一種紅芽芋的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種紅芽芋組培快繁的方法，是將紅芽芋球莖頂端的芽和側(cè)芽經(jīng)過(guò)處理后剝?nèi)∏o尖，從莖尖上切取生長(zhǎng)點(diǎn)，接種于無(wú)菌培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷、不定芽和不定根，進(jìn)而在較短時(shí)間內(nèi)大量形成紅芽芋組培種苗。本發(fā)明提供的紅芽芋組培快繁方法，通過(guò)莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)可以對(duì)紅芽芋種苗進(jìn)行脫毒和品種提純復(fù)壯，加速種苗繁育進(jìn)程，克服了紅芽芋傳統(tǒng)繁殖系數(shù)過(guò)低和工廠化快繁成本過(guò)高而無(wú)法與市場(chǎng)接軌的缺點(diǎn)；組培快繁繁殖系數(shù)高，繁殖量大，初代污染率低于10％，平均誘導(dǎo)率高于90％，集中成苗周期大大縮短。
【專利說(shuō)明】一種紅芽芋的組培快繁方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物脫毒快繁領(lǐng)域，尤其是一種利用植物組織離體培養(yǎng)技術(shù)、人工快 速繁殖紅芽芋種苗的紅芽芋組培快繁的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 紅芽芋是芋屬天南星科多年生草本植物，以地下球莖子芋為主要收獲物的蔬菜， 其食用部分球莖富含淀粉、粗纖維、粗脂肪、蛋白質(zhì)、VC、鈣、磷、鐵，是芋中珍品，可作蔬菜或 主食，具有無(wú)公害、產(chǎn)量高、商品價(jià)值高、耐貯運(yùn)等優(yōu)點(diǎn)。隨著種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和人們對(duì)無(wú)公 害蔬菜及品種多樣化的需求，紅芽芋的身價(jià)也相對(duì)提高，特別是優(yōu)質(zhì)、反季節(jié)的芋頭上市后 倍受青睞，一直是國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上緊俏的搶手貨。目前，隨著生產(chǎn)不斷發(fā)展，植株無(wú)性繁殖積 累病毒逐漸增多，紅芽芋品種普遍出現(xiàn)早衰現(xiàn)象，病害嚴(yán)重，產(chǎn)量和品質(zhì)下降。因而，利用組 織培養(yǎng)脫毒試管苗快速繁殖已成為紅芽芋生產(chǎn)急需解決的問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種紅芽芋組培快繁的方法，通過(guò)莖尖分生組織進(jìn)行組織培 養(yǎng)，加速種苗繁育進(jìn)程。
[0004] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種紅芽芋的組培快繁方法， 該方法包括以下步驟：
[0005] 1)切取健壯紅芽芋球莖頂芽或側(cè)芽約0.5cm左右大小，浸泡在飽和洗衣粉溶液 lOmin，流水沖洗25-30min，在無(wú)菌條件下置于75 %的酒精溶液中浸泡10s，再用0. 1 %升汞 溶液浸泡l〇_12min，無(wú)菌水浸洗3?4次；
[0006] 2)在體式解剖鏡下將頂芽或側(cè)芽的莖尖仔細(xì)剝離，并切取0. 2?0. 4mm的生長(zhǎng)點(diǎn)， 接種于無(wú)菌培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為24?26°C，光照強(qiáng)度1500?20001x/12h · d，培養(yǎng)基配 制時(shí)先用〇· lmol/L氫氧化鈉或0· lmol/L鹽酸將pH值調(diào)整為5. 8-6. 0,然后進(jìn)行高溫高壓 滅菌；
[0007] 3)初代培養(yǎng)，初代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS，附加1. 5mg/L的6-BA和0· 05mg/L的 NAA，培養(yǎng)45天；
[0008] 4)繼代與增值培養(yǎng)，將初代培養(yǎng)的不定芽或叢生小植株，分切成帶有2-3個(gè)芽 的叢生芽塊，接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，增殖培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，附加濃度為 2. Omg/L 的 6-BA 和濃度為 0· 03-0. 05mg/L 的 NAA ;
[0009] 5)壯苗與生根培養(yǎng)，將生長(zhǎng)健壯具有2-3片葉的試管苗，轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基中，一 周后紅芽芋試管苗開(kāi)始生根，再繼續(xù)培養(yǎng)15天，紅芽芋試管苗開(kāi)始長(zhǎng)出大量的白色根系， 同時(shí)長(zhǎng)成茁壯的小植株，生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為1/2MS，附加濃度為0. 1-0. 3mg/L的 IBA和濃度為15g/L的蔗糖。
[0010] 上述MS培養(yǎng)基的成分為（mg/L):
[0011] 大量元素：順4勵(lì)31650、謂031900、〇3(：12.2!1 20440、]\%504.7!120370、腿2?0 4170;
[0012] 微量元素：ΚΙ0· 83、Η3Β036· 3、MnS04 ·4Η2022· 3、ZnS04 ·7Η208· 6、Na2Mo04 ·2Η200· 25、 CuS04 · 5Η200· 025、CoCl2 · 6Η200· 025 ;
[0013] 鐵鹽：FeS04 · 7Η2027· 8、Na2-EDTA · 2Η2037· 3 ;
