一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑及其制備方法，本發(fā)明的制備方法，以海藻酸鈉為載體，氯化鈣為交聯(lián)劑，加入殺蚊蘇云金桿菌原粉為有效活性成分，具有高效的殺蚊活性；通過(guò)空心玻璃微珠使劑型達(dá)到懸浮緩釋作用，抵抗了紫外線輻射，延長(zhǎng)了殘效期。其制劑，配方合理，殺蟲毒力高，防治效果好，抗紫外輻射能力強(qiáng)，野外殘效期長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的產(chǎn)品在水中殺蚊子幼蟲效果好，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，試蟲平均相對(duì)死亡率呈逐漸升高趨勢(shì)，至192h試蟲相對(duì)死亡率達(dá)到100%；并且有著良好的機(jī)械性能和持久的懸浮性，直到144h才開始出現(xiàn)下沉，到192h懸浮率仍保持58.3%。
【專利說(shuō)明】一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑及其制備方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥緩釋劑及其制備方法，具體涉及一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑及其制備方法，屬于生物農(nóng)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]【背景技術(shù)】蘇云金桿菌(ifeci77i/5.簡(jiǎn)稱Bt),是一種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，在其形成芽孢的同時(shí)在菌體內(nèi)形成具有蛋白質(zhì)性質(zhì)的一個(gè)或多個(gè)伴孢晶體，又稱殺蟲晶體蛋白(Insecticidal Crystal Proteins, ICPs)或δ~內(nèi)毒素，對(duì)鱗翅目、雙翅目、鞘翅目、膜翅目、同翅目、直翅目、食毛目、虱目和蚤目昆蟲以及吸蟲、鞭毛蟲、線蟲、蜱螨有較強(qiáng)的毒殺作用，而又克服了傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥污染環(huán)境、危害人畜、容易產(chǎn)生抗性等缺點(diǎn)，并具有選擇性強(qiáng)、安全、所使用的原料簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，逐步成為世界上應(yīng)用最廣的微生物殺蟲劑。Bt以色列亞種(漢thuringiensis簡(jiǎn)稱Bti)對(duì)多種蚊蟲具有高效活性，已成功開發(fā)為生物殺蟲劑用于蚊蟲等衛(wèi)生害蟲的防治，在瘧疾、登革熱、黃熱病等蚊媒疾病的控制上發(fā)揮了重要的作用。然而，目前生產(chǎn)應(yīng)用的Bt菌在使用中其活性成分芽孢和晶體易受環(huán)境中紫外線的影響而影響其殺蟲效果及持效期，已成為Bt殺蟲劑難于普及的主要限制因素之一。
[0003] 目前提高Bt殺蟲劑抗紫外輻射能力的方式主要有兩種，一種是利用劑型研究或添加助劑的方法，通過(guò)包裹等制劑形式或者在菌劑中添加紫外吸收劑和保護(hù)劑，以減少紫外線對(duì)菌體的直接輻射。主要是著色劑和熒光增白劑等，包括有剛果紅、突光素鈉、七葉靈、小檗堿、抗壞血酸、苯丙三唑類化合物、脫脂牛奶、木質(zhì)素、黑色素、腐植酸、對(duì)氨基苯甲酸及糖漿等超過(guò)100種的紫外保護(hù)劑。這些添加劑對(duì)Bt制劑起到了很好的紫外保護(hù)作用，大大延長(zhǎng)了 Bt制劑的有效期。目前報(bào)道已上市商品化的Bt劑型主要分為固體型和液體型，固體有粉劑、顆粒劑、粉末劑、球劑；液體有懸浮劑、乳劑、膠囊劑等。這些劑型使得Bt菌起到很好的保護(hù)作用。另一種是基因調(diào)控手段，通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗紫外輻射功能基因構(gòu)建多功能工程菌株，從而提高了 Bt菌株的抗紫外輻射能力。雖然轉(zhuǎn)基因多功能工程菌也具有很好的抗紫外輻射的作用，但存在穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)。通過(guò)誘導(dǎo)手段獲得的Bt菌株具有發(fā)酵速度變慢以及殺蟲活性降低等問(wèn)題。劑型不僅使得殺蟲劑在運(yùn)輸與保存中具有穩(wěn)定作用，而且對(duì)不利的環(huán)境因素如紫外線輻射等具有很好的保護(hù)作用，并且在劑型中添加一些紫外保護(hù)等添加劑也能夠起到很好的紫外保護(hù)作用，并大大延長(zhǎng)了 Bt制劑的有效期。
