對(duì)彎葉畫眉草的致病 性，具有強(qiáng)烈的寄主特異性；而另外7個(gè)無毒基因(Orbachet al. 2000，Plant Cell 18: m-m),AVRl-C039 (Farman and Leong 1998, Genetics 150: 1049-1058), ACEl (B5hnert et al. 2004, Plant Cell 16: 2\m~2^\?>),AvrPiz-t (Li et al. 2009, Molecular Plant-Microbe Interactions 22: 和 如（Yoshida et al. 2009，Plant Cell 21: 1573-1591)均來源于水稻，控制稻瘟病菌對(duì) 水稻的致病性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)稻瘟病無毒基因研究的缺陷，提 供一種新的稻瘟病菌無毒基因
[0008] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述稻瘟病菌無毒基因所編碼的蛋白質(zhì)。
[0009] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供含有上述無毒基因的載體。
[0010] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供含有上述載體的重組體。
[0011] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供上述基因在培育植物新品種中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的第六個(gè)目的是提供上述基因在制備植物分子農(nóng)藥中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)： 一種稻瘟病菌無毒基因其具有SEQ ID NO :1所示的帶有啟動(dòng)子的DNA序列或 SEQ ID NO :2所示的cDNA序列。
[0014] 上述稻瘟病菌無毒基因編碼的蛋白質(zhì)，其具有SEQ ID NO :3所示序列。
[0015] 本發(fā)明從稻瘟病菌菌株CHL42中分離得到基因，該基因賦予稻瘟病菌對(duì)含 有抗病基因的水稻品種產(chǎn)生特異性(?；裕┑姆侵虏⌒苑磻?yīng)。其中，所述SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO :2分別是的基因組DNA和cDNA序列。基因組DNA長(zhǎng)度為 2618 bp，其全長(zhǎng)cDNA為637 bp，含有一個(gè)225 bp的開放閱讀框，5'和3'非翻譯區(qū)分別為 322 bp和90 bp。通過比較基因組DNA和cDNA，發(fā)現(xiàn)該基因的開放閱讀框只有1個(gè)外顯子 而沒有內(nèi)含子（圖3a)。該基因編碼SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列，結(jié)構(gòu)如圖3a所示；該 基因編碼的蛋白的N末端含有22個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽。
[0016] 所分離、克隆的無毒基因加在自然界中存在若干個(gè)SNP單元型，且這些單元 型編碼的蛋白之間存在非同義替換關(guān)系。因此，應(yīng)當(dāng)理解，在不影響蛋白活性的前提下(不 在蛋白的活性中心)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列進(jìn)行各種替換、 添加和/或缺失一個(gè)或幾個(gè)氨基酸獲得具有同等功能的氨基酸序列、功能片段和/或突變 體。
[0017] 含有上述稻瘟病菌無毒基因的載體。
[0018] 含有上述基因或載體的重組體。該重組體可以是將無毒基因以任一種方 法與任一種載體相結(jié)合形成的重組體。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明提供的基因序列信息（SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2)，本領(lǐng)域 技術(shù)人員可以通過以下方法容易地獲得與等同的基因：（1)通過數(shù)據(jù)庫檢索獲得； (2) 以基因片段為探針篩選稻瘟病菌或其它病原菌的基因組文庫或CDNA文庫獲得； (3) 根據(jù)基因序列信息設(shè)計(jì)寡核苷酸引物，用PCR擴(kuò)增的方法從稻瘟病菌或其它病 原菌的基因組、HiRNA和CDNA中獲??；（4)在基因序列的基礎(chǔ)上用基因工程方法改 造獲得；（5)用化學(xué)合成的方法獲得該基因。
