一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法，包括金挖耳無(wú)菌葉片的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的增殖、愈傷組織的分化、壯苗、生根等步驟，本發(fā)明方法所制備的金挖耳可以在短期內(nèi)獲得大量的金挖耳再生植株，且遺傳穩(wěn)定性好，為金挖耳的大規(guī)模開發(fā)利用提供基礎(chǔ)。
【專利說(shuō)明】一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及金挖耳組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 金挖耳，CkrjDesiw? t/iraricaiw?，菊科天名精屬的植物，生長(zhǎng)于海拔100米至 2000米的山坡那、荒地，多生于路旁或山坡灌叢中，分布在日本、朝鮮以及中國(guó)大陸的華東、 華中、西南、華南、東北等地，清熱解毒，治感冒，頭風(fēng)，泄瀉，咽喉腫痛，赤眼，癰腫瘡毒，痔核 出血。目前金挖耳的利用皆為人工采集，采集難度達(dá)，尚未有人工引種栽培，使用率低，組培 應(yīng)用于金挖耳的繁殖技術(shù)，有利于其廣泛的推廣應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種金挖耳的快速繁殖方法，由該方法可以在 短期內(nèi)獲得大量的金挖耳再生植株，且遺傳穩(wěn)定性好，為金挖耳的大規(guī)模開發(fā)利用提供基 礎(chǔ)金挖耳增殖系數(shù)高，成活率高。
[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的： 取金挖耳幼嫩的葉片，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0. 1%的氯化萊處理lOmin，無(wú)菌 水沖洗5次，消毒處理過(guò)的金挖耳幼嫩葉片接入BTM+6-BA2. 0mg/L+2,4-D0. 4mg/L+0. 3g/L 活性炭培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,暗室培養(yǎng)，溫 度24±2°C，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. Omg/L+ZTO. 15mg/L+0. 3g/L活性 炭進(jìn)行愈傷組織增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照15001x，光期10h/d，溫度 24±2°C，增殖培養(yǎng)出來(lái)的愈傷組織接入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. 0mg/L+KT0· 5mg/L+0. lmg/LIBA 中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照25001x，光期12h/d， 溫度 24±2°C，分化出來(lái)的幼苗接入培養(yǎng)基 BTM+6-BA1. 0mg/L+NAAl. 0mg/L+GA30. 3-0. 5g/L 中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照60001x，光期14h/d，溫度26±2°C， 壯苗后的試管苗加入MS+0. 5-1. 0mg/LNAA+0. 3-0. 5g/LAC中進(jìn)行生根誘導(dǎo)。
[0005] 采用本發(fā)明制備的金挖耳成活率高，周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不 局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】 [0007] 實(shí)施例1 取金挖耳幼嫩的葉片，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0. 1%的氯化萊處理10min，無(wú)菌 水沖洗5次，消毒處理過(guò)的金挖耳幼嫩葉片接入BTM+6-BA2. 0mg/L+2,4-D0. 4mg/L+0. 3g/L 活性炭培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,暗室培養(yǎng)，溫 度24±2°C，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. 0mg/L+ZT0. 15mg/L+0. 3g/L活性 炭進(jìn)行愈傷組織增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照15001x，光期10h/d，溫度 24±2°C，增殖培養(yǎng)出來(lái)的愈傷組織接入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. Omg/L+KTO. 5mg/L+0. lmg/LIBA 中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照25001x，光期12h/d， 溫度24±2°C，分化出來(lái)的幼苗接入培養(yǎng)基BTM+6-BA1. Omg/L+NAAl. 0mg/L+GA30. 3g/L中進(jìn) 行壯苗培養(yǎng)，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照60001x，光期14h/d，溫度26±2°C，壯 苗后的試管苗加入MS+0. 5mg/LNAA+0. 3g/LAC中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，生根率93%。
