毛大丁草提取物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了毛大丁草提取物及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的毛大丁草提取物及其制備方法與應(yīng)用中，所述毛大丁草提取物為下述A1)-A7)中的任一種：A1)毛大丁草95％乙醇提取物；A2)毛大丁草石油醚萃取物；A3)毛大丁草乙酸乙酯萃取物；A4)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝9％洗脫物；A5)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝20％洗脫物；A6)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚＝50％洗脫物；A7)毛大丁草乙酸乙酯洗脫物。實驗證明，本發(fā)明的毛大丁草提取物對植物病原真菌有抑制作用，可直接用于抑制對植物病原真菌，也可制備植物病原真菌抑制劑。
【專利說明】毛大丁草提取物及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】中毛大丁草提取物及其制備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 植物病原真菌廣泛分布于世界各地，引起農(nóng)作物、林木、蔬菜、經(jīng)濟作物、觀賞作物 病害，常造成植物早期失綠、葉枯、落葉、枯萎和腐爛，嚴(yán)重影響植物生長發(fā)育、產(chǎn)量及品質(zhì)， 給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和人民生活帶來嚴(yán)重損失。目前植物真菌病害防治仍以有機合成的化學(xué)藥劑防 治為主，但大量化學(xué)農(nóng)藥的使用，帶來了很大的負面生態(tài)影響，且容易使植物產(chǎn)生藥害和 抗藥性，嚴(yán)重影響抗植物病原真菌制劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。近年來，隨著日光溫室、塑料 大棚、地膜覆蓋等保護措施的改進，果蔬的真菌病害嚴(yán)重，已經(jīng)成為制約我國水果和蔬菜高 效、安全生產(chǎn)的主要原因，常使國家經(jīng)濟和人民生活遭受嚴(yán)重損失。隨著無公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn) 規(guī)模的逐步擴大和化學(xué)農(nóng)藥使用產(chǎn)生的抗藥性、農(nóng)藥殘留等問題的日益嚴(yán)重，尋找和使用 無毒，高效的新型植物源農(nóng)藥越來越受到人們的重視。
[0003]毛大丁草（Gerberapiloselloides)為菊科大丁草屬植物，多年生、被毛草本，生 于林緣、草叢中或礦野荒地上。產(chǎn)于西藏、云南、四川、貴州、廣西、廣東、湖南、湖北、江西、江 蘇、浙江和福建等省區(qū)。毛大丁草全草藥用，具有清熱利濕、解毒消腫、宣肺、止咳等作用， 最早藥用記載可溯至明代的《滇南本草》。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何用毛大丁草抑制植物病原真菌。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中 的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供的毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用；所述毛大丁草提取 物為下述Al)-A5)中的任一種：
[0007]Al)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物；
[0008]A2)毛大丁草乙酸乙酯萃取物；
[0009]A3)毛大丁草石油醚萃取物；
[0010]A4)毛大丁草95 %乙醇提取物；
[0011] A5)毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；
[0012] 所述毛大丁草95%乙醇提取物按照包括下述A41)步驟的方法制備：
[0013]A41)用95%乙醇水溶液提取毛大丁草，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇， 得到所述毛大丁草95 %乙醇提取物；
[0014] 所述毛大丁草石油醚萃取物按照包括下述A31)步驟的方法制備：
[0015]A31)將所述毛大丁草95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取該混懸 液，得到石油醚相和水相，除去所述石油醚相中的石油醚即得到所述毛大丁草石油醚萃取 物；
[0016] 所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物按照包括下述A21)步驟的方法制備：
[0017] A21)用乙酸乙酯萃取所述水相，得到乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸 乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；
[0018] 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物按照包括下述All)步驟的方法制備：
[0019] All)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚洗脫物；所述硅膠柱層析包括：用乙酸乙酯-石油醚進行洗脫，收集洗脫出的液 體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯_石油醚洗脫液，除去所述乙酸乙酯-石油醚洗脫液中 的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物；
[0020] 所述毛大丁草乙酸乙酯洗脫物按照包括下述A51)步驟的方法制備：
[0021] A51)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯洗脫物；所述硅膠柱層析包括：先用乙酸乙酯-石油醚進行洗脫，再用乙酸乙酯進行洗 脫，收集洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯洗脫液，除去所述乙酸乙酯洗脫液 中的乙酸乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；
[0022] 所述乙酸乙酯-石油醚為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物；