[0020] 本發(fā)明能夠進(jìn)一步提供或應(yīng)用利用上述稻瘟病菌無毒基因的DNA片段獲 得的無毒性的轉(zhuǎn)基因菌株，以及利用本發(fā)明的基因或基于該基因的重組體轉(zhuǎn)化的菌株。也 可以利用有性雜交的方式將本發(fā)明的基因轉(zhuǎn)入其他的菌株中。
[0021] 本發(fā)明提供的稻瘟病菌無毒基因具有重要的應(yīng)用價(jià)值： 應(yīng)用之一是根據(jù)該基因的結(jié)構(gòu)及其功能來設(shè)計(jì)新型農(nóng)藥的分子靶點(diǎn)，可用于制備植物 分子農(nóng)藥。
[0022] 應(yīng)用之二是培育植物抗病新品種，具體地，將所述的基因序列連接到任 何一種轉(zhuǎn)化載體，用任何一種轉(zhuǎn)化方法將無毒基因和相應(yīng)的抗病基因共價(jià)導(dǎo)入 水稻或其他植物細(xì)胞。也就是說，將無毒基因置于病原菌侵入誘導(dǎo)表達(dá)的啟動(dòng)子下，而將相 應(yīng)的抗病基因置于組成型表達(dá)的啟動(dòng)子下，一起導(dǎo)入寄主植物中，當(dāng)寄主受到病原菌侵染 時(shí)，無毒基因便被誘導(dǎo)表達(dá)無毒蛋白，然后無毒蛋白作為激發(fā)子，激發(fā)其特異的抗病基因表 達(dá)，產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的受體蛋白，它們之間相互識(shí)別，導(dǎo)致寄主產(chǎn)生過敏性反應(yīng)，以阻止入侵病原 菌的定殖和擴(kuò)展。由于這種工程植物是基于寄主抗病反應(yīng)后各種防衛(wèi)反應(yīng)的綜合表達(dá)和作 用，因此，這種新型的抗性是穩(wěn)定而持久的。
[0023] 對(duì)基因進(jìn)行修飾或改造，可改變或增加基因的某種功能。對(duì)該基因的編 碼區(qū)的單個(gè)核苷酸位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變，可能會(huì)導(dǎo)致基因無毒性功能的喪失或改變。本發(fā) 明同樣包括將包含該基因的片段和一個(gè)組成型表達(dá)的啟動(dòng)子連接，該啟動(dòng)子可以在任何條 件下侵入植株的不同時(shí)期表達(dá)。這種組成型表達(dá)的啟動(dòng)子包括花椰菜花葉病毒35S的啟 動(dòng)子、構(gòu)巢曲霉trpC啟動(dòng)子等（馮淑杰2005,華南農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文；Li et al.，2010， Molecular Plant-Microbe Interactions 23: 317-331)。另一方面，也可以將該基因和一 個(gè)組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子或精確環(huán)境誘導(dǎo)的啟動(dòng)子連接，這些啟動(dòng)子稱之為誘導(dǎo)型啟動(dòng) 子。這樣，環(huán)境的改變，侵入植株的不同時(shí)期都可以改變?cè)摶虻谋磉_(dá)。其中環(huán)境條件包含 植株的生長(zhǎng)狀況，溫度，濕度等，侵入植株的不同時(shí)期包括孢子萌發(fā)、附著胞形成、侵染釘分 化和侵染菌絲擴(kuò)展等。
[0024] 優(yōu)選地，上述植物可以是禾本科植物，如水稻。
