治療法布里病的給藥方案的制作方法
【專利摘要】目前披露的主題提供了一種使用1-脫氧半乳糖野尻霉素和酶替代療法用于治療法布里病的給藥方案和給藥計劃。目前披露的主題進一步提供了一種使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶用于治療法布里病的給藥方案和給藥計劃。
【專利說明】治療法布里病的給藥方案
[0001]相關申請的交叉引用
[0002]本申請要求以下美國臨時申請序列號的優(yōu)先權:2011年3月11日提交的61/451，798 ；2011年12月20日提交的61/578，201以及2012年2月7日提交的61/596，165，在此將它們披露的全部內容通過引用作為參考。
發(fā)明領域
[0003]本申請?zhí)峁┝艘环N使用1-脫氧半乳糖野尻霉素和酶替代療法用于治療法布里病的給藥方案和給藥計劃。
_4] 發(fā)明背景
[0005]法布里病是一種進行性的X-相關的先天性糖鞘脂(glycospingolipid)代謝缺陷，是由α-Gal A基因(GLA)突變導致的溶酶體酶α半乳糖苷酶Α(α-Gal Α)的缺乏引起的。
[0006]盡管是X-相關病癥，女性也可表現(xiàn)出不同程度的臨床表現(xiàn)。法布里病是一種罕見疾病，具有估計在40，000分之一的男性至117,000分之一的一般人群之間的發(fā)病率。而且，存在著可能不能診斷的法布里病的遲發(fā)表型變體，因為它們沒有呈現(xiàn)出典型的體征和癥狀。這種情況以及新生兒篩查法布里病的研究表明法布里病的實際發(fā)病率可能高于目前估計。
[0007]這種疾病的臨床表現(xiàn)可能與殘留α-Gal A水平相關。如果不治療，法布里病患者的預期壽命縮短，并且通常在四十歲或五十歲左右由于影響腎臟、心臟和/或中樞神經系統(tǒng)的血管疾病而死亡。酶缺乏導致底物球形三酰神經酰胺(GL-3)在全身血管內皮和內臟組織中的細胞內積累。由于糖鞘脂沉積，腎功能逐步衰退和氮質血癥的產生通常在生命的三十歲至五十歲時發(fā)生，但是也可能早在二十歲就發(fā)生。腎損傷在半合子(男性)和雜合子(女性)患者中都有發(fā)現(xiàn)。
[0008]心臟疾病出現(xiàn)在大部分男性和許多女性中。早期的心臟所見包括左心室增大、心瓣膜病變以及傳導異常。二尖瓣關閉不全是典型存在于兒童或青少年中的最常見的瓣膜損傷。腦血管表現(xiàn)主要來自多病灶小血管病變并且可能包括血栓、短暫腦缺血發(fā)作、基底動脈缺血和動脈瘤、癲癇發(fā)作、偏癱、偏身麻木、失語癥、迷路疾患或腦出血。腦血管表現(xiàn)的平均發(fā)作年齡為33.8歲?？赡茈S著年齡增長而表現(xiàn)出人格改變和精神病行為。
[0009]目前認可的法布里病的治療方法為酶替代療法(“ERT”)。兩種a-Gal A產品目前可用于治療法布里病:阿加糖酶α ( Replaga!?, Shire Human Genetic Therapies)和
阿加糖酶β ( Fabrazyme?，Genzyme Corporation)。這兩種形式的ERT旨在用靜脈內給藥的重組形式的酶來補償患者不足的α-Gal A活性。雖然ERT在許多情況下有效，但是這種治療也有局限性。尚未證明ERT降低中風的風險，心肌反應緩慢，并且GL-3從一些腎臟細胞類型中消除受到限制。一些患者對ERT產生免疫反應。
[0010]1-脫氧半乳糖野尻霉素及其鹽，1-脫氧半乳糖野尻霉素鹽酸鹽(United StatesAdopted Name (USAN)也稱為米加司他鹽酸鹽)通過選擇性地與酶結合而作為突變體a -Gal A的藥理學分子伴侶，由此增加其穩(wěn)定性并且?guī)椭刚郫B成正確的三維形狀。a -Gal A的這種穩(wěn)定作用允許細胞質量控制機制識別正確折疊的酶以便增加該酶運輸?shù)饺苊阁w，從而允許它實現(xiàn)其預期的生物功能，即GL-3的代謝。作為恢復正確運輸α-Gal A從ER到溶酶體的結果，米加司他鹽酸鹽還降低了 ER中錯誤折疊的蛋白質的積累，這可以減輕細胞應激和一些炎癥樣反應(它們可能是法布里病的促成因素)。已經進行了米加司他鹽酸鹽的多個體外和體內臨床前研究，以及臨床研究。米加司他鹽酸鹽已經顯示出增加細胞內α-Gal A蛋白的量并且增強突變體酶向溶酶體的轉運。
[0011]發(fā)明概沭
[0012]本申請?zhí)峁┝艘环N使用1-脫氧半乳糖野尻霉素和酶替代療法用于治療法布里病的給藥方案和給藥計劃。在一些實施方案中，本申請?zhí)峁┝艘环N使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶(例如阿加糖酶α或阿加糖酶β)治療法布里病的給藥方案和給藥計劃。
