一種獲取牡蠣屬間遠(yuǎn)緣雜種的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種獲取牡蠣屬間遠(yuǎn)緣雜種的方法。本發(fā)明首先采集不同屬間親本，之后，對(duì)鑒別好的每一個(gè)物種，做好標(biāo)記，進(jìn)行同步促熟。當(dāng)親本性腺成熟后，解剖精卵，嚴(yán)格隔離，進(jìn)行屬間雜交配對(duì)，得到兩個(gè)親本的自交組及雜交組子代。經(jīng)過(guò)子代培育，即可獲得可存活屬間雜種。同時(shí)，采用分子及細(xì)胞學(xué)手段進(jìn)行遺傳鑒定，確定雜種類型。本發(fā)明首次嘗試了牡蠣屬間雜交，獲得了存活的屬間雜種，為牡蠣遺傳分化、生殖隔離及其物種形成分析獲得了難得稀缺材料，也為牡蠣的遺傳育種開辟了一條新的道路。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便、可行性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】一種獲取牡蠣屬間遠(yuǎn)緣雜種的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于現(xiàn)代海洋農(nóng)業(yè)中貝類遺傳育種【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種獲取牡蠣屬間遠(yuǎn)緣雜種的方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]屬間雜交是同科內(nèi)不同屬內(nèi)物種間的雜交，它可以顯著的擴(kuò)大動(dòng)植物的基因庫(kù)，促進(jìn)種間交流，引入異種有利基因，創(chuàng)造出前所未有的變異類型，甚至?xí)铣尚碌奈锓N(樓允東，1999)。
[0003]對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物而言，屬間雜交主要集中在魚類育種上，對(duì)貝類的研究相對(duì)較少。其中，相對(duì)比較成功的是櫛孔扇貝與蝦夷扇貝遠(yuǎn)緣雜交(楊愛國(guó)等，2003)，得到了具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)的雜交組，取得了較為理想的經(jīng)濟(jì)效益。對(duì)于牡蠣而言，雖然在我國(guó)發(fā)現(xiàn)的牡販科有5個(gè)，即巨販屬(Crassostrea)、牡販屬(Ostrea)、小販屬(Saccostrea)、齒販屬(Dendostrea)、舌骨牡販屬(Parahyotissa)等(夏建軍,2008),但尚未見到屬間雜交報(bào)道，相對(duì)報(bào)道較多的是種間雜交研究。早在1882年，Bouchon-Brandely就開展了葡萄牙牡販(Ostreaangulata)與歐洲牡販(0.edulis)的種間雜交(Bouchon-Brandely, 1882)。在 1950年,Davis研究了太平洋牡販0.gigasX美洲牡販0.virginica及美洲牡販0.virginicaX奧林匹亞牡販0.1urida的種間雜交。
[0004]值得一提的是，美國(guó)學(xué)者Gaffney&Allen在1993年對(duì)巨蠣屬牡蠣的種間雜交進(jìn)行了總結(jié)，提出，在此之前的牡蠣種間雜交由于尚未進(jìn)行遺傳鑒定，只通過(guò)表型性狀觀測(cè)，認(rèn)為雜交成功，其可信度高度令人懷疑。更為重要的是，他們提出巨蠣屬內(nèi)種間雜種是不可存活的，這就造成了大約在此之后的15年間內(nèi)幾乎沒有牡蠣種間雜交研究報(bào)道。中國(guó)科學(xué)院海洋研究所、中科院南海海洋研究所及中國(guó)海洋大學(xué)在國(guó)家重點(diǎn)聯(lián)合基金、國(guó)家面上基金、國(guó)家973等項(xiàng)目資助下，完成了`巨蠣屬牡蠣的種間雜交，獲得了真正的種間雜種，解析了巨蠣屬牡蠣種間雜交機(jī)理(許飛，2009 ;張躍環(huán)，2012 ；Xuetal,2009 ；Zhangetal, 2012 ；Huoetal，2003)。那么，在種間雜交基礎(chǔ)上，牡蠣科內(nèi)屬間能否雜交，能否獲得遠(yuǎn)緣優(yōu)勢(shì)，是否可以獲得存活子代，從而為牡蠣物種形成及遺傳進(jìn)化提供珍貴中間材料是本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)所在。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005]為了嘗試牡蠣屬間遠(yuǎn)緣雜交的可行性，獲取牡蠣遠(yuǎn)緣雜種中間材料，開辟一項(xiàng)牡蠣育種新技術(shù)，本發(fā)明提供了一種獲得牡蠣屬間雜種的遠(yuǎn)緣雜交方法。
[0006]本發(fā)明的獲得牡蠣屬間雜種的遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0007]a、親本采集:采集牡蠣科不同屬內(nèi)的種類作為親本；由于牡蠣貝殼形態(tài)隨著環(huán)境變化很大，很難從其外觀上區(qū)分出是哪一種牡蠣，故在表型觀察基礎(chǔ)上，還要借助于分子手段進(jìn)行物種識(shí)別；
[0008]b、同步促熟:對(duì)每個(gè)種做好標(biāo)記，在室內(nèi)進(jìn)行性腺促熟，確保性腺成熟的同步性；針對(duì)于每一種牡蠣的生態(tài)習(xí)性，進(jìn)行溫度、鹽度等生態(tài)因子調(diào)控，確保性腺成熟的同步性。
[0009]C、剖取精卵:當(dāng)親本性腺成熟以后，解剖精卵，嚴(yán)格分離，進(jìn)行兩兩物種的屬間雜交配對(duì)，得到兩個(gè)親本的自交組及其正反交組子代；對(duì)使用的親本，要固定材料，進(jìn)行后續(xù)分析。由于牡蠣的屬間雜交經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)不同程度的配子生殖隔離障礙，針對(duì)于不同的配對(duì)組合，得到單向受精組或者是均不受精都正常。
[0010]d、子代培育:當(dāng)獲得了自交組及雜交組以后，進(jìn)行子代培育，在幼蟲培育階段，屬間雜交D形幼蟲可能會(huì)出現(xiàn)延遲攝食狀況，經(jīng)過(guò)3-7d培育，即可正常攝食，經(jīng)過(guò)幼蟲培育獲得雜交稚貝，稚貝經(jīng)過(guò)中間育成及養(yǎng)成獲得屬間雜種；
[0011]e、遺傳鑒定:因?yàn)樵谑芫?、幼蟲培育過(guò)程中，很容易出現(xiàn)污染現(xiàn)象，而且還可能伴隨著天然雄核發(fā)育、雌核發(fā)育、多倍體現(xiàn)象的發(fā)生。所以很難保證雜種是否為雜交子代。在受精和幼蟲培育過(guò)程中，采用分子標(biāo)記確認(rèn)屬間雜種是雜交子代還是發(fā)生了雌核或者雄核發(fā)育現(xiàn)象，并利用流式細(xì)胞儀對(duì)其進(jìn)行倍性檢測(cè)，是否有天然多倍體現(xiàn)象發(fā)生
[0012]與本發(fā)明相比，楊愛國(guó)等在2003年公開了授權(quán)
【發(fā)明者】張躍環(huán), 蘇家齊, 肖述, 喻子牛 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所