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一種雜糧雜粕日糧酶制劑及其制備方法

文檔序號:229740閱讀:226來源:國知局
一種雜糧雜粕日糧酶制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種雜糧雜粕日糧酶制劑及其制備方法,屬于飼料酶制劑領(lǐng)域。所述雜糧雜粕日糧酶制劑由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑0.5-2份,木聚糖酶100-120份,蛋白酶10-15份,果膠酶10-15份,纖維素酶15-20份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物30-40份,中溫α-淀粉酶5-10份。其中地衣芽孢桿菌(Βacillus?licheniformis)β-10-25,保藏編號CCTCC?NO:M2013538。制備方法如下:地衣芽孢桿菌經(jīng)發(fā)酵后通過過濾、濃縮、干燥獲得的培養(yǎng)物與其他成分復(fù)配,所得復(fù)合酶能提高飼料轉(zhuǎn)化率,降低飼料成本,提高飼料酶的穩(wěn)定性。
【專利說明】一種雜糧雜粕日糧酶制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于酶制劑領(lǐng)域,具體涉及一種雜糧雜柏日糧酶制劑及其制造方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著近代酶技術(shù)及生物技術(shù)的發(fā)展,高效能生物活性物質(zhì)——酶制劑已能大規(guī)模地工業(yè)化生產(chǎn),并被應(yīng)用于飼料工業(yè)中,許多實(shí)驗(yàn)和實(shí)際應(yīng)用結(jié)果都表明,飼用酶制劑作為一種飼料添加劑能有效地提高飼料的利用率、促進(jìn)動物生長和防治動物疾病的發(fā)生,與抗生素和激素類物質(zhì)相比,具有卓越的安全性,引起了全球范圍內(nèi)飼料行業(yè)的高度重視。
[0003]飼料酶制劑是為了提高動物對飼料的消化、利用或改善動物體內(nèi)的代謝效能而加入飼料中的酶類物質(zhì)。目前可以在飼料中添加的酶制劑包括淀粉酶、α-半乳糖苷酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、麥芽糖酶、甘露聚糖酶、果膠酶、植酸酶、蛋白酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。由于飼料原料結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性,目前飼料工業(yè)生產(chǎn)中更多使用的是復(fù)合酶制劑。復(fù)合酶制劑是一種新型的飼料添加劑,在國外其應(yīng)用始于20世紀(jì)70年代,而我國的飼料工業(yè)在20世紀(jì)90年代才開展酶制劑的應(yīng)用。因此,加大對飼料復(fù)合劑的研究對于我國的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有非常重要的意義。
[0004]我國是飼料資源并不豐富的國家,大豆、魚粉、飼用玉米主要依靠進(jìn)口。隨著養(yǎng)殖業(yè)和飼料工業(yè)的持續(xù)發(fā)展,大宗飼料原料的供求矛盾將進(jìn)一步加劇,飼料原料價格不斷上漲,波動更加頻繁是必然趨勢,因此,今后雜糧雜柏型日糧將會更多的出現(xiàn)在市場上。但是雜糧雜柏中抗?fàn)I養(yǎng)因子多,尤其是非淀粉多糖含量較高,這些抗?fàn)I養(yǎng)因子不但自身難以被消化吸收利用,使腸道內(nèi)容物變得粘稠,而且會包裹大量的營養(yǎng)物質(zhì),影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收,造成動物消化不良,排粘糞,發(fā)育不良等。而單單胃動物本身不能分泌降解非淀粉多糖等物質(zhì)的酶,因此必須通過添加外源酶制劑來幫助降解這些抗?fàn)I養(yǎng)因子,從而提高飼料的利用率和動物的生產(chǎn)性能。
[0005]β -葡聚糖酶等酶制劑的使用,能有效的解決這個問題,但目前在生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)中的實(shí)際應(yīng)用的β_葡聚糖酶酶活力大多較低,且熱穩(wěn)定性差。此外,科學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了地衣芽孢桿菌具有促進(jìn)畜禽生長,降低料重比;增加腸道有益菌數(shù)量,改善畜禽腸道微生態(tài)環(huán)境;預(yù)防和治療腸道疾病,降低死亡率的作用。1989年,美國FDA和美國飼料控制官員協(xié)會公布了可以直接飼喂且一般認(rèn)為是安全的微生物菌種名單,其中包括地衣芽孢桿菌。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部318號公告也把地衣芽孢桿菌列入了飼料添加劑目錄。
[0006]鑒于以上原因,本發(fā)明將提供一種添加有能夠生產(chǎn)高活性和穩(wěn)定性β -葡聚糖酶的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的飼料復(fù)合酶。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于針對上述缺陷提供一種配比合理,活性高的雜糧雜柏日糧酶制劑及其制備方法。
[0008]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):[0009]一種雜糧雜柏日糧酶制劑,由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑0.5-2份,木聚糖酶100-120份,蛋白酶10-15份,果膠酶10-15份,纖維素酶15-20份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物30-40份,中溫α -淀粉酶5-10份。
[0010]所述木聚糖酶、蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和中溫α-淀粉酶為湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司或其他現(xiàn)有產(chǎn)品;
[0011]所述中草藥粉劑的制備方法如下:
[0012]稱取黃芪20-30份;黨參10-18份;柴胡10_15份;麥冬10_15份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下,然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水,控制溫度70°C?90°C保持2?4h,然后降溫至45-60°C,加入混合酶制劑進(jìn)行酶解,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8,酶解2-4h,最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,IlOff功率下超聲萃取0.5?1.5h,過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑;
[0013]所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ;
[0014]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:內(nèi)β-葡聚糖酶10-20份,外β-葡聚糖酶10-20份,β -葡萄糖苷酶10-15份,木聚糖酶15-20份,戊聚糖酶15-20份,β -淀粉酶10-15份,果膠酶10-15份,酸性蛋白酶10-15份;
[0015]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.5。
[0016]所述地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物制備方法如下:
[0017](I)種子培養(yǎng)
[0018]將地衣芽孢桿菌斜面菌種經(jīng)三級搖瓶發(fā)酵劑一級種子罐發(fā)酵;
[0019]所述種子培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:酵母粉0.5%,蛋白胨I %,可溶性淀粉1%,NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C滅菌 30_40min。
[0020](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0021]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中,培養(yǎng)溫度35-45°C,攪拌速度200-300r/min,通風(fēng)量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時,將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐,恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ;
[0022]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g,玉米粉55g,米糠25g,豆餅粉20g,β -葡聚糖2g,中草藥粉40g,海藻糖35g,酵母粉6g,玉米漿3g,硫酸銨2g,磷酸氫二鉀2g,磷酸二氫鉀2g,檸檬酸鈉3g,消泡劑0.5g,純凈水IOOOmL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ;
[0023]所述中草藥粉重量份數(shù)組成:取黃芪18份;黨參12份;當(dāng)歸12份粉碎混合即可;
[0024]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料,將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中,pH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉),同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min,然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進(jìn)行液化,最后加入其它原料,攪拌均勻,PH3-7,121-123°C滅菌30_40min備用。
[0025]溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風(fēng)量,控制溶解氧15-30% ;
[0026]PH控制:通過補(bǔ)氨水或稀磷酸,控制發(fā)酵過程中pH值保持在3-7 ;
[0027]補(bǔ)料控制:當(dāng)發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基,補(bǔ)料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ;
[0028]放罐標(biāo)準(zhǔn):60-80%菌體衰老自溶,酶活力增長緩慢。
[0029](3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾,然后于10_20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液;濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
[0030]所述地衣芽孢桿菌具體為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25。該菌株已于2013年11月3日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC,地址為:湖北省武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院),保藏號為CCTCC Ν0:Μ2013538ο
[0031]該菌株特點(diǎn)如下:
[0032]所述菌株在固體平板上菌落為白色,邊緣不整齊,表面干燥不透明,鏡檢為革蘭氏陽性細(xì)菌,細(xì)胞形態(tài)呈短桿狀,芽孢中生,橢圓形,不膨大。
[0033]所述菌株生理生化特征:V-P試驗(yàn)( + ),淀粉水解( + ),酪素水解( + ),明膠水解( + ),硝酸鹽還原( + ),吲哚試驗(yàn)(_),利用檸檬酸鹽( + ),硝酸還原( + ),甘露醇( + ),木糖(+ )。
