西藏淺棕色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種西藏淺棕色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法。本發(fā)明所提供的雙孢蘑菇具體為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091，它是采自中國西藏林芝地區(qū)的野生菌株經(jīng)過人工馴化后得到的，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?No.8307。實驗證明，本發(fā)明所提供給的西藏淺棕色雙孢蘑菇2091（CGMCC?No.8307）子實體的蛋白質(zhì)含量和粗纖維含量都較高，而碳水化合物含量略低。該菌株菌蓋主色為淺棕色，菌種播種后萌發(fā)較快，從接種到原基發(fā)生的時間相對較短。本發(fā)明開發(fā)了雙孢蘑菇新品種，對于保護該物種的種質(zhì)資源、調(diào)整雙孢蘑菇品種結(jié)構(gòu)、豐富我國野生雙孢蘑菇種質(zhì)資源庫、推進雙孢蘑菇菌種的選育和改良等具有重要意義。
【專利說明】西藏淺棕色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種西藏淺棕色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雙孢蘑燕[Agaricus bisporus (J.E.Lange) Imbach]是當今世界上栽培面積最廣、產(chǎn)量最多的全球性食用菌，也是我國最大宗的出口創(chuàng)匯食用菌之一。它以其豐富的營養(yǎng)、鮮美的口味和提高機體免疫力的作用，非常適合現(xiàn)代人的美食追求。
[0003]雙孢蘑菇的人工栽培始于法國路易十四時代，隨后在歐洲和北美各國迅速推廣。20世紀20年代中期傳入中國。目前全世界有超過80個國家和地區(qū)栽培雙孢蘑菇，中國的雙孢蘑菇總產(chǎn)量位居世界前列。然而，目前我國雙孢蘑菇的主栽菌株來源比較單一，遺傳基礎(chǔ)狹窄，可能造成雙孢蘑菇菌種的抗逆性和對不良環(huán)境適應(yīng)能力的降低，加速雙孢蘑菇菌種的退化，從而不利于雙孢蘑菇的栽培生產(chǎn)。
[0004]我國現(xiàn)有的雙孢蘑菇栽培種質(zhì)大多是從國外引進的，白色品系居多，鮮有棕色品種，野生的雙孢蘑菇種植資源十分缺乏。因此，從我國境內(nèi)采集得到野生雙孢蘑菇菌株，將有利于豐富我國野生雙孢蘑菇種質(zhì)資源庫，推進雙孢蘑菇菌種的選育和改良，具有極大的開發(fā)利用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種西藏淺棕色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法。
[0006]本發(fā)明提供的西藏淺棕色雙孢蘑菇新菌株是從西藏林芝采集到野生菌新鮮標本，經(jīng)組織分離培養(yǎng)和馴化而成。該菌株被命名為“雙孢蘑菇2091”，并保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號)，保藏編號為CGMCC N0.8307。
[0007]所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)在作為親本進行雜交育種中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0008]栽培所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)得到的子實體也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0009]培養(yǎng)所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)得到的菌絲體也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0010]本發(fā)明所提供的所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)子實體的栽培方法，可包括如下步驟:
[0011](I)母種制備:將所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)接種到母種培養(yǎng)基上(一般為試管斜面)，220C - 260C (如24 - 26°C，具體如24°C )避光培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到的菌絲體作為母種；
[0012]其中，接種量為每20cm2表面積的所述母種培養(yǎng)基中接入0.2cmX0.2cm面積大小的所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)的菌絲。[0013](2)原種制備:將步驟(1)所得的母種轉(zhuǎn)接到原種培養(yǎng)基上，22°C -26 °C (如24 - 26°C,具體如24 V )避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% - 70%,培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到原種；
[0014]其中，接種量為每500mL體積的所述原種培養(yǎng)基中接入3 - 5個0.5cmX0.5cm面積大小的所述母種的菌種塊。
