利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其步驟如下：以哈茨木霉（Trichoderma?harzianum）FJAT-9040為菌種制作生產(chǎn)用液體菌種；以豬糞廢棄物為主要成份制備菌肥生產(chǎn)的固體培養(yǎng)基物，添加麩皮、麥粒、蔗糖和硫酸銨；調(diào)整含水體積比，混合后分裝于食用菌袋中；滅菌后，接種所制備的液體菌種，25-28℃恒溫培養(yǎng)發(fā)酵18-20天，結(jié)束后將其通風(fēng)干燥后拌勻，即得哈茨木霉菌肥。本發(fā)明利用農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物豬糞廢棄物為培養(yǎng)基主成份制備哈茨木霉菌肥，一方面可提高農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物資源化再利用效率；另一方面通過有機(jī)肥料與有益生防菌劑相結(jié)合，達(dá)到防病促長(zhǎng)作用，本發(fā)明制備過程簡(jiǎn)單易行，培養(yǎng)的哈茨木霉生物菌肥的菌量高、活性好，操作方便、成本低。
【專利說明】利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]隨著社會(huì)及經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，化學(xué)農(nóng)藥帶來生態(tài)環(huán)境和人類健康等弊端越來越突出，如化學(xué)農(nóng)藥的殘留；土壤結(jié)構(gòu)、肥力及植物生態(tài)系統(tǒng)的失衡；植物病菌耐藥性的產(chǎn)生等。因此，科研人員開始將目光轉(zhuǎn)向于研發(fā)生物制劑，目前有很多生物制劑已商品化，如菲律賓的淡紫擬青霉商品，Biocon ;江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院的解淀粉芽胞桿菌商品，葉斑寧等。由于很多生物制劑都是液體性制劑，在運(yùn)輸及其藥效的保質(zhì)期上都會(huì)受到較大影響。在這種情況下，一些廠家及科研學(xué)者開始研發(fā)具有肥效和生防作用的固體生物制劑，以減少化肥和農(nóng)藥的使用，達(dá)到節(jié)約成本，降低土壤污染，保護(hù)環(huán)境的目的。
[0003]作物枯萎病是由尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)引起的一種典型毀滅性土傳病害，可造成嚴(yán)重的連作障礙，對(duì)重要農(nóng)作物的生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。病原菌從根部為害植物，引起維管束病害，造成植株枯死，在植株的全生育期均可發(fā)生。土傳性病害在3~4年內(nèi)就會(huì)由零星點(diǎn)片發(fā)展為普遍流行性病害。作物枯萎病一般導(dǎo)致減產(chǎn)20%~30%，嚴(yán)重田塊可達(dá)50%~80%，甚至絕產(chǎn)，已成為限制著我國(guó)作物生產(chǎn)發(fā)展重要因素。一直以來，化學(xué)防治是控制土傳病害的主要手段，但會(huì)帶來病原的耐藥性，及環(huán)境污染等問題，越來越多的學(xué)者認(rèn)識(shí)到控制枯萎病應(yīng)采用以農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展為宗旨的生物防治的可持續(xù)治理系統(tǒng)。真菌是作物枯萎病重要的生物防治之一。其中木霉菌是一種具有重要價(jià)值的生防菌株。
[0004]木霉菌對(duì)環(huán)境具有很強(qiáng)的適應(yīng)性，殺菌具有廣譜性，是一種理想的、難得的生防資源。據(jù)不完全資料統(tǒng)計(jì)，木霉菌至少對(duì)18個(gè)屬29個(gè)種病原菌在體外或體內(nèi)表現(xiàn)有拮抗作用，尤其對(duì)土傳病原真菌具有顯著的拮抗作用。目前，木霉的防治應(yīng)用多采用孢子菌劑，要獲得產(chǎn)量高，而且質(zhì)量好的孢子菌劑，發(fā)酵是關(guān)鍵，其中固體發(fā)酵被公認(rèn)為是獲得真菌孢子的最好方法之一。在固體發(fā)酵中，由于菌體在濕度較低的條件下生長(zhǎng)，因而通常得到的孢子對(duì)干旱條件更具抗性，而且在干燥的環(huán)境中更穩(wěn)定。