[0004]微膠囊化的懸浮緩釋劑是解決Bt菌野外使用的最佳方法，它可以使其免受紫外線輻射，緩慢釋放又延長(zhǎng)了 Bt菌使用的殘效期。目前海藻酸鈉微膠囊化最常用的方法有三種:1.銳孔滴入法，即將含有微生物的海藻酸鈉溶液通過(guò)不同孔徑的針頭滴入到二價(jià)交聯(lián)溶液中，微膠囊的大小取決于針頭的大小和海藻酸鈉溶液的粘度。2.乳化凝結(jié)法，是一種水包油乳化技術(shù)，這種方法所得到的微膠囊大小和高度依賴攪拌速度和交聯(lián)溶液的添加速率。3.復(fù)凝集法，其原理是利用帶有相反電荷的膠體溶液混合時(shí)，因電荷中和而產(chǎn)生凝集。但后兩種方法工藝復(fù)雜，成本高。而第一種方法工藝簡(jiǎn)單、操作方便。本文采用銳孔滴入法并且添加一些紫外保護(hù)劑、誘食劑以及殺蚊劑等，不僅起到保護(hù)作用，而且還增強(qiáng)制劑毒力和延長(zhǎng)了殘效期。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明的目的在于提供一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑及其制備方法。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
本發(fā)明的殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑，其特征在于由殺蚊蘇云金桿菌原粉、海藻酸鈉、氯化鈣、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉、魚粉、天然菊酯和水組成；懸浮緩釋劑中各種原料所占的重量百分率如下:
原料重量百分率
殺蚊蘇云金桿菌原粉1%~5% 海藻酸鈉1%~5%
氯化鈣1%~5%
空心玻璃微珠1%~2%
黑色素0.3%~0.5%
苯甲酸鈉溶液0.1%~θ.5%
魚粉0.5%~2.5%
天然菊酯0.1%~0.5%
水84%~95% 。
[0007]本發(fā)明的殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑的制備方法，其特征在于操作步驟如下:
(1)取海藻酸鈉、殺蚊蘇云金桿菌原粉、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉溶液、魚粉、天然菊酯和水，配制成混合溶液，各原料占懸浮緩釋劑的重量百分比分別為1%~5%、1%~5%、1%~2%、0.3%~0.5%、0.1%~0.5%、0.5%~2.5%、0.1%~0.5% 和 84%~95% ；
(2)配制重量百分濃度為1%~5%的氯化鈣溶液；
(3)用無(wú)菌注射器將步驟(1)的混合溶液逐滴加入到步驟(2)的氯化鈣溶液中，液滴形成顆粒狀微珠并凝固；
(4)步驟(3)的液滴在氯化鈣溶液中硬化時(shí)間不少于4h，棄氯化鈣溶液，將硬化的顆粒狀微珠用蒸餾水清洗，風(fēng)干，然后室溫保存。
[0008]所述海藻酸鈉為化學(xué)純，氯化鈣、苯甲酸鈉為分析純；殺蚊蘇云金桿菌為Bt以色列亞種(已公開，菌株保藏號(hào)為=CGMCC 1.1754);殺蚊蘇云金桿菌原粉，純度為5400ITU/mg ；空心玻璃微珠的規(guī)格為0LH-D，粒度范圍10-125微米；上述原料均由市場(chǎng)購(gòu)得。