[0015](3)栽培種制備:將步驟(2)所得的原種轉(zhuǎn)接到栽培種培養(yǎng)基上，22°C -26°C (如24 - 26°C,具體如24°C )避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% - 70%,培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到栽培種；
[0016]其中，接種量為每IOOmL體積的所述栽培種培養(yǎng)基中接入ImL體積的所述原種。
[0017](4)接種及發(fā)菌:將步驟(3)所得的栽培種接入栽培料，22 °C - 26 °C (如24 - 26°C，具體如24°C )避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為65% - 75% ；
[0018]其中，接種量為每平米栽培面積的所述栽培料接入700 -1OOOmL所述栽培種。
[0019](5)覆土:步驟(4)培養(yǎng)的菌絲長至所述栽培料厚度的3/4時，開始在所述栽培料的料面上覆土，220C - 260C (如24 - 26°C,具體如24°C )避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為70% -75%，每天通風(fēng)I次維持空氣中二氧化碳相對濃度0.1% - 0.5% (體積分數(shù))；
[0020]所述覆土具體為:向所述栽培料上覆蓋一層厚度為3-3.5cm的土壤-麥殼混合物；所述土壤-麥殼混合物按照lm3 土壤(生黃土或菜園土)摻入25kg麥殼(新鮮無霉變的麥殼)的量混合而成；所述土壤-麥殼混合物的pH為8 - 8.5,濕度為40% - 50% (即土壤-麥殼混合物中水分的質(zhì)量分數(shù)為40 - 50%)；
[0021](6)出菇管理:步驟(5)培養(yǎng)的菌絲生長到土層表面時，補一層細土，轉(zhuǎn)移至?xí)円箿夭顬? -1O0C (白天溫度為18 - 25°C，夜晚溫度為10 - 15°C)，光照強度為500 - 800Lux,空氣相對濕度為85% - 95%，每天通風(fēng)2 - 3次使二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15% (體積分數(shù))的條件下培養(yǎng)3 - 5天；
[0022](7)出菇:轉(zhuǎn)移至環(huán)境溫度為12°C - 20°C，空氣相對濕度為75% - 90%, 二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15% (體積分數(shù))的條件下培養(yǎng)得到子實體。
[0023]在上述方法中，所述母種培養(yǎng)基為麩皮浸汁培養(yǎng)基；每升所述麩皮浸汁培養(yǎng)基按照如下方法配制得到:將麩皮(小麥外皮)100g放入900mL水中煮沸l(wèi)Omin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BllOmg，加熱使之完全溶化，再加水補足至lOOOmL，pH為7.5 - 8.0，滅菌30min，獲得IL所述麩皮浸汁培養(yǎng)基。
[0024]在上述方法中，所述原種培養(yǎng)基和所述栽培種培養(yǎng)基均由青稞、干糞草(發(fā)酵后的干糞草)、石膏粉、生石灰和水混合而成；所述青稞、所述干糞草、所述石膏粉和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為85:12:2:1 ;所述水在所述原種培養(yǎng)基和所述載體種培養(yǎng)基中的質(zhì)量百分含量均為65%。
[0025] 其中，所述干糞草按照如下方法制備獲得:將水、牛糞、秸桿按照質(zhì)量配比為6:2:I的比例混合后，堆制發(fā)酵10天，期間每隔3天翻堆一次，外料內(nèi)翻，上料下翻，翻堆3次，然后曬干粉碎過篩(篩孔徑0.5cmX0.5cm),即得到所述干糞草。其中，牛糞和秸桿的質(zhì)量按照
干重計算。
[0026]進一步，所述栽培料可由如下栽培原料經(jīng)二次發(fā)酵后得到:所述栽培原料由秸桿(如小麥秸桿和/或青稞秸桿)、動物糞便(如干牛糞和/或雞糞)、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述秸桿、所述動物糞便、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為60:35:1:0.5:2:0.5:2。
[0027]在本發(fā)明中，所述栽培原料具體為如下(al) - (a5)中任一種:
[0028](al)栽培原料1:由小麥秸桿、干牛糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述小麥秸桿、所述干牛糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為60:35:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0029](a2)栽培原料2:由小麥秸桿、青稞秸桿、干牛糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，pH7.5-8.0 ;所述小麥秸桿、所述青稞秸桿、所述干牛糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為30:30:35:1:
0.5:2:0.5:2 ；