[0023] 所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量大于等于1%且小于100%;
[0024] 所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌和馬 鈴薯干腐病菌這五種中的五種、四種、三種、二種或一種。
[0025] 上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用中，所述乙酸乙酯-石油醚中 所述乙酸乙酯的體積含量為9% -50%。
[0026] 上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用中，所述乙酸乙酯-石油醚中 所述乙酸乙酯的體積含量為9% -20%。
[0027] 上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用中，
[0028] 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為下述BI)-B3)中的任一種：
[0029] BI)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物；
[0030] B2)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物；
[0031] B3)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物；
[0032] 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物按照包括下述B11)步驟的方法制 備：
[0033] B11)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=9%洗脫物；所述硅膠柱層析包括：用乙酸乙酯-石油醚=9%進行洗脫，收 集洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫液，除去所述乙酸乙 酯-石油醚=9%洗脫液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=9%洗脫物；
[0034] 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物按照包括下述B21)步驟的方法制 備：
[0035] B21)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=20%洗脫物；所述硅膠柱層析包括：先用乙酸乙酯-石油醚=9 %進行洗脫， 再用乙酸乙酯-石油醚=20 %進行洗脫，收集洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸 乙酯-石油醚=20%洗脫液，除去所述乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫液中的所述乙酸乙 酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物；
[0036] 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物按照包括下述B31)步驟的方法制 備：
[0037]B31)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=50%洗脫物；所述硅膠柱層析包括：先用乙酸乙酯-石油醚=9%進行洗脫， 再用乙酸乙酯-石油醚=20%進行洗脫，然后用乙酸乙酯-石油醚=50%進行洗脫，收集 洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫液，除去所述乙酸乙 酯-石油醚=50%洗脫液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=50 %洗脫物；
[0038] 所述乙酸乙酯_石油醚=9%為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物，所述混合物 中所述乙酸乙酯和所述石油醚的體積比為9:91;
[0039] 所述乙酸乙酯_石油醚=20%為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物，所述混合物 中所述乙酸乙酯和所述石油醚的體積比為20:80;
[0040] 所述乙酸乙酯-石油醚=50%為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物，所述混合物 中所述乙酸乙酯和所述石油醚的體積比為50:50。
[0041] 上述毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用中，所述毛大丁草可為毛大丁 草全草。
[0042] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了毛大丁草提取物的制備方法。
[0043] 本發(fā)明所提供的毛大丁草提取物的制備方法，為下述M)-Q)的任一種：
[0044]M)所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草95%乙醇提取物；所述毛大丁草95%乙 醇提取物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A41);
[0045]N)所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草石油醚萃取物；所述毛大丁草石油醚萃 取物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A31);
[0046] 0)所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；所述毛大丁草乙酸乙 酯萃取物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A21);
[0047] P)所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物；所述毛大丁草 乙酸乙酯-石油醚洗脫物的制備方法包括權(quán)利要求1所述All);所述乙酸乙酯-石油醚 為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物；所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量 大于等于1%且小于100% ;進一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量為 9% -50% ;更進一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量為9% -20% ;