固體發(fā)酵培養(yǎng)基主要以稻草，麩皮，秸桿等農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物為主，但來源有限，且成本較高，因此尋找一種新的農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物作為固體發(fā)酵的主要培養(yǎng)基是必需的。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，在于提供一種利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，能夠解決現(xiàn)有的肥料與有益生防菌劑分開，或者單純地將有益生防菌劑與肥料混合，從而帶來的生防作用及肥料效果不佳和環(huán)境污染等的一系列問題。同時(shí)，也可提高農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物資源化再利用效率，減少環(huán)境污染。
[0006]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的:
[0007]—種利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，所述方法步驟如下:
[0008] (I)生產(chǎn)用液體菌種的制備:以哈茨木霉(Trichoderma harzianum) FJAT-9040為菌種，以馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基為液體菌種用培養(yǎng)基，制備生產(chǎn)用液體菌種；
[0009](2)哈茨木霉固體菌肥的制備:以豬糞廢棄物為主要成份制備菌肥生產(chǎn)的固體培養(yǎng)基物，與麩皮、麥?；旌虾螅盅b于食用菌袋中，滅菌后，接種步驟(1)所制備的液體菌種，25-28°C恒溫培養(yǎng)發(fā)酵18-20天，制備哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其拌勻，即得哈茨木霉菌肥；
[0010]所述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040,于 2012 年 5 月 14 日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6109。
[0011]進(jìn)一步地，所述步驟(1)中生產(chǎn)用液體菌種制作步驟為:
[0012]步驟A.菌種的活化:配置PDA培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻至45°C倒于滅菌平板中，備用；取-70°C保存的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) FJAT-9040菌株于PDA培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，28~30°C恒溫培養(yǎng)3~4天；
[0013]步驟B.挑取步驟A中菌絲接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28~30°C，170~200rpm搖床培養(yǎng)4~5天，即為生產(chǎn)用液體菌種。
[0014]進(jìn)一步地，所述步驟(2)中哈茨木霉菌肥的制備步驟為:
[0015]步驟C.以豬糞廢棄物為主要成份的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制:豬糞廢棄物與麩皮按重量比為9:1~5:5配制形成固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0016]步驟D.基礎(chǔ)培養(yǎng)基中麥粒、無機(jī)碳源和無機(jī)氮源的添加:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加麥粒作為固體培養(yǎng)基的疏松物質(zhì)，再添加蔗糖和硫酸銨，攪拌均勻后加水，調(diào)整含水體積比為30%~50%，轉(zhuǎn)入食用菌袋中，滅菌；
[0017]步驟F.哈茨木霉固體菌肥的培養(yǎng)與制備:往步驟D的培養(yǎng)基中接種步驟(1)中制備的液體菌種5~10體積份，28~30°C恒溫下發(fā)酵18-20天，即哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其通風(fēng)干燥后拌勻，即得哈茨木霉菌肥。
[0018]進(jìn)一步地，步驟C中豬糞廢棄物與麩皮的重量比為9:1-8:2。
[0019]進(jìn)一步地，步驟D中的麥粒需浸泡處理，浸泡時(shí)間大于12h，使麥粒充分吸水膨脹。
