杜仲離體快速繁殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步驟：將外植體放置于含有生長素或者類生長素的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)形成不定根；將不定根切成切段，接種在含有植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上形成不定芽；將形成成熟葉片的不定芽培養(yǎng)在含有類生長素的1/2MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根形成具有根及功能葉片的試管苗；馴化試管苗；移栽定植。本發(fā)明的有益之處在于：利用植物離體培養(yǎng)技術(shù)，以杜仲離體培養(yǎng)的子葉、愈傷組織等多種外植體所形成的不定根為材料，經(jīng)過誘導(dǎo)高效獲得不定芽，生根后形成試管苗移栽大田獲得無性繁殖系；該方法提供了一種杜仲離體快速繁殖的新途徑，不僅繁殖速度快、效率高，而且杜仲離體材料利用效率得到了提高。
【專利說明】杜仲離體快速繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物種苗的繁殖方法，具體涉及一種杜仲離體快速繁殖的方法，屬于無性繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是我國特有的第三紀(jì).？遺珍貴藥用樹種,其樹皮即為我國傳統(tǒng)的名貴中藥——杜仲，為國家二級(jí)保護(hù)植物。目前杜仲以種子繁殖為主，但種子發(fā)芽率不高，且其實(shí)生后代個(gè)體間差異較大，有效藥用成分和杜仲膠含量變化顯著，不利于新選育出杜仲優(yōu)系的推廣。
[0003]植物離體培養(yǎng)技術(shù)、組織培養(yǎng)技術(shù)、離體快速繁殖，既可以縮短育種時(shí)間，又可用于保存材料，并可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量遺傳性狀一致的試管苗，不僅有利于優(yōu)良品種的推廣，保證藥用及工業(yè)原料供應(yīng)，還對(duì)保護(hù)野生種質(zhì)資源具有重要意義。
[0004]杜仲離體快速繁殖方法主要是利用各種外植體，先誘導(dǎo)形成不定芽，再誘導(dǎo)形成不定根，最后形成試管苗，所使用的外植體有葉片、葉柄、腋芽、胚軸、帶芽莖段、莖尖、子葉。
[0005]然而，現(xiàn)有的方法存在著:離體材料利用效率不高和離體繁殖速度慢、效率低的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種杜仲離體快速繁殖的方法，該方法以不定根為材料，誘導(dǎo)形
[0007]成不定芽，從而獲得試管苗，其不僅繁殖速度快、效率高，而且離體材料利用效率聞。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0009]一種杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0010]( I)、獲取不定根:將外植體放置于含有生長素或者類生長素的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，形成不定根，培養(yǎng)直至不定根的長度達(dá)到6-lOcm ；
[0011](2)、誘導(dǎo)生成不定芽:將形成的不定根切成長I Cm的切段，接種在含有植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至切段形成不定芽；
[0012](3)、誘導(dǎo)生根獲得試管苗:將形成2-3枚成熟葉片的不定芽培養(yǎng)在含有類生長素的1/2MS培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根，形成具有根及功能葉片的試管苗；
[0013](4)、移栽定植:試管苗形成新葉新根達(dá)到移栽要求后，進(jìn)行移栽定植。
[0014]前述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，還包括馴化試管苗的步驟:當(dāng)試管苗的根長達(dá)到2-5cm時(shí)，將瓶口打開煉苗，幼苗葉色變深后，將試管苗移栽到培養(yǎng)基質(zhì)中培養(yǎng)，溫度保持在25°C _30 °C，濕度保持在80%-100%，當(dāng)試管苗形成新葉新根達(dá)到移栽要求時(shí)，進(jìn)行移栽定植。