[0009]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及技術(shù)原理:本發(fā)明以海藻酸鈉為載體，氯化鈣為交聯(lián)劑。加入殺蚊蘇云金桿菌原粉為有效活性成分，具有高效的殺蚊活性。通過(guò)空心玻璃微珠使劑型達(dá)到懸浮緩釋作用，抵抗了紫外線輻射，延長(zhǎng)了殘效期。加入黑色素為紫外保護(hù)添加劑，也增強(qiáng)了該菌的抗紫外輻射能力。為了避免懸浮緩釋劑在水中的微生物變質(zhì)發(fā)霉而使得菌的毒力下降等情況發(fā)生，添加苯甲酸鈉對(duì)菌株起到防腐保護(hù)作用。加入魚粉具有誘食作用，誘使幼蟲啃食，提高了殺蟲效果，同時(shí)避免了劑型長(zhǎng)時(shí)間在水中下沉現(xiàn)象，延長(zhǎng)了殘效期。使用天然菊酯是國(guó)際公認(rèn)的最安全的無(wú)公害天然殺蟲劑，為觸殺性殺蟲劑，提高了劑型的殺蟲效果。殺蚊蘇云金桿菌劑型配方與其野外殺蟲效果密切相關(guān)，決定著其產(chǎn)品的實(shí)際殺蚊效果及經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的的制劑，配方合理，殺蟲毒力高，防治效果好，抗紫外輻射能力強(qiáng)，野外殘效期長(zhǎng)，為殺蚊蘇云金桿菌生物制劑的開發(fā)推廣與普及應(yīng)用提供了方便。
[0010]【具體實(shí)施方式】為了充分公開本發(fā)明的一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑的制備方法，以下結(jié)合實(shí)施例加以說(shuō)明。實(shí)施例1:一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑，由海藻酸鈉、氯化鈣、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉、魚粉和天然菊酯組成，懸浮緩釋劑中各種原料所占的重量百分率如下:
【權(quán)利要求】
1.一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑，其特征在于由殺蚊蘇云金桿菌原粉、海藻酸鈉、氯化鈣、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉、魚粉、天然菊酯和水組成；懸浮緩釋劑中各種原料所占的重量百分率如下:原料重量百分率 殺蚊蘇云金桿菌原粉1%~5%海藻酸鈉1%~5%氯化鈣1%~5% 空心玻璃微珠1%~2% 黑色素0.3%~0.5% 苯甲酸鈉溶液0.1%~θ.5% 魚粉0.5%~2.5% 天然菊酯0.1%~0.5%`水84%~95% 。
2.一種如權(quán)利要求1所述的殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑的制備方法，其特征在于操作步驟如下: (1)取海藻酸鈉、殺蚊蘇云金桿菌原粉、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉溶液、魚粉、天然菊酯和水，配制成混合溶液，各原料占懸浮緩釋劑的重量百分比分別為1%~5%、1%~5%、1%~2%、0.3%~0.5%、0.1%~0.5%、0.5%~2.5%、0.1%~0.5% 和 84%~95% ； (2)配制重量百分濃度為1%~5%的氯化鈣溶液； (3)用無(wú)菌注射器將步驟(1)的混合溶液逐滴加入到步驟(2)的氯化鈣溶液中，液滴形成顆粒狀微珠并凝固； (4)步驟(3)的液滴在氯化鈣溶液中硬化時(shí)間不少于4h，棄氯化鈣溶液，將硬化的顆粒狀微珠用蒸餾水清洗，風(fēng)干，然后室溫保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種殺蚊蘇云金桿菌懸浮緩釋劑的制備方法，其特征在于操作步驟如下: (1)取海藻酸鈉、殺蚊蘇云金桿菌原粉、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉溶液、魚粉、天然菊酯和水，配制成混合溶液，各原料占懸浮緩釋劑的重量百分比分別為3%、3%、1.5%、`0.3%、0.3%、1.5%、0.4% 和 85% ； (2)配制重量百分濃度為5%的氯化鈣溶液； (3)用IOmL的無(wú)菌注射器將步驟(1)的混合溶液逐滴加入到步驟(2)的氯化鈣溶液中，液滴形成顆粒狀并凝固； (4)步驟(3)的液滴在氯化鈣溶液中硬化時(shí)間為4h，棄氯化鈣溶液，將硬化的顆粒狀微珠用蒸餾水清洗2次，風(fēng)干，然后室溫保存。
【文檔編號(hào)】A01N65/12GK103719163SQ201310733631
【公開日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】張靈玲, 關(guān)雄, 張小娟, 顧曉軍, 張意, 鄭曉娟, 吳松青, 王官棟, 吳志卯, 劉紅 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)