[0020]進(jìn)一步地，每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為30~50ml、蔗糖為2~4g、硫酸銨為I~3g。
[0021]進(jìn)一步地，每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為40ml、蔗糖為3g、硫酸銨為2g。
[0022]本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0023] 本發(fā)明的目的是提供一種以農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物豬糞廢棄物為培養(yǎng)基主成份發(fā)酵哈茨木霉，用食用菌袋培養(yǎng)法制備哈茨木霉菌肥的方法。一方面可解決農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物隨意丟棄帶來的環(huán)境污染和化學(xué)肥料的使用帶來的土壤結(jié)構(gòu)變化等問題；另一方面可解決現(xiàn)有的肥料與有益生防菌劑分開，或者單純地將有益生防菌劑與肥料混合，從而帶來的生防作用及肥料效果不佳，環(huán)境污染等的一系列問題。本發(fā)明制備過程簡(jiǎn)單易行，培養(yǎng)的哈茨木霉生物菌肥的菌量高、活性好，操作方便、成本低。固體發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)直接以豬糞廢棄物作為主要培養(yǎng)基成份，在此基礎(chǔ)上培養(yǎng)具有生防作用的微生物，因此本發(fā)明的菌肥將生防和肥用有機(jī)地結(jié)合起來，而且對(duì)環(huán)境無污染，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)境保護(hù)效益。
【【專利附圖】

【附圖說明】】[0024]下面參照附圖結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0025]圖1為本發(fā)明不同處理組的茄子盆栽苗枯萎病防治情況。
[0026]圖2為本發(fā)明不同處理組的苦瓜盆栽苗枯萎病防治情況。
【【具體實(shí)施方式】】
[0027]本發(fā)明涉及一種利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，所述方法步驟如下:
[0028](I)生產(chǎn)用液體菌種的制備:以哈茨木霉(Trichoderma harzianum) FJAT-9040為菌種，以馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基為液體菌種用培養(yǎng)基，制備生產(chǎn)用液體菌種；
[0029](2)哈茨木霉固體菌肥的制備:以豬糞廢棄物為主要成份制備菌肥生產(chǎn)的固體培養(yǎng)基物，與麩皮、麥?；旌虾螅盅b于食用菌袋中，滅菌后，接種步驟(1)所制備的液體菌種，25-28°C恒溫培養(yǎng)發(fā)酵18-20天，制備哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其拌勻，即得哈茨木霉菌肥；
[0030]所述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040,于 2012 年 5 月 14 日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6109。
[0031]所述步驟(1)中生產(chǎn)用液體菌種制作步驟為:
[0032]步驟A.菌種的活化:配置PDA培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻至45°C倒于滅菌平板中，備用；取-70°C保存的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) FJAT-9040菌株于PDA培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，28~30°C恒溫培養(yǎng)3~4天；
[0033]步驟B.挑取步驟A中菌絲接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28~30°C，170~200rpm搖床培養(yǎng)4~5天，即為生產(chǎn)用液體菌種。
[0034]所述步驟(2)中哈茨木霉菌肥的制備步驟為:
[0035]步驟C.以豬糞廢棄物為主要成份的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制:豬糞廢棄物與麩皮按重量比為9:1~5:5配制形成固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0036]步驟D.基礎(chǔ)培養(yǎng)基中麥粒、無機(jī)碳源和無機(jī)氮源的添加:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加麥粒作為固體培養(yǎng)基的疏松物質(zhì)，再添加蔗糖和硫酸銨，攪拌均勻后加水，調(diào)整含水體積比為30%~50%，轉(zhuǎn)入食用菌袋中，滅菌；
[0037]步驟F.哈茨木霉固體菌肥的培養(yǎng)與制備:往步驟D的培養(yǎng)基中接種步驟(1)中制備的液體菌種5~10體積份，28~30°C恒溫下發(fā)酵18-20天，即哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其通風(fēng)干燥后拌勻，即得哈茨木霉菌肥。
[0038]較優(yōu)的，步驟C中豬糞廢棄物與麩皮的重量比為9:1-8:2。
[0039]步驟D中的麥粒需浸泡處理，浸泡時(shí)間大于12h，使麥粒充分吸水膨脹。
[0040]每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為30~50ml、蔗糖為2~4g、硫酸銨為I~3g。
[0041]較優(yōu)的，每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為40ml、蔗糖為3g、硫酸銨為2g。
[0042]所述PDA培養(yǎng)基的制備:馬鈴薯去皮后稱取200g，切成IcmX Icm的小塊，煮沸30min,八層紗布過濾后加入20g鹿糖、17~20g瓊脂,pH自然,充分溶解后定容于1000ml,按瓶裝量200ml/250ml分裝于三角瓶中滅菌；
[0043] 所述馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基(PDB培養(yǎng)基)的制備:馬鈴薯去皮后稱取200g，切成IcmX Icm的小塊,煮沸30min,八層紗布過濾后加入20g鹿糖，pH自然,充分溶解后定容于1000ml，按瓶裝量100ml/250ml分裝于三角瓶中滅菌。
[0044]上述豬糞廢棄物來源于零污染養(yǎng)豬技術(shù)的微生物發(fā)酵床養(yǎng)豬墊料，該技術(shù)是以發(fā)酵床為載體，把微生物菌種、谷殼、鋸末、木屑等按一定比例混合，作為豬舍墊料，鋪設(shè)于豬舍中。通過微生物作用，將豬糞尿中的有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行充分分解、轉(zhuǎn)化、發(fā)酵、最終除去異味并達(dá)到無害化，是一種零污染、微生物發(fā)酵床的新型環(huán)保技術(shù)。
[0045]下面結(jié)合具體的實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0046]實(shí)施例1
[0047](I)生產(chǎn)用液體菌種的制備:
[0048]A.菌種的活化:配置馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻至45-50°C時(shí)倒于滅菌平板中，備用。取_70°C保存的哈茨木霉FJAT-9040菌株于PDA平板上劃線培養(yǎng)，28~30°C恒溫培養(yǎng)3~4天；
[0049]所述PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯去皮后稱取200g，切成IcmX Icm的小塊，煮沸30min，八層紗布過濾后加入20g蔗糖、17~20g瓊脂，pH自然，充分溶解后定容于1000ml，按瓶裝量200ml/250ml分裝于三角瓶中滅菌；
[0050]B.挑取步驟A中菌絲接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28~30°C，170~200rpm搖床培養(yǎng)4~5天；
[0051]所述PDB培養(yǎng)基:馬鈴薯去皮后稱取200g，切成IcmX Icm的小塊，煮沸30min，八層紗布過濾后加入20g蔗糖，pH自然，充分溶解后定容于1000ml，按瓶裝量100ml/250ml分裝于三角瓶中滅菌。
[0052](2)哈茨木霉固體菌肥的制備:
[0053]C.按90體積份的豬糞廢棄物與10體積份的麩皮進(jìn)行混合作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，每100mL的基礎(chǔ)培養(yǎng)基輔助添加40ml的麥粒，及2g的硫酸銨和3g的蔗糖，攪拌均勻后加水，調(diào)整含水體積比為50%，轉(zhuǎn)入食用菌袋中，培養(yǎng)基中心插入鉆有孔的50ml離心管，滅菌；
