魁蒿有效成分提取方法及該成分在抗植物病害中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了對(duì)植物病毒和植物細(xì)菌具有抑制作用的活性物質(zhì)的制備方法及其用途。制備方法是以貴州魁蒿為原料，曬干后粉碎，用乙醇提??；將乙醇提取物用氯仿萃取；將氯仿萃取層也減壓濃縮得到粗提物；將氯仿粗提物經(jīng)硅膠柱層析，以不同比例的石油醚-乙酸乙酯混合洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)若干次硅膠柱層析法等純化手段，得到兩個(gè)單體化合物，分別是8α-羥基蒿萜和5,4’-二羥基-6,7,3’-三甲氧基黃酮。經(jīng)生物活性測(cè)試表明，單體化合物I對(duì)黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋葉枯病毒等植物病毒有較好的防治作用。5,4’-二羥基-6,7,3’-三甲氧基黃酮對(duì)番茄青枯病菌、煙草青枯病菌、水稻白葉枯病菌、水稻細(xì)菌性條斑病等細(xì)菌性病害病原菌具有良好的抑制作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】魁蒿有效成分提取方法及該成分在抗植物病害中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物源農(nóng)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及能抑制植物病害活性物質(zhì)的制備方法及其應(yīng)用，具體的說(shuō)，是以產(chǎn)于貴州的一種植物-魁蒿為原料，采用各種化學(xué)手段和方法提取其中的活性物質(zhì)，活性物質(zhì)對(duì)植物病毒和細(xì)菌病菌具有較高抑制作用。
【背景技術(shù)】
[0002]植物病毒是一類(lèi)危害大且難防治的植物病害，有“植物癌癥”之稱(chēng)，一旦發(fā)病，很難防治。黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋葉枯病毒是糧經(jīng)作物生產(chǎn)中的主要病毒病，農(nóng)作物受其危害而不同程度的減產(chǎn)、影響品質(zhì)，甚至絕收。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界每年由黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋葉枯病毒的危害就造成約數(shù)十億多美元的經(jīng)濟(jì)損失，目前我國(guó)農(nóng)作物受其危害而損失嚴(yán)重，且尚無(wú)特效的防治藥劑。目前，市場(chǎng)上銷(xiāo)售的大多數(shù)抗作物病毒制劑防治效果差，缺乏有效防控技術(shù)。因此，尋找具有高效、低毒、及環(huán)境友好型抗病毒活性藥物已成為當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題。
[0003]植物細(xì)菌病害與病毒病害一樣，呈現(xiàn)出發(fā)生頻度高、成災(zāi)重、發(fā)生范圍廣、防控難度大、危害程度重等特點(diǎn)，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響我國(guó)糧食與經(jīng)濟(jì)作物生產(chǎn)安全。目前市場(chǎng)上用于防治植物細(xì)菌的農(nóng)藥主要是銅制劑，如噻菌銅、可殺得等，但銅制劑易被雨水沖刷而失去藥效，持效期太短，防治效果差等。因此，研究和開(kāi)發(fā)高效、低毒、低殘留、環(huán)境友好型抑制植物細(xì)菌病害的農(nóng)藥迫在眉睫。
[0004]研究發(fā)現(xiàn)，很多天然植物中的化學(xué)成分，具有高效、低毒，低殘留以及環(huán)境友好的特點(diǎn)，因此，提取天然產(chǎn)物中的有效化學(xué)成分，尋找到具有較高活性的先導(dǎo)化合物，已成為當(dāng)前研究綠色農(nóng)藥的熱點(diǎn)之一。
[0005]魁蒿屬于菊科蒿屬多年生草本植物，學(xué)名princeps?wiQ.又名野艾蒿，王侯蒿(云南)，五月艾(廣東)，野艾(湖南)，艾葉、黃花艾、端午艾(廣西)。多產(chǎn)于我國(guó)遼寧(南部)、內(nèi)蒙古(東南部)、河北(南部)、山西(南部)、陜西(南部)、甘肅(南部)、山東、江蘇、安徽、江西、福建、臺(tái)灣、河南、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、貴州、云南；多生于低海拔或中海拔地區(qū)的路旁、山坡、灌叢、林緣及溝邊。此外，該植物在日本、朝鮮也有分布?？镒鳛橐晃吨兴幘哂徐铒L(fēng)除濕、調(diào)經(jīng)安胎等功效。民間入藥，作“艾”的代用品，有逐寒濕、理氣血、調(diào)經(jīng)、安胎、止血、消炎等的功效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，魁蒿含有的主要化學(xué)成分可分為揮發(fā)油、倍半萜、黃酮以及留體等。
[0006]據(jù)《中華本草》中記載，魁蒿葉中含有揮發(fā)油0.45%-1.00%，有2-甲基丁醇、2-己烯醛等60種成分，還有黃酮類(lèi)、桉葉烷類(lèi)、三萜類(lèi)等成分；魁蒿葉具有平喘、鎮(zhèn)咳、祛痰、消炎等作用。臨床上用于治療慢性支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘等。(《中華本草》編委會(huì).《中華本草》[M].上海，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，.第十九卷(7).668.)2011年，Ryu等報(bào)道了魁蒿的揮發(fā)油及其成分能夠抑制皮膚的瘙癢癥狀，作者以成年大鼠為試驗(yàn)品做止癢試驗(yàn)，結(jié)果表明，魁蒿的揮發(fā)油及其化學(xué)成分-葉綠醇能夠明顯抑制過(guò)敏性細(xì)胞因子(NF-rB，AP-1)的激活和表達(dá)，從而達(dá)到抑制皮膚瘙癢的作用(Ryu，K.R.; Choi J.Y.; Chung S.; et al.Ant1-scratching Behavioral Effectof theEssential Oil and Phytol Isolatedfrom Artemisia princepsPamp.1n Mice[J].Planta Med, 2011, 77: 22-26.)