[0025] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果： 本發(fā)明提供了一種新的稻瘟病菌無毒基因所述基因由菌株CHL42通過圖位克 隆的方法獲得，所述無毒基因具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值：基于所述基因的結(jié)構(gòu)及其應(yīng)用試驗(yàn)結(jié) 果，可以設(shè)計(jì)新型農(nóng)藥的分子靶點(diǎn)；通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將本發(fā)明所述基因遺傳轉(zhuǎn)化到毒性菌 株中，以生產(chǎn)所述基因的等基因（或近等基因）菌株，這些菌株可廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥開發(fā)、稻瘟 病菌小種監(jiān)測(cè)，以及理論研究等方面；利用所述基因的序列及其編碼的產(chǎn)物，通過生物化學(xué) 等手段，找到與之特異性互作的寄主植物(如水稻等）的蛋白質(zhì)，由此了解和揭示稻瘟病菌 小種與水稻等品種間特異性互作的分子機(jī)理，以此來設(shè)計(jì)稻瘟病綜合防治的新策略。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明采用的稻瘟病菌無毒基因的克隆及其功能研究的技術(shù)路線 圖； 圖2為稻瘟病菌無毒基因的圖位克隆圖；其中圖a為位點(diǎn)的遺傳圖 譜；連鎖標(biāo)記下數(shù)值為重組體/配子體；水平線下數(shù)值為標(biāo)記之間的相對(duì)遺傳距離（CM); 圖b為位點(diǎn)的電子物理圖譜；水平線下數(shù)值為根據(jù)參考菌株70-15的基因組序列 (http://www. broad, mit. edu)推測(cè)的物理距離（kb);圖c為位點(diǎn)的重疊群圖；圖d 為的候選基因及精細(xì)電子物理圖譜；圖e為候選基因的克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化； 圖3為的基因結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)序列以及突變體；其中圖a為的基因結(jié)構(gòu)圖； 圖b為jKrftT?的蛋白序列圖，下劃線部分為信號(hào)肽；圖c為jKrftT?的基于PCR技術(shù)的定點(diǎn) 突變(左）及缺失突變(右）示意圖；F1/R1，F(xiàn)2/R2分別為PCR引物；圖d為突變體的 結(jié)構(gòu)示意圖及其致病性鑒定結(jié)果;為的對(duì)應(yīng)抗病基因，/--及為的 非對(duì)應(yīng)抗病基因，以檢測(cè)二者的特異性互作關(guān)系；供體菌株（CHL42)及受體菌株（CHL724) 作為對(duì)照也用于致病性鑒定；R :抗病性(無毒性);S :感病性(有毒性）;MS :中度感病性（中度 有毒性）； 圖4為作圖群體的親本菌株（CHL42, CHL357)、遺傳轉(zhuǎn)化受體菌株（CHL724)以 及突變體菌株(Mab系列)在水稻品種IRBLb-B (含基因)上的表型鑒定圖；無菌水作為 接種物對(duì)照也用于致病性鑒定； 圖5為的特異性分子標(biāo)記及其檢測(cè)圖；其中圖a為特異性分子標(biāo)記PCR 引物的設(shè)計(jì)示意圖;的編碼區(qū)用黑框表示，各個(gè)引物的相對(duì)位置標(biāo)示于水平線下； 圖b為基于標(biāo)記Jkt/^FI/RI的基因型(左)、基于標(biāo)記Jkt/^F2/R2的基因型（中），以及基 于2個(gè)標(biāo)記的整合基因型(右）;M1 :DNA分子量標(biāo)記，DL2000 ;M2 :DNA分子量標(biāo)記，DL15000 ; 8個(gè)菌株（a-h)有關(guān)JKr/^的"表型/基因型"最終由各個(gè)菌株對(duì)水稻品種IRBLb-BGp^)的 致病型及整合基因型決定，a :V/1 (CHL26OO) ;b:V/l (CHL2626);c:V/2 (EHL〇348);d:A/3 (CHL2345) ；e ：V/4 (EHL0342) ；f ：V/1 (CHL2549) ；g ：V/3 (EHL0964) ； h: V/0 (EHL0370)〇

【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的 限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的簡(jiǎn)單修改或 替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所 熟知的常規(guī)手段。在本發(fā)明的實(shí)施例部分，闡述了 基因的分離克隆、功能特征、分子 鑒定以及應(yīng)用，分離的基因能夠與適當(dāng)?shù)妮d體連接，轉(zhuǎn)入菌株中，使該菌株對(duì)含有 特異性互作的抗病基因產(chǎn)從的植物產(chǎn)生無毒性。