[0030](a3)栽培原料3:由小麥秸桿、青稞秸桿、干牛糞、雞糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述小麥秸桿、所述青稞秸桿、所述干牛糞、所述雞糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為 30:30:15:20:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0031](a4)栽培原料4:由小麥秸桿、青稞秸桿、干牛糞、雞糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述小麥秸桿、所述青稞秸桿、所述干牛糞、所述雞糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為 30:30:25:10:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0032](a5)栽培原料5:由小麥秸桿、青稞秸桿、雞糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，pH7.5-8.0 ;所述小麥秸桿、所述青稞秸桿、所述雞糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量(干重)配比為30:30:35:1:0.5:2:0.5:2o
[0033]在本發(fā)明中，所述二次發(fā)酵分為前發(fā)酵和后發(fā)酵。所述前發(fā)酵為:向所述栽培原料加水至水分質(zhì)量含量為65% - 70%,堆制發(fā)酵，監(jiān)測堆體溫度，只要堆體溫度達到70°C以上后開始下降時進行一次翻堆，經(jīng)過3 - 4次翻堆后，完成所述前發(fā)酵。所述后發(fā)酵為:將經(jīng)過所述前發(fā)酵的栽培料進行再次發(fā)酵，將堆體溫度人工升至60°C并保持10h，然后將堆體溫度人工降至50°C保持3 - 4d，自然降溫一天后，再將堆體溫度人工降至常溫(25°C)，完成所述后發(fā)酵，所述二次發(fā)酵即告結(jié)束。
[0034]更加具體的，在本發(fā)明的一個實施例中，所述前發(fā)酵是將所述栽培原料用水進行預(yù)濕(至其含水量約為68%)、混勻后，堆制發(fā)酵，建堆規(guī)格為高1.0 - 1.2m，寬1.8-2.2m，在堆體長度方向每隔Im左右在堆體垂直插入直徑IOcm木桿造通氣孔，監(jiān)測堆體溫度，只要堆體溫度達到70°C以上開始下降時就進行一次翻堆，翻堆4次后，完成所述前發(fā)酵。所述后發(fā)酵是將經(jīng)過前發(fā)酵的培養(yǎng)料進行再次發(fā)酵，采用人工通蒸汽輔助升溫使發(fā)酵的料溫達到60°C左右并保持IOh左右，再通過調(diào)節(jié)通入蒸汽量，使菇房中層溫度在50°C左右保持3 - 4d(可根據(jù)培養(yǎng)料一次發(fā)酵腐熟程度靈活掌握)，即可?；鹱匀唤禍匾惶旌?，適當通風(fēng)使菇房內(nèi)溫度降至40°C，之后打開全部風(fēng)口通風(fēng)，降至常溫(25°C左右)進行培養(yǎng)料整床，二次發(fā)酵即告結(jié)束。經(jīng)過所述二次發(fā)酵的栽培原料應(yīng)無氨味，無糞臭味，可以看到料面明顯的白色放線菌層。[0035]進一步，將經(jīng)過所述二次發(fā)酵的栽培原料的含水量要調(diào)整到65% (質(zhì)量分數(shù))，pH值調(diào)整到7.0 - 7.5，即得到所述栽培料。
[0036]在所述方法中，栽培方式具體可為層架栽培。
[0037]所述層架栽培為:層架規(guī)格為3 _ 5層，層聞0.6m,覽1.5m,底層距尚地面0.3m(長度依據(jù)需要而定)；所述栽培料平鋪于每層床架進行栽培出菇。
[0038]所述子實體在食品加工中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0039]本發(fā)明所提供的所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)是采自中國西藏林芝地區(qū)的野生菌株經(jīng)過人工馴化后得到的。實驗證明，所述西藏淺棕色雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)子實體的蛋白質(zhì)含量和粗纖維含量都較高。該菌株菌蓋主色為淺棕色，菌種播種后萌發(fā)較快，從接種到原基發(fā)生的時間相對較短。本發(fā)明開發(fā)了雙孢蘑菇新品種，對于保護該物種的種質(zhì)資源、調(diào)整雙孢蘑菇品種結(jié)構(gòu)、豐富我國野生雙孢蘑菇種質(zhì)資源庫、推進雙孢蘑菇菌種的選育和改良等具有重要意義。
[0040]保藏說明
[0041]建議分類命名:雙孢蘑菇
[0042]拉丁名:(Agaricusbisporus)
[0043]參椐的生物材料:2091
[0044]保藏機構(gòu):中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0045]保藏機構(gòu)簡稱:CGMCC
[0046]地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號
[0047]保藏日期:2013年10月14日
[0048]保藏中心登記入冊編號:CGMCC N0.8307
【專利附圖】

【附圖說明】
[0049]圖1為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)在PDA平板上24°C黑暗培養(yǎng)20天的菌落照片。