[0034]所述地衣芽孢桿菌β -10-25是一株高產(chǎn)熱穩(wěn)定性β -葡聚糖酶的菌株,生產(chǎn)所得的葡聚糖酶酶活力高達(dá)8000-10000u/ml ;在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%,4°C保存12個月后酶活損失小于20% ;60°C條件下保存Ih后仍能保持80%以上酶活,70°C條件下保存IOmin后保持20%以上酶活。比現(xiàn)有的β _葡聚糖酶酶活力高,熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均較高,特別適合飼料工業(yè)的需求。
[0035]優(yōu)選的,一種雜糧雜柏日糧酶制劑按如下重量份數(shù)組成:中草藥粉劑I份,木聚糖酶110份,蛋白酶12份,果膠酶12份,纖維素酶18份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物35份,中溫α-淀粉酶8份。
[0036]有益效果:
[0037]本發(fā)明所添加的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物,與添加純酶工藝相比不僅簡化了酶的純化工藝,而且在添加酶的同時加入大量益生菌——地衣芽孢桿菌。地衣芽孢桿菌的添加一方面能產(chǎn)生蛋白多肽類抗菌物質(zhì),拮抗腸道病原細(xì)菌,抑制需氧菌及兼性厭氧菌特別是大腸桿菌等病原菌的繁殖;一方面還能產(chǎn)生除β_葡聚糖酶外的多種酶類,如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶及纖維素酶等,從而進(jìn)一步提高畜禽對蛋白質(zhì)和能量的利用率,促進(jìn)動物生長;最后,地衣芽胞桿菌還具有增強(qiáng)動物免疫功能、抵御感染和改善動物生理狀態(tài)的功能。本發(fā)明所添加地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物中的葡聚糖酶酶活力高達(dá)8000-10000u/ml ;該酶在60°C條件下保存Ih后仍能保持80%以上酶活,70°C條件下保存IOmin后保持20%以上酶活;在室溫下保存6個月后酶活損失小于25%,4°C保存12個月后酶活損失小于20%。比現(xiàn)有的β-葡聚糖酶酶活力高,酶作用最適PH值范圍寬泛,熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均較高。相較于市售的雜糧雜柏日糧酶制劑,在同樣的用量下本發(fā)明對飼料的酶解率更高,從而提高飼料轉(zhuǎn)化率,降低飼料成本。
[0038]本發(fā)明中添加了中草藥粉劑,其具有天然抗菌和增強(qiáng)免疫力的作用,可以有效的提高畜禽動物的抗應(yīng)激能力、免疫功能以及抗病防御機(jī)能。另外,中草藥粉劑中添加了具有抗熱應(yīng)激原作用的成分,使得本發(fā)明產(chǎn)品具有更好的穩(wěn)定性和保存活性,較沒有添加中草藥粉劑的產(chǎn)品在長時間高溫條件下的保存活性提高了 15%。本發(fā)明配比合理,有效的補(bǔ)充了內(nèi)源酶的不足,促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收,提高了塑料利用率,節(jié)約了飼養(yǎng)成本。【具體實(shí)施方式】
[0039]實(shí)施例1中草藥粉劑的制備方法
[0040]—種中草藥粉劑的制備方法如下:
[0041]稱取黃芪25份;黨參15份;柴胡12份;麥冬12份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下,然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水,控制溫度80°C保持3h,然后降溫至50°C,加入混合酶制劑進(jìn)行酶解,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6,酶解3h,最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物,IlW超聲萃取lh,過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑。
[0042]所述混合酶添加量為混合物料總重量的8%。
[0043]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:內(nèi)葡聚糖酶15份,外β-葡聚糖酶15份,β -葡萄糖苷酶12份,木聚糖酶18份,戊聚糖酶18份,β -淀粉酶18份,果膠酶12份,酸性蛋白酶12份。
[0044]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1.2。
[0045]實(shí)施例2 —種地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物的制備方法
[0046]包括如下步驟:
[0047](I)液體種子擴(kuò)大培養(yǎng)
[0048]①一級種子培養(yǎng):將活化后的斜面菌種2環(huán)接入500毫升搖瓶中,培養(yǎng)基裝量100毫升,旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分,培養(yǎng)溫度40°C,培養(yǎng)時間IOh ;
[0049]②二級種子培養(yǎng):將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中,培養(yǎng)條件與一級種子相同;
[0050]③三級種子培養(yǎng):將二級種子以10%接種量接入5000暈升三級種子搖瓶中,培養(yǎng)基裝量1000毫升,旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分,培養(yǎng)溫度40°C,培養(yǎng)時間12h ;
[0051]④一級種子罐培養(yǎng):將三級種子以10%接種量接入總?cè)莘e為150L的一級種子罐,發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L,培養(yǎng)溫度41 °C,攪拌速度300rpm,通風(fēng)量(V/V) 1: 1.5,罐壓
0.05Mpa,培養(yǎng)時間15h ;
[0052]所述種子培養(yǎng)基重量組成為:酵母粉0.5%,蛋白胨I %,可溶性淀粉I %,NaCll%,ρΗ5.5,121。。滅菌 35min。
