一種馬鞭草誘變育種的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種馬鞭草誘變育種的快速繁殖方法，包括種子的消毒、種子的誘變、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的分化、生根誘導(dǎo)等步驟，本發(fā)明方法通過(guò)離子束照射，可以提高幼苗的可溶性蛋白含量，提高保護(hù)酶系統(tǒng)活性，提高種子抗逆性，且遺傳穩(wěn)定，種苗再生率高。
【專利說(shuō)明】 一種馬鞭草誘變育種的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及馬鞭草組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物栽培【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]馬鞭草，/ferAa Verbenae馬鞭草科,又名紫頂龍芽草、野荊芥、龍芽草，多年生直立草本植物，高30-120厘米，莖四方形，上部方形，老后下部近圓形，棱和節(jié)上被短硬毛。單葉對(duì)生，卵形至長(zhǎng)卵形，長(zhǎng)2-8厘米，寬1.5-5厘米，3-5深裂，裂片不規(guī)則的羽狀分裂或不分裂而具粗齒，兩面被硬毛，下面脈上的毛尤密。喜干燥、陽(yáng)光充足的環(huán)境，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，喜肥，喜濕潤(rùn)，怕澇，不耐干旱，一般的土壤均可生長(zhǎng)，但以土層深厚、肥沃的壤土及沙壤土長(zhǎng)勢(shì)健壯，低洼易澇地不宜種植。多數(shù)生長(zhǎng)于原野，原產(chǎn)于歐洲，中國(guó)華東、華南和西南大部地區(qū)都有分布。選擇土層較厚的壤土或沙壤土為種植地，4月下旬-5月上旬播種，防止草荒，做到田間無(wú)雜草。田間長(zhǎng)時(shí)間的大量積水有根腐病發(fā)生只要及時(shí)排水、松土就可以避免。全草含馬鞭草甙，5-羥基馬鞭草甙，另含苦杏仁酶、鞣質(zhì)，戟葉馬鞭草甙，羽扇豆醇，β_谷甾醇，熊果酸，桃葉珊瑚甙，蒿黃素。葉中含馬鞭草新甙，腺甙，β_胡蘿卜素。根和莖中含水蘇糖，馬鞭草甙對(duì)交感神經(jīng)末梢小量興奮，大量抑制；對(duì)哺乳動(dòng)物可促進(jìn)乳汁分泌。主要功效為清熱解毒藥；活血通經(jīng)藥；利水消腫藥；截瘧藥；活血散瘀，截瘧，解毒，利水消腫。目前主要采取野外采集，人工繁殖尚未見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種馬鞭草組織培養(yǎng)的快繁方法，本發(fā)明方法通過(guò)離子束照射，可以提高幼苗的可溶性蛋白含量，提高保護(hù)酶系統(tǒng)活性，提高種子抗逆性,且遺傳穩(wěn)定,種苗再生率高。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
挑取飽滿的馬鞭草種子，在濃硫酸中浸泡lh，取出無(wú)菌水沖洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，無(wú)菌水沖洗5遍，無(wú)菌濾紙吸干，消毒處理過(guò)的馬鞭草種子接種到不含任何激素的MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，使用30KeV的N+離子束照射，照射劑量2.0 X 10171nS/cm2，無(wú)菌苗長(zhǎng)約5cm左右時(shí)，取葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度3001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織接入分化培養(yǎng)基 DPD+6-BA1.5-2.0mg/L+IAA0.03-0.05mg/L+ABA0.5-0.8mg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度21001x，光照時(shí)間12h/d，分化出來(lái)的芽苗接入生根培養(yǎng)基l/3Dro+IBA0.5mg/L,附加蔗糖20g/L，瓊脂5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度50001x,光照時(shí)間16h/d。
[0005]采用本發(fā)明制備的馬鞭草再生率高，周期短，遺傳性狀穩(wěn)定，產(chǎn)量大，污染小。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
挑取飽滿的馬鞭草種子，在濃硫酸中浸泡lh，取出無(wú)菌水沖洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，無(wú)菌水沖洗5遍，無(wú)菌濾紙吸干，消毒處理過(guò)的馬鞭草種子接種到不含任何激素的MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，使用30KeV的N+離子束照射，照射劑量2.0 X 10171nS/cm2，無(wú)菌苗長(zhǎng)約5cm左右時(shí)，取葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度3001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織接入分化培養(yǎng)基DPD+6-BA1.5mg/L+IAA0.03mg/L+ABA0.5mg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度21001x，光照時(shí)間12h/d，分化出來(lái)的芽苗接入生根培養(yǎng)基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，瓊脂 5g/L，pH5.8，溫度 25°C，光照強(qiáng)度 50001x，光照時(shí)間16h/d，再生率90%。