[0050]圖2為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)的瓶裝原種。
[0051]圖3為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)的袋裝栽培種(694為原始采
集編號)。
[0052]圖4為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)接種栽培料15天后，菌絲的吃料情況。
[0053]圖5為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)出菇階段原基照片。
[0054]圖6為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)出菇階段子實體照片。
【具體實施方式】
[0055]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0056]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0057]雙孢蘑菇As2796:在本發(fā)明中作為西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)的對照品種。As2796為國內(nèi)廣泛栽培的雙孢蘑菇雜交種，由福建省輕工業(yè)研究所(現(xiàn)為福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所)以荷蘭的菌株02和來自法國的菌株8213作親本，通過雜交篩選而獲得的品種。現(xiàn)今，As2796在我國已大面積推廣，成為我國栽培量最大的雙孢蘑菇品種(王澤生，蘑菇雜交株As2796的種性與栽培技術(shù)要點。食用菌，1993.5:8 ;王澤生，曾偉，雙孢蘑菇雜交菌株As2796家系的分子遺傳研究。菌物系統(tǒng)，2001.20(2):233 - 237)。
[0058]實施例1、西藏淺棕色雙孢蘑菇2091的獲得及分類鑒定
[0059]本發(fā)明菌株(記作2091)是從西藏自治區(qū)林芝采集到野生雙孢蘑菇新鮮標本，經(jīng)組織分離、培養(yǎng)和馴化而成。通過對其子實體和菌絲體形態(tài)特征的觀察，結(jié)合細胞核rDNA-1TS測序，對該菌株進行分類鑒定。
[0060]一、形態(tài)學(xué)特性
[0061]1、菌絲體形態(tài)特性
[0062]本發(fā)明菌株2091的菌絲潔白、濃密，同側(cè)耳屬相比，生長速度相對較慢。如圖1所示，為菌株2091在PDA平板上24°C避光培養(yǎng)20天的菌落照片。[0063]2、子實體形態(tài)特性
[0064]本發(fā)明菌株2091的子實體形態(tài)如圖6所示。子實體大小中等，菌蓋寬5 - 10cm，初半球形，后逐漸平展，淺棕色，表面均勻分布0.2 - 0.5cm大小近白色鱗片。菌肉白色，厚，傷后略變淡紅色，具蘑菇特有的氣味。菌褶粉紅色，后變褐色至黑褐色，密，窄，離生，不等長。菌柄長2.5 - 4.5cm,粗1.5 - 3.5cm,白色,光滑,具絲光,近圓柱形，內(nèi)部松軟或中實。菌環(huán)單層，白色，膜質(zhì)，生菌柄中部，易脫落。孢子印深褐色。孢子褐色，橢圓形，光滑。
[0065]通過上述形態(tài)學(xué)鑒定,將本發(fā)明菌株2091初步判斷為蘑燕屬(Agaricus)的物種。
[0066]二、分子生物學(xué)特性
[0067]rDNA-1TS 序列作為條形碼(Schoch, C.L.et al.Nuclear ribosomal internaltranscribed spacer(ITS)region as a universal DNA barcode marker for Fung1.Proceedings of the National Academy of Sciences, 2012.109:6241 - 6246),廣泛用于真菌物種鑒定。本發(fā)明對采集的野生雙孢蘑菇子實體，分離得到的本發(fā)明菌株2091及其栽培形成的子實體進行DNA提取和rDNA-1TS擴增測序，其測序結(jié)果表明三者具有相同的rDNA-1TS序列，如序列表中序列I所示。該序列與GenBank中經(jīng)過研究定名為雙孢蘑燕(六8&1'；[(3118 bisporus)的 rDNA-1TS 序列，如 AF465403 (Callac, P.et al.A novelhomothallic variety of Agaricus bisporus comprises rare tetrasporic isolatesfrom Europe.Mycologia, 2003.95:222 - 231.)> AF432886 (Challen, M.P.et al.Aphylogenetic reconstruction and emendation of Agaricus section Duploannulatae.Mycologia, 2003.95:61 - 73.)和 JN234841、JN234843 (Avin, F.A.et al.Molecularclassification and phylogenetic relationships of selected edible Basidiomycetesspecies.Molecular biology reports, 2012.39:7355-7364.)進行比對分析，僅有一個喊基的差異，其同源相似性接近100%。