[0028] 本發(fā)明采用的技術(shù)路線如圖1所示。
[0029] 實(shí)施例1稻瘟病菌無毒基因的圖位克隆 (I ) J 位點(diǎn)遺傳圖譜的構(gòu)建 為了發(fā)掘和鑒定稻瘟病菌無毒基因利用由稻瘟病菌株CHL357 (交配型 拗/7-7;對(duì)含有/--的水稻品種IRBLb-B表現(xiàn)有毒性；Hua et al. 2012，Theor Appl Genet 125: 1047-1055)和 CHL42 (交配型姻77-J;對(duì) IRBLb-B表現(xiàn)無 2014，Plos One 9: e98067)雜交得到的83個(gè)后代子囊孢子菌株接種水稻品種IRBLb-B (Kobayashi et al. 2007，JARQ 41: 31-37)，結(jié)果表明，這個(gè)作圖群體中無毒性(非致病 性）菌株與有毒性(致病性）菌株分別為41和42株，其分離比符合1:1。由此推斷，CHL42 所表現(xiàn)的對(duì)水稻品種IRBLb-B的無毒性是由一對(duì)顯性基因控制的。
[0030] 為了快速地確定無毒基因的染色體位置，利用參考菌株75-10的參考序列 (reference sequence)，開發(fā)并構(gòu)建了由 121 個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記（SSR, simple rsequence repeat)組成的遺傳圖譜（Feng et al. 2007, Chinese Science Bulletin 52: 3346-3354)。然后，通過混合群體分離分析法（bulked-segregant analysis, BSA)，篩選 了全部121個(gè)SSR標(biāo)記，得到了 7個(gè)與無毒基因連鎖的SSR標(biāo)記（MS6-24, MS6-3, MS6-7， MS6-10, MS6-17, MS3-5, MS3-26)。SSR 標(biāo)記序列如下： MS6-24F ：GCGAGTTTACAGGTTTAGCA MS6-24R ：TTTGGGGCTAATAACAGACC Ms6-3F ：CCACATCGCAGCCTCACTTG Ms6-3R ：CCAGTCGGTTCCAGGTCTTG Ms6-7F ：CCAAGGCACCAGCACAGACC Ms6-7R ：CAGAAGATGCCTCGGAGATC Ms6-10F ：CAGAAGATGCCTCGGAGATC Ms6-10R ：GCAGGGCCCACTACACATGT Ms6-17F ：CAAGAATGCAGAGAACCACAG Ms6-17R ：GTTTTCCGCTGTGTAAATAGA Ms3_5F :gagtttgagaccttgcgatt Ms3_5R :ggcggcaagtcgctgaagg Ms3-26F ：GAAGGCGACAAGTGGCAGT Ms3-26R ：CTCGTCTGGTATCAGTTGCC 結(jié)果表明，該無毒基因位點(diǎn)被定位在第6染色體上。為了進(jìn)一步確認(rèn)該無毒基因的位 置，分別在SSR標(biāo)記MS6-17-MS3-5,以及MS3-26右側(cè)開發(fā)了 1個(gè)和3個(gè)新標(biāo)記進(jìn)行連鎖 分析。結(jié)果表明，該無毒基因位點(diǎn)被確定于SSR標(biāo)記MS3-5-MS3-26之間，遺傳距離為3. 6 cM (厘摩；圖2a)。
[0031] 位點(diǎn)電子物理圖譜的構(gòu)建：為了構(gòu)建該位點(diǎn)的物理圖譜，將上述連鎖 標(biāo)記通過生物信息學(xué)分析，利用稻癌病菌數(shù)據(jù)庫軟件BLASTN(http://www. broad, mit. edu/ annotation/genome/magnaporthe_grisea/Blast. html)著陸于參考菌株 70-15 的基因組 序列（http://www. broad, mit. edu)上。結(jié)果表明，位點(diǎn)被物理定位在大約33 kb的 區(qū)域內(nèi)（圖2b)。
[0032] (3) 位點(diǎn)重疊群的構(gòu)建：根據(jù)上述連鎖標(biāo)記錨定的參考菌株70-15的BAC 文庫（http://www. broad, mit. edu),由此構(gòu)建了 位點(diǎn)的重疊群（圖 2c)。