[0008] 實(shí)施例2 取金挖耳幼嫩的葉片，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0. 1%的氯化萊處理lOmin，無(wú)菌 水沖洗5次，消毒處理過(guò)的金挖耳幼嫩葉片接入BTM+6-BA2. 0mg/L+2,4-D0. 4mg/L+0. 3g/L 活性炭培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,暗室培養(yǎng)，溫 度24±2°C，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. Omg/L+ZTO. 15mg/L+0. 3g/L活性 炭進(jìn)行愈傷組織增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照15001x，光期10h/d，溫度 24±2°C，增殖培養(yǎng)出來(lái)的愈傷組織接入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. 0mg/L+KT0· 5mg/L+0. lmg/LIBA 中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照25001x，光期12h/d， 溫度24±2°C，分化出來(lái)的幼苗接入培養(yǎng)基BTM+6-BA1. Omg/L+NAAl. 0mg/L+GA30. 4g/L中進(jìn) 行壯苗培養(yǎng)，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照60001x，光期14h/d，溫度26±2°C，壯 苗后的試管苗加入MS+1. 0mg/LNAA+0. 4g/LAC中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，生根率95%。
[0009] 實(shí)施例3 取金挖耳幼嫩的葉片，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上0. 1%的氯化萊處理10min，無(wú)菌 水沖洗5次，消毒處理過(guò)的金挖耳幼嫩葉片接入BTM+6-BA2. 0mg/L+2,4-D0. 4mg/L+0. 3g/L 活性炭培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,暗室培養(yǎng)，溫 度24±2°C，誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. Omg/L+ZTO. 15mg/L+0. 3g/L活性 炭進(jìn)行愈傷組織增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照15001x，光期10h/d，溫度 24±2°C，增殖培養(yǎng)出來(lái)的愈傷組織接入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. 0mg/L+KT0· 5mg/L+0. lmg/LIBA 中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照25001x，光期12h/d， 溫度24±2°C，分化出來(lái)的幼苗接入培養(yǎng)基BTM+6-BA1. Omg/L+NAAl. 0mg/L+GA30. 5g/L中進(jìn) 行壯苗培養(yǎng)，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照60001x，光期14h/d，溫度26±2°C，壯 苗后的試管苗加入MS+1. 0mg/LNAA+0. 5g/LAC中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，生根率94%。
【權(quán)利要求】
1. 一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法，包括金挖耳無(wú)菌葉片的獲得、愈傷組織的誘 導(dǎo)、愈傷組織的增殖、愈傷組織的分化、壯苗、生根其主要步驟如下： (1) 取金挖耳幼嫩的葉片，對(duì)其進(jìn)行消毒處理； (2) 取步驟（1)消毒處理過(guò)的金挖耳幼嫩葉片接入BTM+6-BA2. 0mg/L+2,4-D0. 4mg/ L+0. 3g/L活性炭培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,暗 室培養(yǎng)，溫度24±2°C ; (3) 取步驟（2)誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織放入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. Omg/L+ZTO. 15mg/L+0. 3g/ L活性炭進(jìn)行愈傷組織增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照15001x，光期10h/ d，溫度 24±2°C ; (4 )取步驟（3 )增殖培養(yǎng)出來(lái)的愈傷組織接入培養(yǎng)基BTM+6-BA2. Omg/L+KIU 5mg/ L+0. lmg/LIBA中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，pH5. 85,光照 25001x，光期 12h/d，溫度 24±2°C ; (5) 取步驟（4)分化出來(lái)的幼苗接入培養(yǎng)基BTM+6-BA1. Omg/L+NAAl. Omg/ L+GA30. 3-0. 5g/L中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，ρΗ5· 85,光照60001x，光期 14h/d，溫度 26±2°C ; (6) 取步驟（5)壯苗后的試管苗加入MS+0. 5-1. Omg/LNAA+O. 3-0. 5g/LAC中進(jìn)行生根誘 導(dǎo)。
2. 按照權(quán)利要求1所述的一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法，其特征在于：步驟 (1) 中所述金挖耳無(wú)菌葉片的獲得為，取金挖耳幼嫩的葉片，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上 0. 1%的氯化萊處理lOmin，無(wú)菌水沖洗5次。
3. 按照權(quán)利要求1所述的一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法，其特征在于：步驟 (2) 和（3)中附加了 0.3g/L活性炭，有助于防止愈傷組織的褐化。
4. 按照權(quán)利要求1所述的一種金挖耳植株再生的快速繁殖方法，其特征在于：步驟 (5)中金挖耳的壯苗培養(yǎng)中附加了 GA3，可以促進(jìn)試管苗的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104186338SQ201410463130
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】楊存 申請(qǐng)人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司