[0014] 有機(jī)物質(zhì)：肌醇100、煙酸0. 5、鹽酸吡哆醇（維生素 Β6)0. 5、鹽酸硫胺素（維生素 B1)0. 1、甘氨酸 2. 0 ;
[0015] 配制1/2MS時(shí)，將配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他營(yíng)養(yǎng)元素不 變，即得到1/2MS母液。
[0016] 本發(fā)明的有益效果：通過(guò)莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)可以對(duì)紅芽芋種苗進(jìn)行脫毒和品種提 純復(fù)壯，加速種苗繁育進(jìn)程，克服了紅芽芋傳統(tǒng)繁殖系數(shù)過(guò)低和工廠化快繁成本過(guò)高而無(wú) 法與市場(chǎng)接軌的缺點(diǎn)；組培快繁繁殖系數(shù)高，繁殖量大，初代污染率低于10%，平均誘導(dǎo)率 高于90%，集中成苗周期大大縮短。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下對(duì)本發(fā)明的步驟和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限 定本發(fā)明的范圍。
[0018] 實(shí)施例1
[0019] 一種紅芽芋的組培快繁方法，該方法包括以下步驟：
[0020] 1)切取健壯紅芽芋球莖頂芽或側(cè)芽約0.5cm左右大小，浸泡在飽和洗衣粉溶液 lOmin，流水沖洗25min，在無(wú)菌條件下置于75%的酒精溶液中浸泡10s，再用0. 1%升汞溶 液浸泡lOmin,無(wú)菌水浸洗3次；
[0021] 2)在體式解剖鏡下將頂芽或側(cè)芽的莖尖仔細(xì)剝離，并切取0. 2mm的生長(zhǎng)點(diǎn)，接種 于無(wú)菌培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為24°C，光照強(qiáng)度16001x/12h · d，培養(yǎng)基配制時(shí)先用0. lmol/L 氫氧化鈉或〇. lmol/L鹽酸將pH值調(diào)整為5. 8,然后進(jìn)行高溫高壓滅菌；
[0022] 3)初代培養(yǎng)，初代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS，附加 L 5mg/L的6-BA和0· 05mg/L的 NAA，培養(yǎng)45天；
[0023] 4)繼代與增值培養(yǎng)，將初代培養(yǎng)的不定芽或叢生小植株，分切成帶有2-3個(gè)芽 的叢生芽塊，接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，增殖培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，附加濃度為 2. Omg/L 的 6-BA 和濃度為 0. 03mg/L 的 NAA ;
[0024] 5)壯苗與生根培養(yǎng)，將生長(zhǎng)健壯具有2-3片葉的試管苗，轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基中，一 周后紅芽芋試管苗開(kāi)始生根，再繼續(xù)培養(yǎng)15天，紅芽芋試管苗開(kāi)始長(zhǎng)出大量的白色根系， 同時(shí)長(zhǎng)成茁壯的小植株，生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為1/2MS，附加濃度為0. lmg/L的IBA和 濃度為15g/L的蔗糖。
[0025] 上述MS培養(yǎng)基的成分為（mg/L):
[0026] 大量元素：NH4N031650、KN031900、CaCl2 · 2H20440、MgS04 · 7H20370、KH2P04170 ;
[0027] 微量元素：ΚΙ0. 83、H3B036. 3、MnS04 ·4Η2022· 3、ZnS04 ·7Η208· 6、Na2Mo04 ·2Η200· 25、 CuS04 · 5Η200· 025、CoCl2 · 6Η200· 025 ;
[0028] 鐵鹽：FeS04 · 7Η2027· 8、Na2_EDTA · 2Η2037· 3 ;
[0029] 有機(jī)物質(zhì)：肌醇100、煙酸0· 5、鹽酸吡哆醇（維生素 Β6)0· 5、鹽酸硫胺素（維生素 B1)0. 1、甘氨酸 2. 0 ;
[0030] 配制1/2MS時(shí)，將配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他營(yíng)養(yǎng)元素不 變，即得到1/2MS母液。
[0031] 實(shí)施例2
[0032] -種紅芽芋的組培快繁方法，該方法包括以下步驟：
[0033] 1)切取健壯紅芽芋球莖頂芽或側(cè)芽約0.5cm左右大小，浸泡在飽和洗衣粉溶液 lOmin，流水沖洗30min，在無(wú)菌條件下置于75%的酒精溶液中浸泡10s，再用0. 1%升汞溶 液浸泡12min,無(wú)菌水浸洗4次；
[0034] 2)在體式解剖鏡下將頂芽或側(cè)芽的莖尖仔細(xì)剝離，并切取0. 4mm的生長(zhǎng)點(diǎn)，接種 于無(wú)菌培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為26°C，光照強(qiáng)度19001x/12h · d，培養(yǎng)基配制時(shí)先用0. lmol/L 氫氧化鈉或〇. lmol/L鹽酸將pH值調(diào)整為6. 0,然后進(jìn)行高溫高壓滅菌；
[0035] 3)初代培養(yǎng)，初代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS，附加1. 5mg/L的6-BA和0· 05mg/L的 NAA，培養(yǎng)45天；
[0036] 4)繼代與增值培養(yǎng)，將初代培養(yǎng)的不定芽或叢生小植株，分切成帶有2-3個(gè)芽 的叢生芽塊，接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，增殖培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，附加濃度為 2. Omg/L 的 6-BA 和濃度為 0. 05mg/L 的 NAA ;
