地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)CTBS是嚙齒類動(dòng)物精子上特有的精卵結(jié)合受體，其抑制劑地喹氯銨可以有效地抑制小鼠的體外受精，其半抑制常數(shù)＜100nM，對(duì)人體的毒性作用甚微；經(jīng)研究還發(fā)現(xiàn)CTBS在嚙齒類動(dòng)物的精子上表達(dá)，且CTBS抗體可以抑制小鼠的體外授精，而在人的精子上并不表達(dá)這一蛋白。本發(fā)明采用地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物進(jìn)行使用，能有效的控制嚙齒類動(dòng)物的精卵結(jié)合，達(dá)到控制鼠類的種群數(shù)量，實(shí)現(xiàn)無需農(nóng)藥即可控制鼠害目的，且其天敵食用該藥物卻不會(huì)產(chǎn)生危害。
【專利說明】地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種嚙齒類的生育控制藥物，特別涉及一種地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]地喹氯銨(Dequaliniumchloride, CAS#522_51_0)，作為一種 PKC 抑制劑作為抗癌藥物進(jìn)行使用，其IC50為7-18 μ M，同時(shí)它也是一種選擇性蜂毒明肽敏感型鉀離子通道阻斷劑，其IC50為1.1μΜ[1’2’3’4]。最近，發(fā)現(xiàn)地喹氯銨還可在納摩爾水平上抑制微生物來源的幾丁質(zhì)水解酶的活性[5]。地喹氯銨對(duì)人體的毒性甚微，不影響人類的生殖，對(duì)眼和皮膚有刺激作用。對(duì)小鼠的致死量為:口服150-1000mg / kg體重，皮下注射70mg / kg體重，靜脈注射1.9mg / kg體重；對(duì)兔子和狗的口服致死量為500mg / kg體重(MSDS)。
[0003]而二 -N-乙酰殼二糖酶，即D1-N-acetylchitobiase (簡(jiǎn)稱CTBS)是幾丁質(zhì)水解酶的一種，在哺乳動(dòng)物中，只在嚙齒類和人類體內(nèi)的肝臟有表達(dá)[6’7’8]。
[0004]物種的生殖隔離是一種普遍的自然現(xiàn)象，卵子透明帶上的碳水化合物與精子上蛋白質(zhì)的相互作用是其中的機(jī)制之一。有報(bào)道表明，路易斯寡糖X(即Lewis X)能結(jié)合到小鼠精子，并可特異地抑制小鼠的體外受精，提示其精子上識(shí)別Lewis X的蛋白可能參與了小鼠的生育隔離[9]，但僅是一種猜測(cè)。
[0005]鼠害是指鼠類對(duì)農(nóng) 業(yè)等生產(chǎn)造成的危害。鼠類屬哺乳綱(Mam-malia)嚙齒目(Rodentia)動(dòng)物，共有1600多種。鼠類繁殖次數(shù)多，孕期短，產(chǎn)仔率高，性成熟快，數(shù)量能在短期內(nèi)急劇增加；它的適應(yīng)性很強(qiáng)，除南極大陸外，在世界各地的地面、地下、樹上、水中都能生存，不論平原、高山、森林、草原以至沙漠地區(qū)都有其蹤跡，常對(duì)農(nóng)業(yè)等生產(chǎn)釀成巨大災(zāi)害。
[0006]因此急需提供一種能控制鼠類生育的藥物，尤其是抑制鼠類的精卵結(jié)合的藥物，并且該藥物能在野外抑制鼠害且其天敵食用無害，無需采用農(nóng)藥對(duì)鼠害進(jìn)行抑制。
[0007]本發(fā)明參考文獻(xiàn)如下:
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0019]本發(fā)明的目的在于提供一種能控制鼠類生育的藥物的應(yīng)用，尤其是提供一種能抑制鼠類的精卵結(jié)合的藥物地喹氯銨的應(yīng)用，該藥物可用于控制鼠類的種群數(shù)量，從而達(dá)到無需采用農(nóng)藥即可控制鼠害的效果，并且鼠類的天敵食用該藥物無害。
[0020]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0021]地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用，用于控制鼠類的種群數(shù)量，從而達(dá)到控制鼠害的目的。