[0068]鑒于上述形態(tài)特征及rDNA-1TS序列的分類鑒定研究，確定本發(fā)明菌株2091為雙孢蘑燕(Agaricus bisporus),隸屬于擔子菌門(Basidiomycota)、蘑燕綱(八區(qū)&1'；[(301115^6七68)、蘑燕目(△8&1'；^3168)、蘑燕科(六831'；^30636)、蘑燕屬(Agaricus)。該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCCJias:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號)，保藏編號為CGMCC N0.8307。
[0069]實施例2、西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)子實體的人工栽培[0070]一、栽培流程
[0071]西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)的栽培流程具體如下:母種制備一原種制備一栽培種制備一接種及發(fā)菌一覆土一出燕管理一出燕一米收。
[0072](I)母種的制備:將組織分離得到的西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)的稀疏菌絲，接種到母種培養(yǎng)基上，其接種量為每20cm2表面積的母種培養(yǎng)基中接入
0.2cmX0.2cm面積大小的菌絲,一定溫度下避光培養(yǎng),培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基,得到的菌絲體作為母種。
[0073](2)原種的制備:將步驟(1)所得的母種轉(zhuǎn)接到原種培養(yǎng)基上，其接種量為每500mL體積的原種培養(yǎng)基中均勻接入3 - 5個0.5cmX0.5cm面積大小的母種的菌種塊,一定溫度下避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% - 70%,培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到原種。
[0074](3)栽培種的制備:將步驟(2)所得的原種轉(zhuǎn)接到栽培種培養(yǎng)基上，其接種量為菌種與培養(yǎng)基體積比1:100，一定溫度下避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% - 70%,培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到栽培種。
[0075](4)接種及發(fā)菌:將步驟(3)所得的栽培種接入栽培料，其接入比例為每平米栽培面積的所述栽培料接入700 -1OOOmL所述栽培種，一定溫度下避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為65% - 75%。
[0076](5)覆土:步驟(4)培養(yǎng)的菌絲長至所述栽培料厚度的3/4時，向所述栽培料上覆蓋一層厚度為3-3.5cm的土壤-麥殼混合物，一定溫度下避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為70% - 75%，每天通風(fēng)I次使空氣中二氧化碳相對濃度0.1% - 0.5% (體積分數(shù))；
[0077]所述土壤-麥殼混合物按照Im3 土壤(生黃土或菜園土)摻入25kg麥殼(新鮮無霉變的麥殼)的量混合而成；所述土壤-麥殼混合物的pH為8 - 8.5,濕度為40% - 50% (即土壤-麥殼混合物中水分的質(zhì)量分數(shù)為40 - 50%)。
[0078](6)出菇管理:步驟(5)培養(yǎng)的菌絲生長到土層表面時，補一層細土，開始降溫，維持晝夜6 - 10°C的溫差刺激(白天溫度為18 - 25°C，夜晚溫度為10 - 15°C)，以及光照強度為500 - 800Lux、的弱光刺激，空氣相對濕度為85% - 95%，每天通風(fēng)2-3次使二氧化碳相對濃度下降至0.05% - 0.15% (體積分數(shù))，培養(yǎng)3 - 5天。
[0079](7)出菇:發(fā)現(xiàn)大量蘑菇原基后，轉(zhuǎn)移至環(huán)境溫度為12°C - 20°C，空氣相對濕度為75% - 90%, 二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15% (體積分數(shù))的條件下培養(yǎng)。
[0080](8)采收:待子實體長至八成熟，菌蓋尚未完全展開，即可采收第一潮菇。采摘后進行清理殘留菇根、補土菇穴，待菌絲恢復(fù)后重新上述操作進行出菇，采收下一潮菇。
[0081]二、條件優(yōu)化
[0082]本發(fā)明的發(fā)明人分別對栽培過程中的如下因素進行了優(yōu)化:培養(yǎng)溫度、母種培養(yǎng)基、原種培養(yǎng)基、栽培種培養(yǎng)基、栽培料和栽培方式。
[0083]1、培養(yǎng)溫度的確定
[0084]將組織分離得到的西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)的稀疏菌絲，通過打孔的方式，按照直徑為0.5cm的接種塊量，接種于PDA綜合培養(yǎng)基(配方見下文)上，分別放于不同的溫度(20°C、22°C、24°C、26°C、28°C )下避光培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中測定菌絲的生長速度，并觀察菌絲的疏密。