[0054]所述豬糞廢棄物以發(fā)酵床為載體，按體積比谷殼50%、鋸末50%、米糠2公斤/m3、微生物菌種短短芽胞桿菌1:1000的比例稀釋均勻噴灑并拌勻，控制水份45-50%，作為豬舍墊料，鋪設(shè)于豬舍中。通過微生物作用，將豬糞尿中的有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行充分分解、轉(zhuǎn)化、發(fā)酵、最終除去異味并達(dá)到無害化。
[0055]所述麥粒需浸泡處理，浸泡時(shí)間大于12小時(shí)，使麥粒充分吸水膨脹。
[0056]D.培養(yǎng)基冷卻后，接種7份體積步驟(1)制備的種子液，28~30°C恒溫下發(fā)酵18-20天，即可結(jié)束發(fā)酵，將發(fā)酵產(chǎn)物通風(fēng)干燥并攪拌均勻，即得到哈茨木霉菌肥。
[0057]該哈茨木霉的固體發(fā)酵產(chǎn)物，孢子含量可達(dá)IO8個(gè)/g。
[0058]實(shí)施例2
[0059](1)同實(shí)施例1步驟(1)
[0060](2)利用實(shí)施例1相同的豬糞廢棄物為主要培養(yǎng)基質(zhì)生產(chǎn)哈茨木霉菌肥:
[0061]C.按80份體積的豬糞廢棄物與20份體積的麩皮進(jìn)行混合作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，每100mL的基礎(chǔ)培養(yǎng)基輔助添加40ml的麥粒,及2g的硫酸銨和3g的鹿糖,攪拌均勻后加入適量的水，調(diào)整含水體積比為30%，轉(zhuǎn)入食用菌袋中，滅菌；
[0062]所述麥粒需浸泡處理，浸泡時(shí)間大于12小時(shí)，使麥粒充分吸水膨脹。
[0063]D.培養(yǎng)基冷卻后，接種5份體積步驟(1)制備的種子液，28~30°C恒溫下發(fā)酵18-20天，即可結(jié)束發(fā)酵，將發(fā)酵產(chǎn)物攪拌均勻，即得到哈茨木霉菌肥。
[0064]該哈茨木霉的固體發(fā)酵產(chǎn)物，孢子含量可達(dá)IO8個(gè)/g。
[0065]以下是利用本發(fā)明制備的哈茨木霉菌肥的防治實(shí)驗(yàn)
[0066]試驗(yàn)一、茄子和苦瓜盆栽苗的生物防治
[0067]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0068]苦瓜幼苗和茄子幼苗若干，致病性病原菌為苦瓜枯萎病原菌FJAT-3015、茄子枯萎病原菌 FJAT-30545。
[0069]2.方法
[0070]2.1哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定
[0071]2.1.1哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗的肥效實(shí)驗(yàn)
[0072]采用食用菌棒培養(yǎng)法生產(chǎn)出的哈茨木霉生物菌肥，與基質(zhì)土分別按一定體積比進(jìn)行混合后，用于種植茄子苗，設(shè)以下7個(gè)處理組:
[0073]處理組I——基質(zhì)土中含10%哈茨木霉生物菌肥
[0074]處理組2——基質(zhì)土中含20%哈茨木霉生物菌肥
[0075]處理組3——基質(zhì)土中含30%哈茨木霉生物菌肥
[0076]處理組4——基質(zhì)土中含40%哈茨木霉生物菌肥
[0077]處理組5——基質(zhì)土中含50%哈茨木霉生物菌肥
[0078]處理組6——使用100%哈茨木霉生物菌肥
[0079]處理組7——純基質(zhì)土
[0080]以上每組處理30株茄子幼苗，定期觀察茄子植株的生長(zhǎng)情況，篩選出最適茄子苗生長(zhǎng)的哈茨木霉生物菌肥含量。
[0081]2.1.2哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗枯萎病的防治效果
[0082]茄子枯萎病原菌FJAT-30545采用搖瓶發(fā)酵，并將發(fā)酵液稀釋成106cfu/mL，備用。實(shí)驗(yàn)設(shè)以下5個(gè)處理組:
[0083]處理組I—茄子苗采用含10%哈茨木霉生物菌肥基質(zhì)土種植，同時(shí)澆灌接種枯萎病原菌；
[0084]處理組2—爺子苗采用含10%哈茨木霉生物菌肥基質(zhì)土種植，于7天后傷根澆灌接種枯萎病原菌；
[0085]處理組3—爺子苗采用含10%哈茨木霉生物菌肥基質(zhì)土種植，于7天后傷根澆灌清水；
[0086]處理組4——爺子苗純基質(zhì)土種植，于7天后傷根澆灌接種枯萎病原菌，作為陽性對(duì)照；
[0087]處理組5——茄子苗采用純基質(zhì)土中種植，于7天后傷根澆灌清水，作為陰性對(duì)
昭.>、、、?