[0013]在一個實施方案中，該方法包括將大約50mg至大約600mg的1-脫氧半乳糖野尻霉素和有效量的α-Gal A酶替代療法給藥對其有需要的患者。1_脫氧半乳糖野尻霉素可以在α-Gal A酶替代療法之前、之后或同時給藥。在一個實施方案中，患者禁食一段時間，該段時間開始于1-脫氧半乳糖野尻霉素的給藥之前大約0.5至大約4小時并且結束于給藥之后大約0.5至大約4小時。在另一個實施方案中，患者在1-脫氧半乳糖野尻霉素的給藥之前至少大約2小時并在給藥之后至少大約2小時禁食。
[0014]在另一個實施方案中，在與α-Gal A酶替代療法的給藥同時至其之前大約4小時之間(從T=-4小時至T=O小時)給藥1-脫氧半乳糖野尻霉素。在另一個實施方案中，在a -Gal A酶替代療法的給藥之前大約2小時給藥1_脫氧半乳糖野尻霉素。 [0015]在一個具體的實施方案中，1-脫氧半乳糖野尻霉素是米加司他鹽酸鹽。在一個實施方案中，α-Gal A酶替代療法是阿加糖酶α或阿加糖酶β。
[0016]在一個實施方案中，1-脫氧半乳糖野尻霉素是作為對于α-Gal A酶替代療法的佐劑來給藥的。在另一個實施方案中，1-脫氧半乳糖野尻霉素和α-Gal A酶替代療法是作為聯(lián)合治療給藥的。
[0017]在一個具體的實施方案中，根據(jù)以上描述的方法所給藥的1-脫氧半乳糖野尻霉素的量是從大約150mg至大約450mg。在一個實施方案中，所給藥的1_脫氧半乳糖野尻霉素的量選自150mg、300mg以及450mg。
[0018]在一個具體的實施方案中，1-脫氧半乳糖野尻霉素剛好在α-Gal A酶替代療法之前或同時使用。在一個替代性實施方案中，在a-Gal A酶替代療法的給藥與其后4小時之間給藥第二劑量的1-脫氧半乳糖野尻霉素。
[0019]在一些實施方案中，對同樣正在接受a-Gal A酶替代療法的患者每I至4周給藥一次1-脫氧半乳糖野尻霉素。在一個另外的實施方案中，對同樣正在接受a-Gal A酶替代療法的患者每12至16天給藥一次1-脫氧半乳糖野尻霉素。在一個另外的實施方案中，對同樣正在接受a-Gal A酶替代療法的患者每14天給藥一次1-脫氧半乳糖野尻霉素。在一些實施方案中，對還給藥1-脫氧半乳糖野尻霉素作為聯(lián)合治療或輔助治療的患者每14天給藥一次a-Gal A酶替代療法。
[0020]本申請還提供了用于在法布里病的治療中使用的1-脫氧半乳糖野尻霉素，其中該治療包括向對其有需要的人類受試者給藥從大約50mg至大約600mg的1-脫氧半乳糖野尻霉素和有效量的a-Gal A酶替代療法。
[0021]本申請還提供了 1-脫氧半乳糖野尻霉素在制備用于治療法布里病的藥物中的用途，其中該治療包括向對其有需要的人類受試者給藥從大約50mg至大約600mg的1-脫氧半乳糖野尻霉素和有效量的a-Gal A酶替代療法。
[0022]本申請還提供了一種用于在受試者中治療法布里病的試劑盒，該試劑盒包括從大約50mg至大約600mg的1-脫氧半乳糖野尻霉素和有效量的a_Gal A酶替代療法。在一些實施方案中，試劑盒中的1-脫氧半乳糖野尻霉素的量選自150mg、300mg以及大約450mg。
[0023]附圖簡要說明
[0024]圖1顯示了在時期I和時期2期間單獨用0.5mg/kg或1.0mg/kg的阿加糖酶β治療(時期I)或與150mg米加司他聯(lián)合治療(時期2)的患者的血漿a -Gal A復合活性。
[0025]圖2顯示了與米加司他共同給藥后的所有患者的血漿a -Gal A活性AUC增加。
[0026]圖3顯示了各取樣時間的部分AUC,其顯示了共同給藥0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他的血漿α-Gal A活性的增加。
[0027]圖4A-4B顯示了在共同給藥0.5mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他后的兩位患者中的皮膚α-Gal A活性的增加。
[0028]圖5A-5B顯示了在共同給藥0.5mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他后的兩位患者中的皮膚α-Gal A活性的增加。圖5A顯示了在時期2過程中接受了 40分鐘更長的ERT輸注的患者中共同給藥0.5mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他之后的皮膚a -Gal A活性的增加。
[0029]圖6Α-6Β顯示了在1.0mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他共同給藥后的兩位患者中的皮膚α-Gal A活性的增加。
[0030]圖7A-7B顯示了在0.5mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他共同給藥后的兩位患者中的PBMC a -Gal A活性的增加。
[0031]圖8Α-8Β顯示了在0.5mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他共同給藥后的兩位患者中的PBMC a -Gal A活性的增加。