[0053](2)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0054]將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中,培養(yǎng)溫度37°C,攪拌速度250r/min,通風(fēng)量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間12h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)18h ;此時,將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐,恒溫培養(yǎng)12h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至37°C時恒溫培養(yǎng)12h ;
[0055]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g,玉米粉55g,米糠25g,豆餅粉20g,β -葡聚糖2g,中草藥粉40g,海藻糖35g,酵母粉6g,玉米漿3g,硫酸銨2g,磷酸氫二鉀2g,磷酸二氫鉀2g,檸檬酸鈉3g,消泡劑0.5g,純凈水IOOOmL, pH值5.5,121°C滅菌20min ;
[0056]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料,將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中,調(diào)節(jié)PH值5.5,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉),同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫20min,然后緩慢升溫至90°C保溫20min進(jìn)行液化,最后加入其它原料,攪拌均勻,調(diào)初始PH5.5,121°C滅菌35min備用。
[0057]所述中草藥粉組成:取黃芪18份;黨參12份;當(dāng)歸12份粉碎混合即可;
[0058](3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑500 μ m粗濾,然后于15°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20%濃縮液;濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
[0059]實(shí)施例3 —種飼用復(fù)合酶制劑的制備方法
[0060]一種雜糧雜柏日糧酶制劑,由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0061]中草藥粉劑I份,木聚糖酶110份,蛋白酶12份,果膠酶12份,纖維素酶18份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物35份,中溫α -淀粉酶8份。
[0062]按上述配方取產(chǎn)自湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶,蛋白酶,纖維素酶,中溫α -淀粉酶,果膠酶,以及實(shí)施例1所得的中草藥粉劑,實(shí)施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物于25°C條件下在混合機(jī)中攪拌均勻,攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0063]實(shí)施例4 一種飼用復(fù)合酶制劑的制備方法
[0064]一種雜糧雜柏日糧酶制劑,由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0065]中草藥粉劑0.5份,木聚糖酶100份,蛋白酶10份,果膠酶10份,纖維素酶15份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物40份,中溫α -淀粉酶5份。
[0066]所述中草藥粉劑的制備方法如下:
[0067]稱取黃芪20份;黨參10份;柴胡15份;麥冬15份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下,然后于容器中均勻混合并添加3倍重量的水,控制溫度75°C保持2h,然后降溫至50°C,加入混合酶制劑進(jìn)行酶解,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5,酶解2.5h,最后添加混合物料I倍重量乙醇和丙醇的混合物,IlOW功率下超聲萃取0.5h,過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑;
[0068]所述混合酶添加量為混合物料總重量的5% ;
[0069]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:內(nèi)β -葡聚糖酶10份,外β -葡聚糖酶10份,β -葡萄糖苷酶10份,木聚糖酶15份,戊聚糖酶15份,β -淀粉酶15份,果膠酶15份,酸性蛋白酶15份;
[0070]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1。
[0071]按上述配方取產(chǎn)自湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶,蛋白酶,纖維素酶,中溫α -淀粉酶,果膠酶或其他公司產(chǎn)品,以及上述所得的中草藥粉劑,實(shí)施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物于25°C條件下在混合機(jī)中攪拌均勻,攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0072]實(shí)施例5 —種飼用復(fù)合酶制劑的制備方法
[0073]—種雜糧雜柏日糧酶制劑,由以下重量份數(shù)的酶制劑組成:
[0074]中草藥粉劑2份,木聚糖酶120份,蛋白酶15份,果膠酶15份,纖維素酶20份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物30份,中溫α -淀粉酶10份。
[0075]所述中草藥粉劑的制備方法如下:
[0076]稱取黃芪30份;黨參18份;柴胡10份;麥冬10份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下,然后于容器中均勻混合并添加6倍重量的水,控制溫度85°C保持4h,然后降溫至60°C,加入混合酶制劑進(jìn)行酶解,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6.5,酶解4h,最后添加混合物料2.5倍重量乙醇和丙醇的混合物,IlOW功率下超聲萃取1.5h,過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑;
