蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法
【專利摘要】本發(fā)明適用于蛹蟲草生產(chǎn)領(lǐng)域，提供了一種蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法。該方法將選育獲得的蛹蟲草可結(jié)實性優(yōu)良母種種源作為初始種源，按常規(guī)方法培養(yǎng)液體菌種，待液體種源培養(yǎng)好后，在無菌條件下對液體菌種進行分裝，然后保藏于-72℃至-86℃超級低溫冰箱內(nèi)。所保藏種源需要隨機抽取3管，逐級解凍，解凍后以此為液體種源再擴繁一次液體生產(chǎn)種源，按常規(guī)方法栽培蛹蟲草，如果栽培后蛹蟲草生長正常，那么同批次保藏的液體種源就是有效的可以使用菌種，冷凍保藏的菌種可以長期保藏（目前最長保藏期為3年）。本發(fā)明從根本上解決了優(yōu)良蛹蟲草種源退化速度快，可結(jié)實性種源生產(chǎn)供應(yīng)期短的技術(shù)問題，實現(xiàn)了同一批次種源一次檢測，持久使用的目標(biāo)。
【專利說明】蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于蛹蟲草生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其涉及一種蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法。
【背景技術(shù)】
[0002]北蟲草學(xué)名蛹蟲草。它是蟲草屬中兩個模式種之一，現(xiàn)已作為冬蟲夏草的唯一替代品。北蟲草主要成分有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、SOD酶等，具有防癌抗癌，補腎益肺和提高人體免疫能力之功效，是一種極具開發(fā)價值的食藥兼用保健佳品。
[0003]北蟲草從1985年發(fā)現(xiàn)至今，經(jīng)歷了仿野生柞蠶蛹栽培和米飯培養(yǎng)基完全人工栽培兩個階段，近年來伴隨大規(guī)模北蟲草栽培技術(shù)日臻完善，也出現(xiàn)了一個不容忽視的瓶頸性技術(shù)問題，那就是蛹蟲草菌種退化問題。
[0004]為解決菌種退化問題，目前主要通過選育和保藏優(yōu)良的蛹蟲草可結(jié)實性種源來完成。選育是指通過組織分離技術(shù)或子囊孢子雜交技術(shù)獲得出草率高、產(chǎn)量形狀良好的可結(jié)實性蛹蟲草種源；而保藏則是將選育的優(yōu)良菌種如何科學(xué)保藏起來。根據(jù)我們多年實驗，發(fā)現(xiàn)蛹蟲草母種種源按常規(guī)保藏方法，如:低溫斜面固體保藏法，雖然有一定延緩衰退作用，但保藏效果很不穩(wěn)定，無法實現(xiàn)有效保藏。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，旨在解決優(yōu)良蛹蟲草種源 退化速度快，可結(jié)實性種源生產(chǎn)供應(yīng)期短的技術(shù)問題。
[0006]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，，包括如下的步驟:
[0007]I)將選育獲得的蛹蟲草可結(jié)實性優(yōu)良母種種源作為初始實驗種源，種源形式為斜面固體母種；
[0008]2)將液體菌種培養(yǎng)基分裝于250毫升錐型瓶或白色滴流瓶中，每瓶裝培養(yǎng)基100毫升，封口后裝入高壓滅菌鍋中，在1.05Kg/cm2壓強下滅菌60分鐘，待冷卻至25°C以下開始接種；
[0009]3)接種后的蛹蟲草液體菌種在20°C ± I°C溫度下震蕩培養(yǎng)，震蕩頻率120~130次/分鐘，連續(xù)培養(yǎng)5~7天；選出菌球大小均勻、毛刺銳利、數(shù)量多、培養(yǎng)基液體清澈透明的液體菌種；