2011年，Trinh等報(bào)道了魁蒿揮發(fā)油的主要化學(xué)成分對(duì)加德納菌和白色念珠菌具有較好的抑制作用，作者以成年大鼠為試驗(yàn)品做止癢試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了魁蒿的揮發(fā)油及其化學(xué)成分能夠抑制大鼠體內(nèi)微生物的生長(zhǎng)，其中松油醇能夠很好的抑制大鼠體內(nèi)加德納菌和白色念珠菌的生長(zhǎng)，其MIC值可達(dá)到0.06和0.125%(V/V)。(Trinh, H.T.;Lee, 1.A.; Hyun, Y.J.; et al.Artemisia pr in ceps? amp.Essential Oil andIts ConsitituentsEucalyptol and a -terpineol AmeliorateBacterial Vaginosisand Vulvovaginal Candidiasisin Mice by Inhibiting Bacterial Growth andNF-尤 BActivation[J].Planta Med, 2011, 77: 1996-2002.)
總之，魁蒿對(duì)部分植物真菌病菌具有一定的抑制作用，然而，該植物在農(nóng)用活性的研究較少，因此，本發(fā)明的發(fā)明人對(duì)魁蒿的化學(xué)成分進(jìn)行提取和分離，研究其在農(nóng)用活性方面的作用，發(fā)現(xiàn)了其中的化學(xué)成分8 α -羥基蒿萜對(duì)煙草花葉病毒有良好的抑制作用，5，4’ - 二羥基-6，7，3’ -三甲氧基黃酮對(duì)抗植物病毒和細(xì)菌病害具有較好的抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是:針對(duì)缺乏黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋葉枯病毒和番茄青枯病菌、煙草青枯病菌、水稻白葉枯病菌、水稻細(xì)菌性條斑病的防治藥物或藥劑，提供對(duì)抗植物病毒和細(xì)菌病害具有較高抑制作用的植物源活性化合物的提取方法。發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)黔產(chǎn)魁蒿中的化學(xué)成分8 α -羥基蒿萜即化合物I在鈍化作用方面對(duì)黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋 葉枯病毒有良好的抑制作用，5，4’- 二羥基_6，7, 3’- 二甲氧基黃酮即化合物II對(duì)番茄青枯病菌、煙草青枯病菌、水稻白葉枯病菌、水稻細(xì)菌性條斑病具有較好抑制作用。
[0008]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供貴州魁蒿中單體化合物8 α -羥基蒿萜和5，4’- 二羥基-6，7，3’ -三甲氧基黃酮的提取方法及其分別在抗植物病毒和細(xì)菌病害中的應(yīng)用:
本發(fā)明魁蒿有效成分的提取方法，所指魁蒿的有效成分為8α-羥基蒿萜，簡(jiǎn)稱(chēng)化合物I和5，4’ - 二羥基-6，7，3’ -三甲氧基黃酮，簡(jiǎn)稱(chēng)化合物II，其結(jié)構(gòu)式分別為:
【權(quán)利要求】
1.魁蒿有效成分的提取方法，其特征在于:所指魁蒿的有效成分為80.-羥基蒿萜，簡(jiǎn)稱(chēng)化合物I和5，4’ - 二羥基-6，7，3’ -三甲氧基黃酮，簡(jiǎn)稱(chēng)化合物II，其結(jié)構(gòu)式分別為:
2.按照權(quán)利I所述的魁蒿有效成分在抗植物病害中的應(yīng)用，其特征在于:根據(jù)8α-羥基蒿萜即化合物I對(duì)植物病毒病具有良好抑制作用的性質(zhì)，用于制備抑制植物病毒的藥物或藥劑；根據(jù)5，4’ - 二羥基-6，7，3’ -三甲氧基黃酮即化合物II對(duì)植物細(xì)菌具有較好抑制作用的性質(zhì)，用于制備抑制植物細(xì)菌病菌的藥物或藥劑。
3.根據(jù)權(quán)利2所述的魁蒿有效成分在抗植物病害中的應(yīng)用，其特征在于:化合物I用于制備抑制植物病毒的藥物或藥劑是指黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、南方水稻黑條矮縮病毒病和水稻條紋葉枯病毒等病毒抑制的藥物或藥劑。
4.根據(jù)權(quán)利2所述的魁蒿有效成分在抗植物病害中的應(yīng)用，其特征在于:化合物II用于制備抑制植物細(xì)菌病菌的藥物或藥劑是指對(duì)番茄青枯病菌、煙草青枯病菌、水稻白葉枯病菌、水稻細(xì)菌性條斑病等細(xì)菌病菌抑制的藥物或藥劑。
5.根據(jù)權(quán)利2所述的魁蒿有效成分在抗植物病害中的應(yīng)用，其特征在于:所指的劑型包括農(nóng)藥的各種劑型?！?br> 【文檔編號(hào)】A01P1/00GK103848843SQ201410100296
【公開(kāi)日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2014年3月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月18日
【發(fā)明者】宋寶安, 韓宇, 胡德禹, 薛偉, 萬(wàn)治華, 陳美航, 金林紅, 賀鳴, 陳卓, 李向陽(yáng) 申請(qǐng)人:貴州大學(xué)