[0077]所述混合酶添加量為混合物料總重量的10% ;
[0078]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:內(nèi)葡聚糖酶20份,外β-葡聚糖酶20份,β -葡萄糖苷酶15份,木聚糖酶20份,戊聚糖酶20份,β -淀粉酶10份,果膠酶10份,酸性蛋白酶10份;
[0079]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1.5。
[0080]按上述配方取木聚糖酶,蛋白酶,纖維素酶,中溫α-淀粉酶,果膠酶,以及上述所得的中草藥粉劑,實(shí)施例2所述的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物于25°C條件下在混合機(jī)中攪拌均勻,攪拌時間為5分鐘。攪拌均勻裝箱后于常溫或冷室中保存。
[0081]實(shí)施例6效果對比實(shí)驗(yàn)
[0082]選取120頭30Kg生長豬,按血統(tǒng)及性別無差異分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)20頭豬。實(shí)驗(yàn)期為28天,實(shí)驗(yàn)組每噸飼料添加本實(shí)施例3所述復(fù)合酶制劑120g,對照組不添加復(fù)合酶制劑,于試驗(yàn)期的始末日早晨空腹稱重,計算飼料日增重和料肉比,并對毛色進(jìn)行打分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示:
[0083]
I對照組I試驗(yàn)組
平均日增重(g/d) 655.20707.62`
飼料/增重2?45
毛色打分(10分制) 5?58?5
[0084]實(shí)施例7效果對比
[0085]選取120頭生長豬,按體重、血統(tǒng)及性別無差異分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)20頭豬。實(shí)驗(yàn)期為28天,實(shí)驗(yàn)組和對照組每噸飼料均添加復(fù)合酶制劑120g,實(shí)驗(yàn)組所用復(fù)合酶制劑為實(shí)施例3所述復(fù)合酶制劑,對照組所用復(fù)合酶制劑為市售雜糧雜柏日糧酶,于試驗(yàn)期的始末日早晨空腹稱重,計算飼料轉(zhuǎn)化率、日增重和料肉比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示:
[0086]
pMlpsi
平均日增重(g/d) 685.30707.62
飼料/增重2.23
毛色打分(10分制) 6?58?5
[0087]實(shí)施例8中草藥粉劑對酶保存活性的影響
[0088]以實(shí)施例2中所述的制備方法獲得的雜糧雜柏日糧酶制劑為樣品1,以去除實(shí)施例2中所有的中草藥粉劑的制備方法獲得的雜糧雜柏日糧酶制劑為樣品2,比較兩種樣品的保存活性。在45°C下保存上述樣品18h,之后測定酶活,結(jié)果表明:樣品I的殘余酶活在76%以上,樣品2的殘余酶活保持在60%左右。
【權(quán)利要求】
1.一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于:由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑0.5-2份,木聚糖酶100-120份,蛋白酶10-15份,果膠酶10-15份,纖維素酶15-20份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物30-40份,中溫α -淀粉酶5-10份; 所述地衣芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌(B acillus Iicheniformis) β-10-25,保藏編號為 CCTCC Ν0:Μ2013538。
2.如權(quán)利要求1所述一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于,所述中草藥粉劑的制備方法如下: 稱取黃芪20-30份;黨參10-18份;柴胡10-15份;麥冬10-15份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下,然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水,控制溫度70°C~90°C保持2~4h,然后降溫至45-60°C,加入混合酶制劑進(jìn)行酶解,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8,酶解2-4h,最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h,過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑。
3.如權(quán)利要求2所述的一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于,所述混合酶制劑組成如下:內(nèi)β -葡聚糖酶10-20份,外β -葡聚糖酶10-20份,β -葡萄糖苷酶10-15份,木聚糖酶15-20份,戊聚糖酶15-20份,β -淀粉酶10-15份,果膠酶10-15份,酸性蛋白酶10-15份。
4.如權(quán)利要求1所述一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物制備方法,包括如下步驟: 地衣芽孢桿菌β-10-25經(jīng)斜面菌種活化培養(yǎng)后進(jìn)行一、二、三級液體種子和種子罐培養(yǎng);將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中,培養(yǎng)溫度35-45 °C,攪拌速度200-300r/min,通風(fēng)量(V/V) 1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15-20h ;此時,將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐,恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅 菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ; 發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾,然后于10-20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液;濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