[0088]以上每組處理30株茄子幼苗，各處理的其他栽培管理方式均一致，接菌后觀察茄子植株生長(zhǎng)和發(fā)病情況，第40天時(shí)調(diào)查其發(fā)病率，計(jì)算防治效果。
[0089]防治效果(％)=(陽性對(duì)照組發(fā)病率一處理組發(fā)病率)/陽性對(duì)照組發(fā)病率X 100%
[0090]2.2哈茨木霉生物菌肥對(duì)苦瓜盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定[0091 ]2.2.1哈茨木霉生物菌肥對(duì)苦瓜盆栽苗的肥效實(shí)驗(yàn)[0092]采用食用菌棒培養(yǎng)法生產(chǎn)出的哈茨木霉生物菌肥，與基質(zhì)土分別按一定體積比進(jìn)行混合后，用于種植苦瓜苗，設(shè)以下7個(gè)處理組:
[0093]處理組I——基質(zhì)土中含5%哈茨木霉生物菌肥
[0094]處理組2——基質(zhì)土中含10%哈茨木霉生物菌肥
[0095]處理組3——基質(zhì)土中含15%哈茨木霉生物菌肥
[0096]處理組4——基質(zhì)土中含20%哈茨木霉生物菌肥
[0097]處理組5——基質(zhì)土中含25%哈茨木霉生物菌肥
[0098]處理組6——使用100%哈茨木霉生物菌肥
[0099]處理組7——純基質(zhì)土[0100]以上每組處理30株苦瓜幼苗，定期觀察苦瓜植株的生長(zhǎng)情況，篩選出最適苦瓜生長(zhǎng)的哈茨木霉生物菌肥含量。
[0101]2.2.2哈茨木霉生物菌肥對(duì)苦瓜盆栽苗枯萎病的防治效果
[0102]苦瓜枯萎病原菌FJAT-3015采用搖瓶發(fā)酵，并將發(fā)酵液稀釋成106cfu/mL，備用。實(shí)驗(yàn)設(shè)以下5個(gè)處理組:
[0103]處理組I——苦瓜苗采用含5%哈茨木霉生物菌肥基質(zhì)土種植，同時(shí)澆灌接種枯萎病原菌；
[0104]處理組2—苦瓜苗采用含5%哈茨木霉生物菌肥基質(zhì)土種植，于7天后傷根澆灌接種枯萎病原菌；
[0105]處理組3—苦瓜苗采用含5%哈茨木霉生物菌肥基質(zhì)土種植，于7天后傷根澆灌清水；
[0106]處理組4——苦瓜苗采用純基質(zhì)土種植，于7天后傷根澆灌接種枯萎病原菌，作為陽性對(duì)照；
[0107]處理組5—苦瓜苗采用純基質(zhì)土中種植，于7天后傷根澆灌清水，作為陽性對(duì)
昭.>、、、9
[0108]以上每組處理30株苦瓜幼苗，各處理的其他栽培管理方式均一致，接菌后觀察苦瓜植株的生長(zhǎng)和發(fā)病情況，第40天時(shí)調(diào)查其發(fā)病率，計(jì)算防治效果。
[0109]防治效果(％)=(陽性對(duì)照組發(fā)病率一處理組發(fā)病率)/對(duì)照組發(fā)病率X 100%
[0110]3.結(jié)果與分析
[0111]3.1哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗枯萎病防效的測(cè)定
[0112]3.1.1哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗的肥效實(shí)驗(yàn)
[0113]茄子苗栽培40天后，不同處理間的植株生長(zhǎng)情況見表1所示。不同含量的哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗的株高，葉長(zhǎng)，葉寬均有不同程度的影響。從株高方面，含10%哈茨木霉生物菌肥(處理組I)株高為8.87cm，其他處理組株高均低于8.87cm,介于5.00-6.12cm之間；從葉長(zhǎng)方面，處理組I葉長(zhǎng)為16.56cm，其他處理組葉長(zhǎng)均低于16.56cm，介于8.31-13.62cm之間；葉寬方面，處理組I葉寬為9.81cm，其他處理組葉寬均低于9.81cm，介于4.31-7.62cm之間。不論是從株高，葉長(zhǎng)還是葉寬，處理組I與其他處理組間均存在顯著差異(P〈0.05)，說明含10%哈茨木霉生物菌肥對(duì)茄子盆栽苗生長(zhǎng)促進(jìn)最大。
[0114]表1不同處理茄子盆栽苗的生長(zhǎng)指標(biāo)
[0115]
【權(quán)利要求】