[0015]前述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，前述培養(yǎng)基質(zhì)為沙子、蛭石、土按照質(zhì)量比1:2:I的比例混合而成。
[0016]前述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，在步驟(2)中，前述植物生長調(diào)節(jié)劑為TDZ。
[0017]前述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，在步驟(2)中，前述MS培養(yǎng)基中還添加有-萘乙酸。
[0018]本發(fā)明的有益之處在于:利用植物離體培養(yǎng)技術(shù)，以杜仲離體培養(yǎng)的子葉、愈傷組織等多種外植體所形成的不定根為材料，經(jīng)過誘導(dǎo)高效獲得不定芽，生根后形成試管苗移栽大田獲得無性繁殖系；該方法提供了一種杜仲離體快速繁殖的新途徑，不僅繁殖速度快、效率高，而且杜仲離體材料利用效率得到了提高，可以用于杜仲新品系選育及優(yōu)良品種推廣。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體的介紹。
[0020]實(shí)施例1以子葉形成的不定根為材料
[0021]1、獲取不定根:杜仲果實(shí)在流動(dòng)的水中沖泡48小時(shí)，剝掉果皮，清洗干凈后在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行常規(guī)消毒，然后剝?nèi)》N胚，接種在MS基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)兩周后得到無菌籽苗。切取籽苗的子葉，將子葉切成5mm左右的切段；子葉切段水平放置在MS + -萘乙酸(縮寫為NAA，是類生長素的一種)培養(yǎng)基的表面，每升MS培養(yǎng)基中含有0.2mg NAA，輕輕按壓使子葉與培養(yǎng)基充分接觸；2周后開始形成不定根，8周左右，白色的不定根最長可達(dá)6-10Cm。
[0022]2、誘導(dǎo)生成不定芽:將形成的不定根切成長I Cm的切段，接種在含有植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上。植物生長調(diào)節(jié)劑為TDZ，每升MS培養(yǎng)基中含有Img TDZ,其是一種新型的植物生長調(diào)節(jié)劑，具有很強(qiáng)的細(xì)胞分裂素活性(CTK)，它的CTK活性要比一般CTK高幾十倍至幾百倍，研究表明:它可以促進(jìn)植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眠，促進(jìn)種子萌發(fā)，促進(jìn)愈傷組織生長，延緩植物衰老等，并且可以通過對(duì)其他的植物激素和生理活性物質(zhì)的作用來調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育過程，是一個(gè)作用力很強(qiáng)的植物生長調(diào)節(jié)劑。切段培養(yǎng)至30天左右時(shí)，形成了不定芽。
[0023]3、誘導(dǎo)生根獲得試管苗:將形成2-3枚成熟葉片的不定芽培養(yǎng)在1/2MS +吲哚丁酸(縮寫為IBA，是類生長素的一種)的培養(yǎng)基上，每升培養(yǎng)基中含有1.5mg IBA，誘導(dǎo)生根，形成具有根及功能葉片的試管苗。
[0024]4、馴化試管苗:當(dāng)試管苗的根長達(dá)到2_5cm時(shí)，將瓶口打開煉苗，幼苗葉色變深后，將試管苗移栽到培養(yǎng)基質(zhì)中培養(yǎng)，培養(yǎng)基質(zhì)為沙子、蛭石、土按照質(zhì)量比1: 2: I的比例混合而成，溫度保持在25°C _30°C，濕度保持在80%-100%。根據(jù)光照情況利用遮蔭網(wǎng)進(jìn)行遮蔭。
[0025]5、移栽定植:兩個(gè)月后，試管苗形成的新葉新根達(dá)到了移栽要求，移栽定植。
[0026]實(shí)施例2以愈傷組織形成的不定根為材料
[0027]1、獲取不定根:將愈傷組織接種在1/2MS +吲哚乙酸(縮寫為IAA，是生長素的一種)的培養(yǎng)基的表面，每升培養(yǎng)基中含有Img IAA，輕輕按壓使愈傷組織與培養(yǎng)基充分接觸；I周后開始形成不定根，7周左右,不定根最長可達(dá)6-8 Cm。[0028] 2、誘導(dǎo)生成不定芽:將形成的不定根切成長I Cm的切段，接種在含有植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上。植物生長調(diào)節(jié)劑為TDZ，每升MS培養(yǎng)基中含有2mg TDZ0同時(shí)，每升MS培養(yǎng)基中還添加有0.1mg的NAA。培養(yǎng)10天左右，切段兩端開始形成愈傷組織，逐漸向中間擴(kuò)展。30天左右，切段形成了不定芽。