[0085]其中，菌絲平均生長速度測定:培養(yǎng)2 - 3d后，記錄菌絲位置(A)，3 - 5d后記錄菌絲位置(B)，用直尺測量A與B之間的距離，除以兩位置之間的天數(shù)即為菌絲的日平均生長速度。
[0086]實驗重復(fù)三次，定量數(shù)據(jù)結(jié)果取平均值。
[0087]結(jié)果如表1所示，可見西藏淺棕色雙孢蘑菇2091 (CGMCC N0.8307)在24°C條件下，菌絲生長速度較快，菌絲較粗壯。
[0088]表1不同溫度下菌絲生長速度的測定結(jié)果(單位:cm/d)
[0089]
【權(quán)利要求】
1.雙孢蘑菇2091，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為 CGMCC N0.8307。
2.權(quán)利要求1所述雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)在作為親本進行雜交育種中的應(yīng)用。
3.栽培權(quán)利要求1所述雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)得到的子實體。
4.培養(yǎng)權(quán)利要求1所述雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)得到的菌絲體。
5.權(quán)利要求3所述子實體的栽培方法，包括如下步驟: (1)母種制備:將所述雙孢蘑菇2091(CGMCC N0.8307)接種到母種培養(yǎng)基上，22°C -26°C避光培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到的菌絲體作為母種； (2)原種制備:將步驟(1)所得的母種轉(zhuǎn)接到原種培養(yǎng)基上，22°C- 26°C避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% - 70%，培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到原種； (3)栽培種制備:將步驟(2)所得的原種轉(zhuǎn)接到栽培種培養(yǎng)基上，22°C- 26°C避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% - 70%,培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)基，得到栽培種； (4)接種及發(fā)菌:將步驟(3)所得的栽培種接入栽培料，22°C- 26°C避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為65% - 75% ； (5)覆土:步驟(4)培養(yǎng)的菌絲長至所述栽培料厚度的3/4時，開始在所述栽培料的料面上覆土，22°C - 26°C避光培養(yǎng)，空氣相對濕度為70% - 75% ； (6)出菇管理:步驟(5)的菌絲生長到土層表面時，轉(zhuǎn)移至?xí)円箿夭顬?- 10°C，光照強度為200 -1OOOLux,空氣相對濕度為85% - 95%的條件下培養(yǎng)3 - 5天； (7)出菇:轉(zhuǎn)移至環(huán)境溫度為12°C- 20°C，空氣相對濕度為75% - 90%,空氣中二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15%的條件下培養(yǎng)得到子實體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于:所述母種培養(yǎng)基為麩皮浸汁培養(yǎng)基；每升所述麩皮浸汁培養(yǎng)基按照如下方法配制得到:將麩皮100g放入900mL水中煮沸l(wèi)Omin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BllOmg，再加水補足至1000mL,獲得IL所述麩皮浸汁培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于:所述原種培養(yǎng)基和所述栽培種培養(yǎng)基均由青稞、干糞草、石膏粉、生石灰和水混合而成；所述青稞、所述干糞草、所述石膏粉和所述生石灰的質(zhì)量配比為85:12:2:1 ;所述水在所述原種培養(yǎng)基和所述栽培種培養(yǎng)基中的質(zhì)量百分含量均為65%。
8.根據(jù)權(quán)利要求5- 7中任一所述的方法，其特征在于:所述栽培料由栽培原料經(jīng)二次發(fā)酵后得到；所述栽培原料由秸桿、動物糞便、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成；所述秸桿、所述動物糞便、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質(zhì)量配比為60:35 :1:0.5:2:0.5:2。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一所述的方法,其特征在于:在所述方法中，栽培方式為層架栽培。
10.權(quán)利要求3所述子實體在食品加工中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01G1/04GK103875452SQ201410119729
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月27日
【發(fā)明者】姚一建, 李斌斌, 蔣思萍, 魏鐵錚, 徐愛國, 王曉亮, 張祖堂, 普布多吉 申請人:中國科學(xué)院微生物研究所