[0022]進(jìn)一步的，所述鼠類的生育控制為采用抑制劑地喹氯銨抑制鼠類的精卵結(jié)合。
[0023]進(jìn)一步的，所述鼠類的精卵結(jié)合中精子上特異性表達(dá)的受體蛋白為二 -N-乙酰殼二糖酶，即D1-N-acetylchitobiase,簡(jiǎn)稱為CTBS ;經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),所述地喹氯銨是所述鼠類的精卵結(jié)合中精子上特異性表達(dá)的受體蛋白CTBS抑制劑，CTBS是鼠類的精卵結(jié)合中必不可少的蛋白，因此將地喹氯銨做為鼠類特異的生育控制藥物應(yīng)用。
[0024]我們經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)CTBS是嚙齒類動(dòng)物精子上特有的精卵結(jié)合受體，其抑制劑地喹氯銨可以有效地抑制小鼠的體外受精，對(duì)人體的毒性作用甚微。
[0025]我們經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)CTBS僅在嚙齒類動(dòng)物的精子上表達(dá)，并且CTBS抗體可以抑制小鼠的體外授精，而在人的精子上并不表達(dá)這一蛋白。
[0026]本發(fā)明所述抑制劑地喹氯銨與CTBS結(jié)合的親和力強(qiáng)，抑制鼠類的精卵結(jié)合的活性高，實(shí)驗(yàn)表明其抑制 精卵結(jié)合的半抑制常數(shù)< IOOnM ;進(jìn)一步的，其半抑制常數(shù)是50nM，因此，可以將地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物進(jìn)行使用，并且地喹氯銨可以抑制小鼠的體外受精，所以地喹氯銨可用于控制鼠類的種群數(shù)量，從而達(dá)到控制鼠害的目的。
[0027]本發(fā)明采用地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物進(jìn)行使用，能有效的控制嚙齒類動(dòng)物的精卵結(jié)合，達(dá)到控制鼠類的種群數(shù)量，實(shí)現(xiàn)無需農(nóng)藥即可控制鼠害目的，且其天敵食用該藥物卻不會(huì)產(chǎn)生危害。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1為地喹氯銨對(duì)小鼠體外受精的抑制圖。
[0029]圖2A為L(zhǎng)ewis X受體的鑒定思路圖。
[0030]圖2B為利用Lewis X探針找到的小鼠精子蛋白圖。
[0031]圖2C為蛋白的質(zhì)譜分析圖譜。
[0032]圖3為CTBS的抗體抑制Lewis X結(jié)合到小鼠精子的圖片。
[0033]圖4為L(zhǎng)ewis X在小鼠精子上的結(jié)合位置與CTBS在小鼠精子的定位結(jié)果圖片。
[0034]圖5A為重組的人源CTBS與小鼠卵子透明帶發(fā)生相互作用的示意圖。
[0035]圖5B為重組的人源CTBS與小鼠卵子透明帶發(fā)生相互作用的明場(chǎng)和熒光照片。
[0036]圖5C為CTBS抗體的乳膠顆粒富集到的RFP或RFP-CTBS蛋白免疫印跡分析。
[0037]圖6為CTBS抗體對(duì)小鼠精子頂體反應(yīng)的誘導(dǎo)效應(yīng)圖。
[0038]圖7為不同濃度的CTBS抗體抑制小鼠的體外受精圖。
[0039]圖8為小鼠、大鼠和人精子裂解液的蛋白印記分析圖。【具體實(shí)施方式】
[0040]以下由特定的具體實(shí)施例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，熟悉此技術(shù)的人士可由本說明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)及功效。
[0041]實(shí)施例1:地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用