[0048] Q)所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙 酯洗脫物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A51)。
[0049] 上述毛大丁草提取物的制備方法中，所述P)為下述R)或S)或T);
[0050] R)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 9%洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的制備方法包括所述B11);
[0051]S)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 20%洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的制備方法包括所述B21);
[0052]T)所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 50%洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物的制備方法包括所述B31)。
[0053] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了毛大丁草提取物。
[0054] 本發(fā)明所提供的毛大丁草提取物，為利用上述毛大丁草提取物的制備方法得到的 毛大丁草95%乙醇提取物和/或毛大丁草石油醚萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯萃取物 和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物和/或毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；所述毛大丁草 乙酸乙酯-石油醚洗脫物具體可為毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物和/或毛大丁 草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物。
[0055] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了毛大丁草在制備植物病原真菌抑制劑中的 應(yīng)用。
[0056] 本發(fā)明所提供的毛大丁草在制備植物病原真菌抑制劑中的應(yīng)用中，所述植物病原 真菌抑制劑的活性成分為上述毛大丁草提取物；所述毛大丁草提取物可為毛大丁草95% 乙醇提取物和/或毛大丁草石油醚萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯萃取物和/或毛大丁草 乙酸乙酯-石油醚洗脫物和/或毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚洗脫物具體可為毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石 油醚=20%洗脫物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物。
[0057] 上述毛大丁草在制備植物病原真菌抑制劑中的應(yīng)用中，所述植物病原真菌可為馬 鈴薯干腐病病菌、李干腐病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌這五種 中的五種、四種、三種、二種或一種。
[0058] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了植物病原真菌抑制劑。
[0059] 本發(fā)明所提供的植物病原真菌抑制劑，所述植物病原真菌抑制劑的活性成分為上 述毛大丁草提取物；所述毛大丁草提取物可為毛大丁草95 %乙醇提取物和/或毛大丁草石 油醚萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯萃取物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物和/ 或毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物具體可為毛大丁草乙 酸乙酯-石油醚=9%洗脫物和/或毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物和/或毛大 丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物。
[0060] 上述植物病原真菌抑制劑中，所述植物病原真菌可為馬鈴薯干腐病病菌、李干腐 病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌這五種中的五種、四種、三種、二 種或一種。
[0061] 上文中，所述95%乙醇水溶液是乙醇體積百分含量為95%的水溶液。
[0062] 實驗證明，本發(fā)明的毛大丁草提取物對植物病原真菌有抑制作用：毛大丁草乙酸 乙酯-石油醚=9%洗脫物對番茄灰霉病菌的抑菌率為58. 7% ±3. 1 %、對白菜黑斑病菌的 抑菌率為58. 1% ±0.7%、對桃褐腐病菌的抑菌率為67. 9% ±4. 3%、對李干腐病菌的抑菌 率可達72. 0% ±4. 1 % ;毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物對番茄灰霉病菌的抑菌 率為56. 3% ±5. 4%、對白菜黑斑病菌的抑菌率為65. 9% ±2. 8%、對桃褐腐病菌的抑菌率 達76. 7% ±1.8%、對李干腐病菌的抑菌率為44. 8% ±0.7%;毛大丁草乙酸乙酯萃取物對 番茄灰霉病菌的抑菌率為58.0% ±0.7%、對白菜黑斑病菌的抑菌率為40. 6% ±0.7%、對 桃褐腐病菌的抑菌率達77.6% ±3. 1% ;毛大丁草石油醚萃取物對桃褐腐病菌的抑菌率為 51. 1 % ±0.6%、對李干腐病菌的抑菌率為56. 9% ±4. 6%;毛大丁草95%乙醇提取物對番 茄灰霉病菌的抑菌率為42. 3% ±2. 9%、對桃褐腐病菌的抑菌率為50. 5% ±1.7%、對李干 腐病菌的抑菌率為32. 5% ±10.7% ;毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物對白菜黑 斑病菌的抑菌率為44. 7% ±1.4%、對桃褐腐病菌的抑菌率為42. 2% ±6.I%;毛大丁草乙 酸乙酯洗脫物對桃褐腐病菌的抑菌率為33. 3% ±2. 5%。