[0010]4)將步驟3)培養(yǎng)的液體菌種在無菌條件下分裝到25毫升無菌帶蓋冷凍管中，每管10毫升，并進行編號，隨機選出3管，其余全部同時保藏在-72°c至-86°c超級低溫冰箱內(nèi)；
[0011]5)將隨機選出的3管液體菌種按常規(guī)方法進行試栽,3瓶出草均正常的同一批次種源，保藏在超級低溫冰箱內(nèi)的同一批次種源作為生產(chǎn)性種源使用。
[0012]進一步地，步驟2)中液體菌種培養(yǎng)基配方為:葡萄糖20克、蛋白胨5克、酵母浸粉3克、磷酸二氫鉀3克、硫酸鎂2克、維生素B1IO毫克、維生素B25毫克、水1000毫升，煮沸溶化配方中各成分物質(zhì)。
[0013]進一步地，超級低溫冰箱內(nèi)液體菌種使用前逐級解凍，具體步驟為:先把液體菌種冷凍管轉(zhuǎn)到溫度為-24°C至-30°C冰柜中存放24小時，然后轉(zhuǎn)到溫度為-10°C至_16°C冰柜中存放24小時，最后放入冰水混合(TC環(huán)境中解凍至液體培養(yǎng)基全部溶化。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果在于:
[0015]通過本發(fā)明保存的蛹蟲草可結(jié)實性液體種源，有效保藏期限可達到3年甚至更久(目前最長試驗保藏期為3年)；
[0016]本發(fā)明從根本上解決了優(yōu)良蛹蟲草種源退化速度快，可結(jié)實性種源生產(chǎn)供應(yīng)期短的技術(shù)問題，實現(xiàn)了同一批次種源一次檢測，持久使用的目標(biāo)。
【具體實施方式】
[0017]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0018]實施例1
[0019]一種蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，按照如下的步驟進行:
[0020]I)將選育獲得的蛹蟲草可結(jié)實性優(yōu)良母種種源作為初始實驗種源，種源形式為斜面固體母種；
[0021]2)將液體菌種培養(yǎng)基分裝于250毫升錐型瓶或白色滴流瓶中，每瓶裝培養(yǎng)基100毫升，封口后裝入高壓滅菌鍋中，在1.05Kg/cm2壓強下滅菌60分鐘，待冷卻至25°C以下開始按常規(guī)方法接種；具體接種方法:在超凈工作臺無菌環(huán)境里，將滅菌后液體培養(yǎng)基和斜面固體母種種源準(zhǔn)備好，在酒精燈火焰附近開啟母種菌管棉塞，用接種工具取黃豆粒大小的菌種I塊，接入液體培養(yǎng)基，無菌封口即可。
[0022]3)接種后的蛹蟲草液體菌種在20°C ± I°C溫度下震蕩培養(yǎng)，震蕩頻率120~130次/分鐘，連續(xù)培養(yǎng)5~7天；選出菌球大小均勻、毛刺銳利、數(shù)量多、培養(yǎng)基液體清澈透明的液體菌種；
[0023]4)將步驟3)培養(yǎng)的液體菌種在無菌條件下分裝到25毫升無菌帶蓋冷凍管中，每管10毫升，并進行編號，隨機選出3管，其余全部同時保藏在_72°C至_86°C超級低溫冰箱內(nèi)；
[0024]5)將隨機選出的3管液體菌種按常規(guī)方法進行試栽，如果3管出草均正常則保藏在超級低溫冰箱內(nèi)的同一批次種源可作為生產(chǎn)性種源使用。
[0025]其中，步驟2)中液體菌種培養(yǎng)基配方為:葡萄糖20克、蛋白胨5克、酵母浸粉3克、磷酸二氫鉀3克、硫酸鎂2克、維生素B1IO毫克、維生素B25毫克、水1000毫升，煮沸溶化配方中各成分物質(zhì)。
[0026]6)上述的保藏的樣品在使用前逐級解凍，具體步驟為:先把液體菌種冷凍管轉(zhuǎn)到溫度為_24°C至_30°C冰柜中存放24小時，然后轉(zhuǎn)到溫度為-10°C至_16°C冰柜中存放24小時，最后放入冰水混合O°c環(huán)境中解凍至液體培養(yǎng)基全部溶化。
[0027]解凍后取出液體菌種冷凍管按2、3程序步驟生產(chǎn)液體菌種，培養(yǎng)好的液體菌種可以作為生產(chǎn)用液體菌種種源再擴繁一次。
[0028]本發(fā)明保藏的樣品有效保藏期限可達到3年甚至更久(目前最長試驗保藏期為3年)。