[0033] UWKTftl候選基因的預(yù)測(cè)以及精細(xì)電子物理圖譜的構(gòu)建： 為了確定的候選基因，利用菌株70-15的參考序列，通過2個(gè)基因注釋系統(tǒng) Broad Magnaporthe grisea Database (http://www. broad, mit. edu/annotation/genome/ magnaporthe_grisea/Regions. html)和 Softberry FGENESH 2.6(http://www. softberry. com/berry. phtml)對(duì)目的基因區(qū)域進(jìn)行基因預(yù)測(cè)及注釋分析。結(jié)果表明，其間存在3個(gè)編 碼分泌蛋白的基因。為了進(jìn)一步確定候選基因，其間開發(fā)了 1個(gè)SSR標(biāo)記（MS6-34)，以及3 個(gè)候選無毒基因標(biāo)記（candidate avirulence gene，CAG)進(jìn)行了連鎖分析。結(jié)果表明，這4 個(gè)標(biāo)記皆與JKrftTM立點(diǎn)完全共分離(無重組體）（圖2d)。因此，對(duì)3個(gè)候選基因都進(jìn)行了 遺傳互補(bǔ)分析(下述)。
[0034] ( 5 ) J KTftl候選基因的克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化： 根據(jù)參考菌株70-15序列設(shè)計(jì)3個(gè)候選基因的PCR引物： blF: TTGGCGCGCCCGTTTGGTTACGTTCACCCTTG ； bIR: TAGGCGCGCCTCGACTACATCCCCATGACGC ； b2F: TTGGCGCGCCGCCATCAACGAGACCACAGCCCAC ； b2R: TTGGCGCGCCACTGCGGGAATGCCGACAATGCGAG ； b3F: ATGGCGCGCCCGTTTGGTTACGTTCACCCTTG ； b3R: TAGGCGCGCC ACTGCGGGAATGCCGACAATGCGAG ； 下劃線為用于連接雙元轉(zhuǎn)化載體pBHt2的限制性內(nèi)切酶Asc J的作用序列。
[0035] 然后，利用高保真（high fidelity，HF) PCR技術(shù)從供體菌株CHL42基因組DNA中 擴(kuò)增了 3個(gè)候選基因的片段，其中，bl和b2分別包含2個(gè)候選基因；b3則包含中間的1個(gè) 候選基因。
[0036] PCR擴(kuò)增的體系如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種稻瘟病菌無毒基因蛋白，其特征在于，具有如下序列： (1) SEQ ID NO :3,或， (2) 序列（1)經(jīng)替換、缺失、或/和添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基而形成的具有同等功能 的氨基酸序列、功能片段和/或突變體。
2. -種稻瘟病菌無毒基因其特征在于，其核苷酸具有如下序列： (1) SEQ ID NO :1 或 SEQ ID NO :2,或， (2) 序列（1)經(jīng)替換、缺失和/或添加一個(gè)或多個(gè)核苷酸且與權(quán)利要求1所述基因所編 碼的蛋白具有同等功能的基因序列。
3. 含有權(quán)利要求2所述基因的載體。
4. 含有權(quán)利要求3所述載體的重組體。
5. 權(quán)利要求1所述蛋白或權(quán)利要求2所述基因在制備植物分子農(nóng)藥中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求1所述蛋白或權(quán)利要求2所述基因在培育植物抗病新品種中的應(yīng)用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，將所述基因或含所述基因的載體與相應(yīng) 的抗病基因或載體共價(jià)導(dǎo)入植物中培育抗病新品種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物為禾本科作物。
【文檔編號(hào)】A01H5/00GK104356213SQ201410569294
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】潘慶華, 張樹林, 何麗云, 楊先鋒, 王玲 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)