[0063] 結(jié)果表明，毛大丁草提取物對上述被測植物病原菌有不同的抑制作用，其中，乙酸 乙酯-石油醚=9%毛大丁草洗脫物和乙酸乙酯-石油醚=20%毛大丁草洗脫物對番茄灰 霉病病菌、白菜黑斑病菌、桃褐腐病菌和李干腐病菌的抑制作用明顯，毛大丁草提取物可直 接用于抑制對植物病原真菌，也可制備植物病原真菌抑制劑。本發(fā)明以中草藥毛大丁草為 原料開發(fā)了一種環(huán)境友好、高效、低毒的潛在新型和諧農(nóng)藥，對生態(tài)長遠發(fā)展、人類的健康 和病害的綜合治理都具有深遠的意義。與傳統(tǒng)的農(nóng)藥相比，本發(fā)明的毛大丁草提取物具有 以下的特點：本發(fā)明的毛大丁草提取物，對番茄灰霉病病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌和白 菜黑斑病菌具有明顯的抑制作用，可作為一種植物源農(nóng)藥開發(fā)；本發(fā)明所使用的毛大丁草 在我國分布廣泛，原材料易獲得；毛大丁草為菊科植物，毒性小。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0064] 圖1為毛大丁草95%乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物、乙酸 乙酯-石油醚=20%毛大丁草洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物和毛大丁 草乙酸乙酯洗脫物對桃褐腐病菌的抑制作用。
[0065] 圖中，A為不含毛大丁草提取物的對照培養(yǎng)基平板上桃褐腐病菌的生長狀況，B為 含有0.lmg/mL毛大丁草95%乙醇提取物的帶藥培養(yǎng)基平板上桃褐腐病菌的生長狀況，C為 含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上桃褐腐病菌的 生長狀況，D為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板 上桃褐腐病菌的生長狀況，E為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物的 帶藥培養(yǎng)基平板上桃褐腐病菌的生長狀況，F(xiàn)為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脫物的 帶藥培養(yǎng)基平板上桃褐腐病菌的生長狀況。
[0066] 圖2為毛大丁草95%乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物、毛大 丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物和毛大丁 草乙酸乙酯洗脫物對番茄灰霉病菌的抑制作用。
[0067]圖中，A為不含毛大丁草提取物的對照培養(yǎng)基平板上番茄灰霉病菌的生長狀況，B為含有0.lmg/mL毛大丁草95%乙醇提取物的帶藥培養(yǎng)基平板上番茄灰霉病菌的生長狀 況，C為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上番茄 灰霉病菌的生長狀況，D為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的帶藥 培養(yǎng)基平板上番茄灰霉病菌的生長狀況，E為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 50%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上番茄灰霉病菌的生長狀況，F(xiàn)為含有0.lmg/mL毛大丁草乙 酸乙酯洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上番茄灰霉病菌的生長狀況。
[0068] 圖3為毛大丁草95%乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物、毛大 丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物和毛大丁 草乙酸乙酯洗脫物對白菜黑斑病菌的抑制作用。
[0069]圖中，A為不含毛大丁草提取物的對照培養(yǎng)基平板上白菜黑斑病菌的生長狀況，B為含有0.lmg/mL毛大丁草95%乙醇提取物的帶藥培養(yǎng)基平板上白菜黑斑病菌的生長狀 況，C為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上白菜 黑斑病菌的生長狀況，D為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的帶藥 培養(yǎng)基平板上白菜黑斑病菌的生長狀況，E為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 50%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上白菜黑斑病菌的生長狀況，F(xiàn)為含有0.lmg/mL毛大丁草乙 酸乙酯洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上白菜黑斑病菌的生長狀況。
[0070] 圖4為毛大丁草95%乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物、毛大 丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物和毛大丁 草乙酸乙酯洗脫物對李干腐病菌的抑制作用。
[0071] 圖中，A為不含毛大丁草提取物的對照培養(yǎng)基平板上李干腐病菌的生長狀況，B為 含有0.lmg/mL毛大丁草95%乙醇提取物的帶藥培養(yǎng)基平板上李干腐病菌的生長狀況，C為 含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上李干腐病菌的 生長狀況，D為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板 上李干腐病菌的生長狀況，E為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物的 帶藥培養(yǎng)基平板上李干腐病菌的生長狀況，F(xiàn)為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯洗脫物的 帶藥培養(yǎng)基平板上李干腐病菌的生長狀況。
[0072] 圖5為毛大丁草95%乙醇提取物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物、毛大 丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物和毛大丁 草乙酸乙酯洗脫物對馬鈴薯干腐病菌的抑制作用。