[0042]CTBS不同濃度的每個(gè)劑量實(shí)驗(yàn)用小鼠卵>50個(gè)，重復(fù)3次，每個(gè)劑量總計(jì)用卵>150個(gè)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，其半抑制常數(shù)在50nM，表明地喹氯銨可以很好的抑制小鼠的體外受精。
[0043]實(shí)施例2:
[0044]我們經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CTBS在嚙齒類動(dòng)物的精子上表達(dá)，并且CTBS抗體可以抑制小鼠的體外授精，而在人的精子上并不表達(dá)這一蛋白。其實(shí)驗(yàn)方法如下:
[0045](一)小鼠精子上CTBS的發(fā)現(xiàn):
[0046]利用路易斯寡糖X(即Lewis X，簡(jiǎn)寫為L(zhǎng)eX)探針鑒定到了小鼠精子上的CTBS，并證明CTBS能結(jié)合到小鼠的卵子透明帶。
[0047](I)首先對(duì)Lewis X受體進(jìn)行鑒定,其鑒定流程如圖2A所示,包括能識(shí)別LewisX的類凝集素蛋白的鑒定流程和內(nèi)源性的含有Lewis X修飾的蛋白鑒定流程。其原理是將牛血清白蛋白(BSA)表面修飾Lewis X制成擬糖蛋白LeX-BSA，并將該擬糖蛋白進(jìn)一步修飾上紫 外交聯(lián)試劑[6-(生物素酰氨基)-2-(p-疊氮苯甲酰氨基)己酰氨基]乙基-1, 3 ' - 二硫代丙酸磺基琥拍酰亞胺酯(Sulfo-NHS-2-(6-[biotinamido]-2-(p_azido benzamido)-hexanoamido) ethyl-1, 3 1 -dithiopropionate,簡(jiǎn)稱 Sulfo-SBED)作為L(zhǎng)ewisX探針。該探針經(jīng)紫外交聯(lián)到小鼠精子后形成Lewi s X探針-受體復(fù)合物，利用能識(shí)別Lewis X的四棱蓮凝集素(Lotus tetragonolobus agglutinin,簡(jiǎn)稱LTA)樹脂來分離純化精子細(xì)胞裂解液中的Lewis X探針-受體復(fù)合物。由于小鼠精子內(nèi)可能含有內(nèi)源性LewisX修飾的蚩白，設(shè)置了內(nèi)源性的含有Lewis X修飾的蛋白鑒定流程作為對(duì)照來區(qū)分這類蚩白(對(duì)照組)。一般來說，兩個(gè)流程鑒定到的差異蛋白即有可能是Lewis X的受體蛋白。
[0048](2)利用Lewis X探針找到的小鼠精子上的蛋白:
[0049]利用Lewis X探針找到小鼠精子蛋白，如圖2B所示。將圖2B中的差異條帶1、2、
3、4取下，用于蛋白的質(zhì)譜鑒定，如圖2C所示的質(zhì)譜分析圖，經(jīng)分析，有可能與碳水化合物作用的蛋白身份如表1所示。
[0050]表1
[0051]
【權(quán)利要求】
1.地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述鼠類的生育控制為采用抑制劑地喹氯銨抑制鼠類的精卵結(jié)合。
3.如權(quán)利要求2所述的地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述鼠類的精卵結(jié)合中精子上特異性表達(dá)的受體蛋白為CTBS ;所述地喹氯銨是所述鼠類的精卵結(jié)合中精子上特異性表達(dá)的受體蛋白CTBS的抑制劑。
4.如權(quán)利要求3所述的地喹氯銨作為鼠類的生育控制藥物的應(yīng)用，其特征在于，所述抑制劑地喹氯銨抑制鼠類精卵結(jié)合的半抑制常數(shù)< ΙΟΟηΜ。
【文檔編號(hào)】A01N43/42GK103749457SQ201310739915
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】顧一驊, 徐文平, 施惠娟, 楊軍 申請(qǐng)人:上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所, 華東理工大學(xué)