[0008]實(shí)施例2
挑取飽滿的馬鞭草種子，在濃硫酸中浸泡lh，取出無(wú)菌水沖洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，無(wú)菌水沖洗5遍，無(wú)菌濾紙吸干，消毒處理過(guò)的馬鞭草種子接種到不含任何激素的MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，使用30KeV的N+離子束照射，照射劑量2.0 X 10171nS/cm2，無(wú)菌苗長(zhǎng)約5cm左右時(shí)，取葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度3001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織接入分化培養(yǎng)基DPD+6-BA2.0mg/L+IAA0.05mg/L+ABA0.8mg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度21001x，光照時(shí)間12h/d，分化出來(lái)的芽苗接入生根培養(yǎng)基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，瓊脂 5g/L，pH5.8，溫度 25°C，光照強(qiáng)度 50001x，光照時(shí)間16h/d，再生率91%。
[0009]實(shí)施例3
挑取飽滿的馬鞭草種子，在濃硫酸中浸泡lh，取出無(wú)菌水沖洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，無(wú)菌水沖洗5遍，無(wú)菌濾紙吸干，消毒處理過(guò)的馬鞭草種子接種到不含任何激素的MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，使用30KeV的N+離子束照射，照射劑量2.0 X 10171nS/cm2，無(wú)菌苗長(zhǎng)約5cm左右時(shí)，取葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度3001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織接入分化培養(yǎng)基DPD+6-BA2.0mg/L+IAA0.05mg/L+ABA0.5mg/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度21001x，光照時(shí)間12h/d，分化出來(lái)的芽苗接入生根培養(yǎng)基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，瓊脂 5g/L，pH5.8，溫度 25°C，光照強(qiáng)度 50001x，光照時(shí)間16h/d，再生率93%。
【權(quán)利要求】
1.一種馬鞭草誘變育種的快速繁殖方法，包括種子的消毒、種子的誘變、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的分化、生根誘導(dǎo)，其主要步驟如下: (1)取馬鞭草飽滿的種子，進(jìn)行消毒處理； (2)取步驟(I)消毒處理過(guò)的馬鞭草種子接種到不含任何激素的MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，溫度25°C，使用30KeV的N+離子束照射，照射劑量2.0X 10171ns/cm2 ； (3)取步驟(2)長(zhǎng)出的無(wú)菌苗長(zhǎng)約5cm左右時(shí)，取葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)基 DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L，附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，ρΗ5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度3001x，光照時(shí)間12h/d ； (4)取步驟(3)誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織接入分化培養(yǎng)基DPD+6-BA1.5-2.0mg/L+IAA0.03-0.05mg/L+ABA0.5-0.8mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，溫度 25°C，光照強(qiáng)度21001x，光照時(shí)間12h/d ； (5)取步驟(4)分化出來(lái)的芽苗接入生根培養(yǎng)基1/3DTO+IBA0.5mg/L,附加蔗糖20g/L，瓊脂5g/L，pH5.8，溫度25°C，光照強(qiáng)度50001x，光照時(shí)間16h/d。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種馬鞭草誘變育種的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中馬鞭草種子的消毒方法為挑取飽滿的馬鞭草種子，在濃硫酸中浸泡lh，取出無(wú)菌水沖洗5遍,70%的酒精中消毒5min,0.1%的升萊消毒15min,無(wú)菌水沖洗5遍,無(wú)菌濾紙吸干。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104255510SQ201410540465
【公開(kāi)日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司