[0029]實施例2
[0030]與實施例1的不同之處在于，步驟4)中將步驟3)培養(yǎng)的液體菌種在無菌條件下分裝到25毫升無菌帶蓋冷凍管中，每管10毫升，并進行編號，隨機選出3管，其余全部同時保藏在-86 °C超級低溫冰箱內(nèi)；
[0031]保藏的樣品在使用前逐級解凍，具體步驟為:先把液體菌種冷凍管轉(zhuǎn)到溫度為-30°C冰柜中存放24小時，然后轉(zhuǎn)到溫度為_16°C冰柜中存放24小時，最后放入冰水混合0°C環(huán)境中解凍至液體培養(yǎng)基全部溶化。
[0032]實施例3
[0033]與實施例1的不同之處在于:
[0034]將步驟3)培養(yǎng)的液體菌種在無菌條件下分裝到25毫升無菌帶蓋冷凍管中，每管10毫升，并進行編號，隨機選出3管，其余全部同時保藏在-72°c超級低溫冰箱內(nèi)；
[0035]保藏的樣品在使用前逐級 解凍，具體步驟為:具體步驟為:先把液體菌種冷凍管轉(zhuǎn)到溫度為_24°C冰柜 中存放24小時，然后轉(zhuǎn)到溫度為-10°C冰柜中存放24小時，最后放入冰水混合(TC環(huán)境中解凍至液體培養(yǎng)基全部溶化。
[0036]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，其特征在于，包括如下的步驟: 1)將選育獲得的蛹蟲草可結(jié)實性優(yōu)良母種種源作為初始實驗種源，種源形式為斜面固體母種； 2)將液體菌種培養(yǎng)基分裝于250毫升錐型瓶或白色滴流瓶中，每瓶裝培養(yǎng)基100毫升，封口后裝入高壓滅菌鍋中，在1.05Kg/cm2壓強下滅菌60分鐘，待冷卻至25°C以下開始接種； 3)接種后的蛹蟲草液體菌種在20°C土 1°C溫度下震蕩培養(yǎng)，震蕩頻率120~130次/分鐘，連續(xù)培養(yǎng)5~7天；選出菌球大小均勻、毛刺銳利、數(shù)量多、培養(yǎng)基液體清澈透明的液體菌種； 4)將步驟3)培養(yǎng)的液體菌種在無菌條件下分裝到25毫升無菌帶蓋冷凍管中，每管10毫升，并進行編號，隨機選出3管，其余全部同時保藏在-72°C至-86°C超級低溫冰箱內(nèi)； 5)將隨機選出的3管液體菌種按常規(guī)方法進行試栽，試栽結(jié)果所選3管菌種都正常出草，則保藏在超級低溫冰箱內(nèi)的同一批次種源具有可結(jié)實性，可以作為生產(chǎn)性種源使用。
2.按照權(quán)利要求1所述的蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，其特征在于，步驟2)中液體菌種培養(yǎng)基配方為:葡萄糖20克、蛋白胨5克、酵母浸粉3克、磷酸二氫鉀3克、硫酸鎂2克、維生素B1IO毫克、維生素民5毫克、水1000毫升，煮沸溶化配方中各成分物質(zhì)。
3.按照權(quán)利要求1所述的蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，其特征在于，超級低溫冰箱內(nèi)液體菌種使用前逐級解凍，具體步驟為:先把液體菌種冷凍管轉(zhuǎn)到溫度為_24°C至_30°C冰柜中存放24小時，然后轉(zhuǎn)到溫度為-10°C至_16°C冰柜中存放24小時，最后放入冰水混合O °c環(huán)境中解凍至液體培養(yǎng)基全部溶化。
4.按照權(quán)利要求3所述的蛹蟲草可結(jié)實性生產(chǎn)種源長久保藏方法，其特征在于，取出液體菌種冷凍管按步驟2)和步驟3)生產(chǎn)液體菌種，培養(yǎng)好的液體菌種作為生產(chǎn)用液體菌種種源再擴繁一次。
【文檔編號】A01G1/04GK103563651SQ201310509054
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月23日
【發(fā)明者】王升厚, 李鋒, 徐方旭, 柳葉飛, 張 林, 白冰 申請人:沈陽師范大學(xué), 沈陽蟲林密寶北蟲草食品科技有限公司