[0073] 圖中，A為不含毛大丁草提取物的對照培養(yǎng)基平板上馬鈴薯干腐病菌的生長狀況， B為含有0.lmg/mL毛大丁草95 %乙醇提取物的帶藥培養(yǎng)基平板上馬鈴薯干腐病菌的生長 狀況，C為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上馬 鈴薯干腐病菌的生長狀況，D為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的 帶藥培養(yǎng)基平板上馬鈴薯干腐病菌的生長狀況，E為含有0.lmg/mL毛大丁草乙酸乙酯-石 油醚=50%洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上馬鈴薯干腐病菌的生長狀況，F(xiàn)為含有0.lmg/mL毛 大丁草乙酸乙酯洗脫物的帶藥培養(yǎng)基平板上馬鈴薯干腐病菌的生長狀況。

【具體實施方式】
[0074] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0075] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0076] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0077] 下述實施例中的番爺灰霉病菌（Botrytiscinerea)(朱建蘭.番爺灰霉病菌的生 物學(xué)特性研究，甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1995, 30 (1)，73-78.)，公眾可從野外采集，也可從北京 農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù)本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不可作為其它用途使用。本申請 中簡稱番爺灰霉病菌。
[0078] 下述實施例中的桃褐腐病菌（Moniliniafructicola)(胡海文，楊海清，王 朋，劉素花，趙曉燕，劉正坪.桃褐腐病菌拮抗細菌的分離篩選與鑒定中國農(nóng)學(xué)通報， 2009, 25 (12) : 195-200)，公眾可從野外采集，也可從北京農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù) 本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不可作為其它用途使用。本申請中簡稱桃褐腐病菌。
[0079] 下述實施例中的李干腐病菌（Polvporushirsutus)(任娜敏，馬煥普，劉志民.拮 抗放線菌Fl發(fā)酵液抑菌譜及穩(wěn)定性分析，北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2012, 27 (I)，32-35.)，公眾可 從野外采集，也可從北京農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù)本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不可作 為其它用途使用。本申請中簡稱李干腐病菌。
[0080] 下述實施例中的白菜黑斑病菌（Alternariabrassicae)(任娜敏，馬煥普，劉志 民.拮抗放線菌Fl發(fā)酵液抑菌譜及穩(wěn)定性分析，北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2012, 27 (1)，32-35.)，公 眾可從野外采集，也可從北京農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù)本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不 可作為其它用途使用。本申請中簡稱白菜黑斑病菌。
[0081] 下述實施例中的馬鈴薯干腐病菌（Pythiumcoeruleum)(卜春亞等.瑞香狼毒中 抑制植物病原真菌活性物質(zhì)研究.植物保護.北方園藝.2013(19) : 120-123)，公眾可從野 外采集，也可從北京農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù)本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不可作為其 它用途使用。本申請中簡稱馬鈴薯干腐病菌。
[0082] 下述實施例中的毛大丁草，產(chǎn)地湖北，購買自安徽亳州中藥材市場。
[0083] 下述實施例中的95%乙醇水溶液是乙醇體積百分含量為95%的水溶液。下述實 施例中毛大丁草提取物的制備均在20-25°C進行。
[0084] 下述實施例中乙酸乙酯-石油醚=9%均為乙酸乙酯和石油醚按照9:91的體積比 混合得到的混合物；
[0085] 下述實施例中乙酸乙酯-石油醚=20%均為乙酸乙酯和石油醚按照20:80的體積 比混合得到的混合物；
[0086] 下述實施例中乙酸乙酯-石油醚=50%均為乙酸乙酯和石油醚按照50:50的體積 比混合得到的混合物。
[0087] 實施例1、毛大丁草提取物的制備及其抑制植物病原真菌實驗
[0088] 1、毛大丁草提取物的制備
[0089] 本步驟制備了下述八種毛大丁草提取物：毛大丁草95%乙醇提取物、毛大丁草石 油醚萃取物、毛大丁草乙酸乙酯萃取物、毛大丁草水溶物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 9%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50% 洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯洗脫物。具體制備方法如下：
[0090] 1)將毛大丁草全草在液氮中研磨粉碎后，加入95%乙醇水溶液進行提取，收集 提取液，減壓濃縮除去所述提取液中的乙醇得到浸膏，該浸膏即為毛大丁草95%乙醇提取 物；
[0091] 2)將步驟1)的毛大丁草95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取該混 懸液，分別收集石油醚相和水相，減壓濃縮除去該石油醚相中的石油醚即得到毛大丁草石 油醚萃取物；
[0092] 3)用乙酸乙酯萃取步驟2)的水相，分別收集乙酸乙酯相和水相，減壓濃縮除去該 乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得到毛大丁草乙酸乙酯萃取物，減壓濃縮除去該水相中的水即 得到毛大丁草水溶物；
