一種陰行草多倍體誘變的繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種陰行草多倍體誘變的繁殖方法，包括陰行草無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的分化、生根等步驟，本發(fā)明方法所制備的陰行草根莖巨大，培養(yǎng)周期短，獲得的突變株可以為其藥用資源的開發(fā)提供大量原料。
【專利說明】一種陰行草多倍體誘變的繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及陰行草組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]陰行草chinensisBenth.，玄參科，一年生草本植物，高 30-80 厘米，葉對(duì)生，葉片二回羽狀全裂，裂片狹線形。花對(duì)生于莖枝上部，成稀疏總狀花序?；ü诙叫危洗轿ё仙?、下唇黃色。生于山坡、丘陵、草叢等處，國(guó)內(nèi)外均有分布。陰行草含10-對(duì)香豆酰桃葉珊瑚甙，8-異馬錢素和阿克甙。全草含揮發(fā)油0.45%。植物的全草可供藥用，中藥名亦為“陰行草”，立秋至白露采割，去凈雜質(zhì)，切段，曬干或鮮用。具有清熱利濕，涼血止血，祛瘀止痛之功效，目前關(guān)于陰行草的利用主要是野外采收，尚無人工繁殖方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種陰行草多倍體誘變的繁殖方法，本發(fā)明方法所制備的陰行草根莖巨大，培養(yǎng)周期短，獲得的突變株可以為其藥用資源的開發(fā)提供大量原料。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
取陰行草的葉片，毛刷清洗上面污垢，流水沖洗干凈，1%溴水處理5min，無菌水沖洗5遍，0.2%的升汞處理5min，無菌水沖洗5遍，消毒處理后的陰行草葉片切成小塊，劃出傷口，接種入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4_D1.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入B5+KT0.1-0.2mg/L+6-BA1.0-1.5mg/L+2, 4-D0.3-0.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，光強(qiáng)25001x，光照時(shí)間12h/d，取長(zhǎng)約4cm的芽苗洗去根部培養(yǎng)基，栽植于滅菌過的珍珠巖基質(zhì)中，放置于光照培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，封上保鮮膜，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，溫度28°C。
[0005]采用本發(fā)明制備的陰行草成活率高，周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
取陰行草的葉片，毛刷清洗上面污垢，流水沖洗干凈，1%溴水處理5min，無菌水沖洗5遍，0.2%的升汞處理5min，無菌水沖洗5遍，消毒處理后的陰行草葉片切成小塊，劃出傷口，接種入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入B5+KT0.lmg/L+6-BA1.0mg/L+2, 4-D0.3mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，光強(qiáng)25001x，光照時(shí)間12h/d，取長(zhǎng)約4cm的芽苗洗去根部培養(yǎng)基，栽植于滅菌過的珍珠巖基質(zhì)中，放置于光照培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，封上保鮮膜，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，溫度28°C，成活率88%。
[0008]實(shí)施例2
取陰行草的葉片，毛刷清洗上面污垢，流水沖洗干凈，1%溴水處理5min，無菌水沖洗5遍，0.2%的升汞處理5min，無菌水沖洗5遍，消毒處理后的陰行草葉片切成小塊，劃出傷口，接種入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入B5+KT0.2mg/L+6-BA1.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，光強(qiáng)25001x，光照時(shí)間12h/d，取長(zhǎng)約4cm的芽苗洗去根部培養(yǎng)基，栽植于滅菌過的珍珠巖基質(zhì)中，放置于光照培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，封上保鮮膜，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，溫度28°C，成活率92%。
[0009]實(shí)施例3
取陰行草的葉片，毛刷清洗上面污垢，流水沖洗干凈，1%溴水處理5min，無菌水沖洗5遍，0.2%的升汞處理5min，無菌水沖洗5遍，消毒處理后的陰行草葉片切成小塊，劃出傷口，接種入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，取誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入B5+KT0.lmg/L+6-BA1.5mg/L+2, 4-D0.4mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度70%，光強(qiáng)25001x，光照時(shí)間12h/d，取長(zhǎng)約4cm的芽苗洗去根部培養(yǎng)基，栽植于滅菌過的珍珠巖基質(zhì)中，放置于光照培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，封上保鮮膜，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，溫度28°C，成活率94%。
【權(quán)利要求】
1.一種陰行草多倍體誘變的繁殖方法，包括陰行草無菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的分化、生根，其主要步驟如下: (1)取陰行草的葉片進(jìn)行消毒處理； (2)消毒處理后的陰行草葉片切成小塊，劃出傷口，接種入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25°C，濕度 70% ； (3 )取步驟(2 )誘導(dǎo)出來的愈傷組織接種入B5+KT0.1-0.2mg/L+6-BAl.0-1.5mg/L+2, 4-D0.3-0.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，溫度25。。，濕度70%，光強(qiáng)25001x，光照時(shí)間12h/d ； (4)取步驟(3)分化出來的芽苗進(jìn)行生根誘導(dǎo)。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種陰行草倍體誘變的繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中陰行草葉片的消毒方法為取陰行草的葉片，毛刷清洗上面污垢，流水沖洗干凈，1%溴水處理5min,無菌水沖洗5遍,0.2%的升萊處理5min,無菌水沖洗5遍。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種陰行草倍體誘變的繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述陰行草生根誘導(dǎo)的方法為，取長(zhǎng)約4cm的芽苗洗去根部培養(yǎng)基，栽植于滅菌過的珍珠巖基質(zhì)中，放置于光照培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)，封上保鮮膜，光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΟΙχ,全光照,溫度28。。。
【文檔編號(hào)】A01G31/00GK104304011SQ201410540405
【公開日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司