1.一種利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于:所述方法步驟如下: (1)生產(chǎn)用液體菌種的制備:以哈茨木霉(Trichodermaharzianum) FJAT-9040為菌種，以馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基為液體菌種用培養(yǎng)基，制備生產(chǎn)用液體菌種； (2)哈茨木霉固體菌肥的制備:以豬糞廢棄物為主要成份制備菌肥生產(chǎn)的固體培養(yǎng)基物，與麩皮、麥?；旌虾?，分裝于食用菌袋中，滅菌后，接種步驟(1)所制備的液體菌種，25-28°C恒溫培養(yǎng)發(fā)酵18-20天，制備哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其拌勻，即得哈茨木霉菌肥； 所述哈茨木霉(Trichoderma harzianum)FJAT-9040,于2012年5月14日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為 CGMCC N0.6109。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于:所述步驟(1)中生產(chǎn)用液體菌種制作步驟為: 步驟A.菌種的活化:配置PDA培養(yǎng)基，121°C滅菌20min，冷卻至45°C倒于滅菌平板中，備用；取_701:保存的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)FJAT_9040菌株于PDA培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，28~30°C恒溫培養(yǎng)3~4天； 步驟B.挑取步驟A中菌絲接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，28~30°C，170~200rpm搖床培養(yǎng)4~5天，即為生產(chǎn)用液體菌種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉固體菌肥的制備的方法，其特征在于:所述步驟(2)中哈茨木霉菌肥的制備步驟為: 步驟C.以豬糞廢棄物為主要成份的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制:豬糞廢棄物與麩皮按重量比為9:1~5:5配制形成固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基； 步驟D.基礎(chǔ)培養(yǎng)基中麥粒、無機(jī)碳源和無機(jī)氮源的添加:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加麥粒作為固體培養(yǎng)基的疏松物質(zhì)，再添加蔗糖和硫酸銨，攪拌均勻后加水，調(diào)整含水體積比為30%~50%，轉(zhuǎn)入食用菌袋中，滅菌； 步驟F.哈茨木霉固體菌肥的培養(yǎng)與制備:往步驟D的培養(yǎng)基中接種步驟(1)中制備的液體菌種5~10體積份，28~30°C恒溫下發(fā)酵18-20天，即哈茨木霉固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其通風(fēng)干燥后拌勻，即得哈茨木霉菌肥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于:步驟C中豬糞廢棄物與麩皮的重量比為9:1-8:2。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于:步驟D中的麥粒需浸泡處理，浸泡時(shí)間大于12h，使麥粒充分吸水膨脹。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于:每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為30~50ml、蔗糖為2~4g、硫酸銨為I~3g。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用豬糞廢棄物生產(chǎn)哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于:每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為40ml、蔗糖為3g、硫酸銨為2g。
【文檔編號(hào)】C05F15/00GK103910545SQ201410100137
【公開日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2014年3月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月18日
【發(fā)明者】劉波, 肖榮鳳, 曾慶才, 朱育菁, 陳燕萍 申請(qǐng)人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所