[0093] 4)將步驟3)的毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=9%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20 %洗脫物、毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=50%洗脫物、毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；所述硅膠柱層析的洗脫是依次乙酸 乙酯-石油醚=9%洗脫，然后用乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫，再用乙酸乙酯-石油醚= 50%洗脫，最后用乙酸乙酯洗脫，收集上述四部分的洗脫液，得到毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=9%洗脫物，毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物，毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 50%洗脫物和毛大丁草乙酸乙酯洗脫物。具體方法如下：
[0094] 采用瑞典biotage公司的色譜儀（SP1-B2B0)、采用瑞典biotage公司的目錄號為 FSK0-1107-0100的SNAPCartridgeKP-SilIOOg的層析柱進行硅膠柱層析。其中，色譜儀 帶有紫外檢測器，目錄號為FSK0-1107-0100的SNAPCartridgeKP-SillOOg的層析柱的柱 長為16cm,內(nèi)徑為4cm,層析介質(zhì)為娃膠（200-300目），該層析柱中的娃膠質(zhì)量為IOOg,該 層析柱的柱床體積為145ml。
[0095]將步驟3)的毛大丁草乙酸乙酯萃取物與硅膠（200-300目）按質(zhì)量比1:1拌樣， 將該樣品上完樣后，用上述乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫至254nm不再出現(xiàn)色譜峰，共用13 個柱體積的乙酸乙酯-石油醚=9%洗柱，流速為20ml/min，收集該13個柱體積的乙酸乙 酯-石油醚洗脫出的液體，將該液體稱為毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫液，減壓濃 縮除去該毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫液中的乙酸乙酯-石油醚，得到毛大丁草 乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物；接著再用乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫至254nm不再出 現(xiàn)色譜峰，共用15個柱體積的乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫，流速為20ml/min，收集該15 個柱體積的洗脫液，將該液體稱為毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫液，減壓濃縮除 去該毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫液中的乙酸乙酯和石油醚，得到毛大丁草乙酸 乙酯-石油醚=20%洗脫物；然后用乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫至254nm不再出現(xiàn)色譜 峰，共用12個柱體積的乙酸乙酯-石油醚=50%洗柱，流速為20ml/min，收集該12個柱體 積的乙酸乙酯-石油醚洗脫出的液體，將該液體稱為毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗 脫液，減壓濃縮除去該毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫液中的乙酸乙酯和石油醚， 得到毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物；最后用乙酸乙酯洗脫至254nm不再出現(xiàn)色 譜峰，共用10個柱體積的乙酸乙酯洗柱，流速為20ml/min，收集該10個柱體積的乙酸乙酯 脫出的液體，將該液體稱為毛大丁草乙酸乙酯洗脫液，減壓濃縮除去該毛大丁草乙酸乙酯 洗脫液中的乙酸乙酯，得到毛大丁草乙酸乙酯洗脫物。
[0096] 2、毛大丁草提取物抑制植物病原真菌的活性
[0097] 分別以番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌和馬鈴薯干腐病菌 這五種真菌菌株中的一種菌株為供試菌株，按照下述實驗方法測定步驟1的8種毛大丁草 提取物抑制植物病原真菌的活性：
[0098] 將步驟1中8種毛大丁草提取物中的每一種毛大丁草提取物分別單獨溶于二甲基 亞砜（DMSO)中，使每一種毛大丁草提取物的濃度均為10mg/ml，得到濃度均為lOmg/ml的 以下8種毛大丁草提取物二甲基亞砜溶液：10mg/ml的毛大丁草95%乙醇提取物的二甲基 亞砜溶液、lOmg/ml的毛大丁草石油醚萃取物的二甲基亞砜溶液、lOmg/ml毛大丁草乙酸乙 酯萃取物二甲基亞砜溶液、lOmg/ml毛大丁草水溶物的二甲基亞砜溶液、lOmg/ml毛大丁草 乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的二甲基亞砜溶液、lOmg/ml毛大丁草乙酸乙酯-石油醚= 20%洗脫物的二甲基亞砜溶液，lOmg/ml毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物的二甲 基亞砜溶液、lOmg/ml毛大丁草乙酸乙酯洗脫物的二甲基亞砜溶液。
[0099] 吸取濃度為lOmg/ml的一種毛大丁草提取物的二甲基亞砜溶液Iml加到裝有 IOOrnl融化的PDA培養(yǎng)基（45°C)的三角瓶中混勻，得到IOlml藥品培養(yǎng)基，將該IOlml培 養(yǎng)基平均倒入5個滅菌培養(yǎng)皿（直徑9cm)中，制成該種毛大丁草提取物的含量為0.lmg/ml的帶藥培養(yǎng)基平板。
[0100] 吸取Iml二甲基亞砜加到裝有IOOml融化的PDA培養(yǎng)基（45°C)的三角瓶中混勻， 得到IOlml對照培養(yǎng)基，該IOlml對照培養(yǎng)基平均倒入5個滅菌培養(yǎng)皿（直徑9cm)中，制 成對照培養(yǎng)基平板。
[0101] 每一種供試菌株的測定方法均如下：供試菌株在PDA培養(yǎng)基中于25°C培養(yǎng)5天后 在菌落邊緣菌絲生長旺盛處用打孔器打取直徑為0. 8cm的菌餅，分別接種于每個帶藥培養(yǎng) 基平板和每個對照培養(yǎng)基中央（有菌絲的一面向下）。每個帶藥培養(yǎng)基平板和每個對照培 養(yǎng)基平板各放一個菌餅，每處理設(shè)三個重復(fù)（每個重復(fù)一個平板），25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天 后，采用十字交叉法測定菌落直徑，按以下公式計算抑菌率：抑菌率=(對照培養(yǎng)基平板菌 落直徑-0. 8)-(帶藥培養(yǎng)基平板菌落直徑-0. 8)八對照培養(yǎng)基平板菌落直徑-0.8)。