5.如權(quán)利要求4所述的一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g,玉米粉55g,米糠25g,豆餅粉20g,β -葡聚糖2g,中草藥粉40g,海藻糖35g,酵母粉6g,玉米漿3g,硫酸銨2g,磷酸氫二鉀2g,磷酸二氫鉀2g,檸檬酸鈉3g,消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH 值 4.5-7.0,121°C滅菌 20min ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:按比例準(zhǔn)確稱取原料,將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中,調(diào)節(jié)PH值3-7,加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉),同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15-30min,然后緩慢升溫至90°C保溫15_30min進(jìn)行液化,最后加入其它原料,攪拌均勻,PH3-7,121-123°C滅菌30_40min備用。
6.如權(quán)利要求5所述一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于,所述中草藥粉組成:黃芪18份;黨參12份;當(dāng)歸12份。
7.如權(quán)利要求1所述的一種雜糧雜柏日糧酶,其特征在于:由以下重量份數(shù)的組分組成:中草藥粉劑1份,木聚糖酶110份,蛋白酶12份,果膠酶12份,纖維素酶18份,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物35份,中溫α -淀粉酶8份。
8.一種制備如權(quán)利要求1-7所述的雜糧雜柏日糧酶的方法,包括如下步驟: 按照原料組成將中草藥粉劑,木聚糖酶,蛋白酶,果膠酶,纖維素酶,地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物,中溫α -淀粉酶混合均勻即可; 所述木聚糖酶,蛋白酶,果膠酶,纖維素酶,中溫α -淀粉酶為湖南鴻鷹祥生物工程股份有限公司產(chǎn)品或其他現(xiàn)有產(chǎn)品; 所述中草藥粉劑的制備方法如下: 稱取黃芪20-30份;黨參10-18份;柴胡10-15份;麥冬10-15份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下,然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水,控制溫度70°C~90°C保持2~4h,然后降溫至45-60°C,加入混合酶制劑進(jìn)行酶解,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8,酶解2-4h,最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,IlOff功率下超聲萃取0.5~1.5h,過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑; 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ; 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:內(nèi)β -葡聚糖酶10-20份,外β -葡聚糖酶10-20份,β -葡萄糖苷酶10-15份,木聚糖酶15-20份,戊聚糖酶15-20份,β -淀粉酶10-15份,果膠酶10-15份,酸性蛋白酶10-15份; 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.5。 所述地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物制備方法如下: 將一級種子罐發(fā)酵液以3%接種量接入含有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中,培養(yǎng)溫度35-451:,攪拌速度200-3001'/1^11,通風(fēng)量1:1-3,培養(yǎng)時間10_15h ;然后將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)15_20h ;此時,將一級種子罐發(fā)酵液以2%接種量追加接入發(fā)酵罐,恒溫培養(yǎng)10-15h ;繼續(xù)將IL經(jīng)過121°C滅菌20min,溫度為10°C的發(fā)酵培養(yǎng)基補(bǔ)入發(fā)酵罐,待溫度升至35_45°C時恒溫培養(yǎng)10-15h ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥麩75g,玉米粉55g,米糠25g,豆餅粉20g,β -葡聚糖2g,中草藥粉40g,海藻糖35g,酵母粉6g,玉米漿3g,硫酸銨2g,磷酸氫二鉀2g,磷酸二氫鉀2g,檸檬酸鈉3g,消泡劑0.5g,純凈水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C滅菌20min ; 所述中草藥粉組成:黃苗18份;黨參12份;當(dāng)歸12份。 放罐標(biāo)準(zhǔn):60-80%菌體衰老自溶,酶活力增長緩慢; (3)發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾,然后于10-20°C循環(huán)超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液;濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得地衣芽孢桿菌培養(yǎng)物。
9.如權(quán)利要求1所述的一種雜糧雜柏日糧酶在畜禽飼養(yǎng)中的應(yīng)用。
【文檔編號】A23K1/14GK103749987SQ201310739739
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】李洪兵, 李海清, 張錦杰, 朱永明, 胡永明 申請人:湖南鴻鷹生物科技有限公司
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