[0029]3、誘導(dǎo)生根獲得試管苗:將形成2-3枚成熟葉片的不定芽培養(yǎng)在1/2MS + NAA的培養(yǎng)基上，每升培養(yǎng)基中含有0.2mg NAA，誘導(dǎo)生根，形成具有根及功能葉片的試管苗。
[0030]4、馴化試管苗:當(dāng)試管苗的根長達(dá)到2_5cm時(shí)，將瓶口打開煉苗，幼苗葉色變深后，將試管苗移栽到培養(yǎng)基質(zhì)中培養(yǎng)，培養(yǎng)基質(zhì)為沙子、蛭石、土按照質(zhì)量比1: 2: I的比例混合而成，溫度保持在25°C _30°C，濕度保持在80%-100%。根據(jù)光照情況利用遮蔭網(wǎng)進(jìn)行遮蔭。
[0031]5、移栽定植:一個(gè)月后，試管苗形成的新葉新根達(dá)到了移栽要求，移栽定植。
[0032]需要說明的是，培養(yǎng)基中所添加的生長素、類生長素、植物生長調(diào)節(jié)劑并不局限于實(shí)施例中給出的具體物質(zhì)，其他種類的生長素、類生長素、植物生長調(diào)節(jié)劑均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，只不過是效果上可能會(huì)稍有差別。
[0033]綜上所述，本發(fā)明的杜仲離體快速繁殖的方法，利用植物離體培養(yǎng)技術(shù)，以杜仲離體培養(yǎng)的子葉、愈傷組織等多種外植體所形成的不定根為材料，經(jīng)過誘導(dǎo)高效獲得不定芽，生根后形成試管苗移栽大田獲得無性繁殖系。
[0034]該方法提供了一種杜仲離體快速繁殖的新途徑，不僅繁殖速度快、效率高，而且杜仲離體材料利用效率得到了提高。
[0035]需要說明的是，上述實(shí)施例不以任何形式限制本發(fā)明，凡采用等同替換或等效變換的方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、獲取不定根:將外植體放置于含有生長素或者類生長素的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，形成不定根，培養(yǎng)直至不定根的長度達(dá)到6-lOcm ； (2)、誘導(dǎo)生成不定芽:將形成的不定根切成長Icm的切段，接種在含有植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至切段形成不定芽； (3)、誘導(dǎo)生根獲得試管苗:將形成2-3枚成熟葉片的不定芽培養(yǎng)在含有生長素或者類生長素的1/2MS培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根，形成具有根及功能葉片的試管苗； (4)、移栽定植:試管苗形成新葉新根達(dá)到移栽要求后，進(jìn)行移栽定植。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，還包括馴化試管苗的步驟:當(dāng)試管苗的根長達(dá)到2-5cm時(shí)，將瓶口打開煉苗，幼苗葉色變深后，將試管苗移栽到培養(yǎng)基質(zhì)中培養(yǎng)，溫度保持在25°C _30°C，濕度保持在80%-100%，當(dāng)試管苗形成新葉新根達(dá)到移栽要求時(shí)，進(jìn)行移栽定植。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基質(zhì)為沙子、蛭石、土按照質(zhì)量比1: 2: I的比例混合而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述植物生長調(diào)節(jié)劑為TDZ。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的杜仲離體快速繁殖的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述MS培養(yǎng)基中還添加有- 萘乙酸。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103583372SQ201310635135
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】曹小勇, 秦公偉, 蔣景龍, 徐皓, 劉艷麗, 趙樺, 李新生 申請(qǐng)人:陜西理工學(xué)院