[0102] 其中，PDA培養(yǎng)基按照如下方法配制：馬鈴薯200g(去皮的馬鈴薯切成小塊，煮沸 30分鐘過濾去濾液）、葡萄糖20g，瓊脂18-20g，用蒸餾水定容至1000ml，121 °C蒸氣滅菌 20min〇
[0103] 結(jié)果如表1所示，毛大丁草提取物對植物病原真菌有抑制作用：毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=9%洗脫物對番茄灰霉病菌的抑菌率為58. 7% ±3. 1%、對白菜黑斑病菌的 抑菌率為58. 1% ±0.7%、對桃褐腐病菌的抑菌率為67. 9% ±4. 3%、對李干腐病菌的抑菌 率可達72.0% ±4. 1 %;毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物對番茄灰霉病菌的抑菌 率為56. 3% ±5. 4%、對白菜黑斑病菌的抑菌率為65. 9% ±2. 8%、對桃褐腐病菌的抑菌率 達76. 7% ±1.8%、對李干腐病菌的抑菌率為44. 8% ±0.7%;毛大丁草乙酸乙酯萃取物對 番茄灰霉病菌的抑菌率為58.0% ±0.7%、對白菜黑斑病菌的抑菌率為40. 6% ±0.7%、對 桃褐腐病菌的抑菌率達77.6% ±3. 1% ;毛大丁草石油醚萃取物對桃褐腐病菌的抑菌率為 51. 1 % ±0.6%、對李干腐病菌的抑菌率為56. 9% ±4. 6%;毛大丁草95%乙醇提取物對番 茄灰霉病菌的抑菌率為42. 3% ±2. 9%、對桃褐腐病菌的抑菌率為50. 5% ±1.7%、對李干 腐病菌的抑菌率為32. 5% ±10.7% ;毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物對白菜黑 斑病菌的抑菌率為44. 7% ±1.4%、對桃褐腐病菌的抑菌率為42. 2% ±6. 1 %;毛大丁草乙 酸乙酯洗脫物對桃褐腐病菌的抑菌率為33. 3% ±2.5%。結(jié)果表明，毛大丁草提取物可直 接用于抑制對植物病原真菌，也可制備植物病原真菌抑制劑。
[0104] 表1、毛大丁草提取物對植物病原真菌的抑菌率（％ )
[0105]

【權(quán)利要求】
1. 毛大丁草提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用；所述毛大丁草提取物為下述 Al)-A5)中的任一種： A1)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物； A2)毛大丁草乙酸乙酯萃取物； A3)毛大丁草石油醚萃取物； A4)毛大丁草95 %乙醇提取物； A5)毛大丁草乙酸乙酯洗脫物； 所述毛大丁草95%乙醇提取物按照包括下述A41)步驟的方法制備： A41)用95%乙醇水溶液提取毛大丁草，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到 所述毛大丁草95 %乙醇提取物； 所述毛大丁草石油醚萃取物按照包括下述A31)步驟的方法制備： A31)將所述毛大丁草95 %乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取該混懸液，得 到石油醚相和水相，除去所述石油醚相中的石油醚即得到所述毛大丁草石油醚萃取物； 所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物按照包括下述A21)步驟的方法制備： A21)用乙酸乙酯萃取所述水相，得到乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯 即得到所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物； 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物按照包括下述All)步驟的方法制備： All)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚洗脫物；所述硅膠柱層析包括：用乙酸乙酯-石油醚進行洗脫，收集洗脫出的液 體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯-石油醚洗脫液，除去所述乙酸乙酯-石油醚洗脫液中 的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物； 所述毛大丁草乙酸乙酯洗脫物按照包括下述A51)步驟的方法制備： A51)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗 脫物；所述硅膠柱層析包括：先用乙酸乙酯-石油醚進行洗脫，再用乙酸乙酯進行洗脫，收 集洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯洗脫液，除去所述乙酸乙酯洗脫液中的 乙酸乙酯即得到所述毛大丁草乙酸乙酯洗脫物； 所述乙酸乙酯-石油醚為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物； 所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量大于等于1%且小于100% ; 所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌、桃褐腐病菌、李干腐病菌、白菜黑斑病菌和馬鈴薯 干腐病菌這五種中的五種、四種、三種、二種或一種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯 的體積含量為9% -50%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸 乙酯的體積含量為9% -20%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物 為下述Bl)-B3)中的任一種： B1)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物； B2)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物； B3)毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物； 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物按照包括下述B11)步驟的方法制備： B11)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=9%洗脫物；所述硅膠柱層析包括：用乙酸乙酯-石油醚=9%進行洗脫，收 集洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫液，除去所述乙酸乙 酯-石油醚=9%洗脫液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=9%洗脫物； 