[0037] 5)壯苗與生根培養(yǎng)，將生長(zhǎng)健壯具有2-3片葉的試管苗，轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基中，一 周后紅芽芋試管苗開(kāi)始生根，再繼續(xù)培養(yǎng)15天，紅芽芋試管苗開(kāi)始長(zhǎng)出大量的白色根系， 同時(shí)長(zhǎng)成茁壯的小植株，生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為1/2MS，附加濃度為0. 3mg/L的IBA和 濃度為15g/L的蔗糖。
[0038] 上述MS培養(yǎng)基的成分為（mg/L):
[0039] 大量元素：NH4N031650、KN031900、CaCl2 · 2H20440、MgS04 · 7H20370、KH2P04170 ;
[0040] 微量元素：KIO. 83、H3B036. 3、MnS04 ·4Η2022· 3、ZnS04 ·7Η208· 6、Na2Mo04 ·2Η200· 25、 CuS04 · 5Η200· 025、CoCl2 · 6Η200· 025 ;
[0041] 鐵鹽：FeS04 · 7Η2027· 8、Na2-EDTA · 2Η2037· 3 ;
[0042] 有機(jī)物質(zhì)：肌醇100、煙酸0. 5、鹽酸吡哆醇（維生素 B6)0. 5、鹽酸硫胺素（維生素 B1)0. 1、甘氨酸 2. 0 ;
[0043] 配制1/2MS時(shí)，將配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他營(yíng)養(yǎng)元素不 變，即得到1/2MS母液。
[0044] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精 神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種紅芽芋的組培快繁方法，其特征在于該方法包括以下步驟： 1) 切取健壯紅芽芋球莖頂芽或側(cè)芽約0. 5cm左右大小，浸泡在飽和洗衣粉溶液lOmin， 流水沖洗25-30min，在無(wú)菌條件下置于75%的酒精溶液中浸泡10s，再用0. 1 %升汞溶液浸 泡l〇-12min，無(wú)菌水浸洗3?4次； 2) 在體式解剖鏡下將頂芽或側(cè)芽的莖尖仔細(xì)剝離，并切取0. 2?0. 4mm的生長(zhǎng)點(diǎn)，接 種于無(wú)菌培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為24?26°C，光照強(qiáng)度1500?20001x/12h · d，培養(yǎng)基配制 時(shí)先用0· lmol/L氫氧化鈉或0· lmol/L鹽酸將pH值調(diào)整為5. 8-6. 0,然后進(jìn)行高溫高壓滅 菌； 3) 初代培養(yǎng)，初代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS，附加1. 5mg/L的6-BA和0. 05mg/L的NAA， 培養(yǎng)45天； 4) 繼代與增值培養(yǎng)，將初代培養(yǎng)的不定芽或叢生小植株，分切成帶有2-3個(gè)芽的叢生 芽塊，接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，增殖培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，附加濃度為2. Omg/L的 6-BA 和濃度為 0. 03-0. 05mg/L 的 NAA ; 5) 壯苗與生根培養(yǎng)，將生長(zhǎng)健壯具有2-3片葉的試管苗，轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基中，一周后 紅芽芋試管苗開(kāi)始生根，再繼續(xù)培養(yǎng)15天，紅芽芋試管苗開(kāi)始長(zhǎng)出大量的白色根系，同時(shí) 長(zhǎng)成茁壯的小植株，生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為1/2MS，附加濃度為0. 1-0. 3mg/L的IBA和 濃度為15g/L的蔗糖。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅芽芋的組培快繁方法，其特征在于：所述MS培養(yǎng)基的 成分為（mg/L): 大量元素：順4吣31650、謂031900、〇3(：12*2!1 20440、]\%504*7!120370、腿2?0 4170; 微量元素：ΚΙ0. 83、Η3Β036 · 3、MnS04 · 4Η2022· 3、ZnS04 · 7Η208· 6、Na2Mo04 · 2Η200· 25、 CuS04 · 5Η200· 025、CoCl2 · 6Η200· 025 ; 鐵鹽：FeS04 · 7Η2027· 8、Na2-EDTA · 2Η2037· 3 ; 有機(jī)物質(zhì)：肌醇100、煙酸0.5、鹽酸吡哆醇（維生素 Β6)0. 5、鹽酸硫胺素（維生素 B1)0. 1、甘氨酸 2. 0 ; 配制1/2MS時(shí)，將配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他營(yíng)養(yǎng)元素不變，即 得到1/2MS母液。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104145820SQ201410406156
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月18日
【發(fā)明者】江芹, 廖華俊, 董玲, 寧志怨, 李衛(wèi)文, 許曉婷 申請(qǐng)人:安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所