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物按照包括下述B21)步驟的方法制備： B21)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=20%洗脫物；所述硅膠柱層析包括：先用乙酸乙酯-石油醚=9%進行洗脫， 再用乙酸乙酯-石油醚=20 %進行洗脫，收集洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸 乙酯-石油醚=20%洗脫液，除去所述乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫液中的所述乙酸乙 酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物； 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物按照包括下述B31)步驟的方法制備： B31)將所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析得到所述毛大丁草乙酸乙 酯-石油醚=50%洗脫物；所述硅膠柱層析包括：先用乙酸乙酯-石油醚=9%進行洗脫， 再用乙酸乙酯-石油醚=20%進行洗脫，然后用乙酸乙酯-石油醚=50%進行洗脫，收集 洗脫出的液體，將該洗脫出的液體稱為乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫液，除去所述乙酸乙 酯-石油醚=50%洗脫液中的所述乙酸乙酯-石油醚即得到所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=50 %洗脫物； 所述乙酸乙酯-石油醚=9%為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物，所述混合物中所 述乙酸乙酯和所述石油醚的體積比為9:91 ; 所述乙酸乙酯-石油醚=20%為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物，所述混合物中所 述乙酸乙酯和所述石油醚的體積比為20:80 ; 所述乙酸乙酯-石油醚=50%為由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物，所述混合物中所 述乙酸乙酯和所述石油醚的體積比為50:50。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述毛大丁草為毛大丁草全草。
6. 權(quán)利要求1-3中任一所述的毛大丁草提取物的制備方法，為下述M)-Q)的任一種： M) 所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草95%乙醇提取物；所述毛大丁草95%乙醇提 取物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A41); N) 所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草石油醚萃取物；所述毛大丁草石油醚萃取物 的制備方法包括權(quán)利要求1所述A31); 〇)所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草乙酸乙酯萃取物；所述毛大丁草乙酸乙酯萃 取物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A21); P) 所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物；所述毛大丁草乙 酸乙酯-石油醚洗脫物的制備方法包括權(quán)利要求1所述All);所述乙酸乙酯-石油醚為 由乙酸乙酯和石油醚組成的混合物；所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量大 于等于1%且小于100% ;進一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量為 9%-50% ;更進一步，所述乙酸乙酯-石油醚中所述乙酸乙酯的體積含量為9%-20% ; Q) 所述毛大丁草提取物為所述毛大丁草乙酸乙酯洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯洗 脫物的制備方法包括權(quán)利要求1所述A51)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述P)為下述R)或S)或T); R) 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為權(quán)利要求4所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=9%洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=9%洗脫物的制備方法包括權(quán)利要求4 所述B11); S) 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為權(quán)利要求4所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=20%洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=20%洗脫物的制備方法包括權(quán)利要求 4所述B21); T) 所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚洗脫物為權(quán)利要求4所述毛大丁草乙酸乙酯-石油 醚=50%洗脫物；所述毛大丁草乙酸乙酯-石油醚=50%洗脫物的制備方法包括權(quán)利要求 4所述B31)。
8. 由權(quán)利要求6或7所述的制備方法制備的毛大丁草提取物。
9. 毛大丁草在制備植物病原真菌抑制劑中的應(yīng)用，所述植物病原真菌抑制劑的活性成 分為權(quán)利要求8所述的毛大丁草提取物；所述植物病原真菌為馬鈴薯干腐病病菌、李干腐 病病菌、番茄灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌這五種中的五種、四種、三種、二 種或一種。
10. 植物病原真菌抑制劑，所述植物病原真菌抑制劑的活性成分為權(quán)利要求8所述的 毛大丁草提取物；所述植物病原真菌為馬鈴薯干腐病病菌、李干腐病病菌、番茄灰霉病病 菌、白菜黑斑病病菌和桃褐腐病病菌這五種中的五種、四種、三種、二種或一種。
【文檔編號】A01P3/00GK104351262SQ201410515287
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月29日
【發(fā)明者】柳春梅, 趙曉萌, 馬蘭青, 呂鶴書, 王樹芳, 高立東 申請人:北京農(nóng)學(xué)院