[0032]圖9Α-9Β顯示了在1.0mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他共同給藥后的兩位患者中的PBMC a -Gal A活性的增加。
[0033]圖10顯示的表總結了在0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β與150mg米加司他共同給藥后的血漿、皮膚以及PMBC中的α-Gal A活性的增加。
[0034]圖11顯示了實施例2和3的每個研究受試者的基因型。
[0035]圖12顯示了對比用1.0mg/kg阿加糖酶β治療以及用1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他鹽酸鹽聯(lián)合治療的血漿AUC a -Gal A活性(具有插入均值和標準偏差)。
[0036]圖13顯示了對比用0.5mg/kg阿加糖酶β治療以及用0.5mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他鹽酸鹽聯(lián)合治療的血漿AUC a -Gal A活性(具有插入均值和標準偏差)。
[0037]圖14顯示了單獨用阿加糖酶β治療或者與150mg米加司他鹽酸鹽聯(lián)合治療后的第2天的皮膚α-Gal A活性(具有從單獨用阿加糖酶β的基線扣除比率)。
[0038]圖15顯示了單獨用阿加糖酶β治療或者與150mg米加司他鹽酸鹽聯(lián)合治療后的第7天的皮膚α-Gal A活性(具有從單獨用阿加糖酶β的基線扣除比率)。
[0039] 發(fā)明詳沭[0040]本申請?zhí)峁┝艘环N使用1-脫氧半乳糖野尻霉素和阿加糖酶治療法布里病的給藥方案和給藥計劃。
[0041]定義
[0042]“法布里病”是指典型的法布里病、遲發(fā)型法布里病、以及具有在編碼α -半乳糖苷酶A(a_Gal A)的基因中的突變的半合子女性。術語“法布里病”，如在此所使用的，進一步包括受試者顯示出低于正常內源α-Gal A活性的任何病癥。
[0043]術語“AUC”代表評估人體隨時間對給定藥物的總暴露的數(shù)學計算。在繪制給藥后血液中的濃度如何變化的圖中，藥物濃度變量位于I軸上，并且時間位于X軸上。在指定的時間間隔之內，在藥物濃度曲線與X軸之間的面積是AUC。AUC被用作給藥方案和比較體內不同藥物的利用度的指導。
[0044]術語“Cmax”代表給藥后達到的最大血漿濃度。
[0045]術語“治療有效劑量”和“有效量”是指足以帶來有益的治療反應的具體藥用化合物或組合物的量。有益的治療反應可以是使用者(例如臨床醫(yī)師)將識別為對治療的有效反應的任何反應，包括先前癥狀和替代臨床標記。因此，治療反應通常是一種疾病或病癥(例如法布里病)的一種或多種癥狀的改善，如本領域中對于該疾病或病癥(例如對于法布里病)已知的那些。
[0046]在法布里病的替代標記方面改善的非限制性實例包括在細胞(例如成纖維細胞)和組織中的a-GAL水平或活性的增加；使用組織學、通過在腎臟間質毛細血管活組織檢查中的變化被測量為GL-3累積方面的減少；尿GL-3水平的降低；腎功能的評定(包括腎小球濾過率(GFR)和24小時尿蛋白)；高半胱氨酸和血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)的血漿濃度的降低；在心肌細胞和瓣膜纖維細胞內的GL-3積累的減少；心臟(尤其是左心室)肥大的減輕、瓣膜關閉不全以及心律失常的改善；蛋白尿的減輕；脂質(例如CTH、乳糖神經酰胺、神經酰胺)的尿濃度的降低以及葡萄糖神經酰胺和鞘磷脂的尿濃度的增加(Fuller等人，Clinical Chemistry, 2005 ；51:688-694);腎小球上皮細胞中層狀包涵體(斑馬小體)的缺乏；腎功能的改善；少汗癥的緩解；血管角化瘤的缺乏；以及聽力異常(如高頻感音神經性耳聾、進行性耳聾、突發(fā)性耳聾、或耳鳴)的改善。神經癥狀的改善包括短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)或中風的預防；以及自身表現(xiàn)為肢端感覺異常(肢端燒灼感或麻剌感)的神經性疼痛的改善。
[0047]短語“藥學上可接受”是指生理上可耐受的并且當給藥人時不會典型地產生不良反應的分子實體和組合物。優(yōu)選地，如在此所使用的，術語“藥學上可接受”表示由聯(lián)邦或州政府的管理機構批準的或者在美國藥典或其他普遍認可的藥典中列出的在動物體內并且更特別地在人體內的使用。術語“載體”是指與被給藥的化合物一起使用的稀釋劑、助劑、賦形劑或媒介物。這些藥用載體可以是無菌液體，如水和油類。水或水溶液鹽水溶液和含水葡萄糖和甘油溶液優(yōu)選被用作載體，特別是針對注射溶液而言。適合的藥用載體在E.W.馬丁 (E.ff.Martin)編寫的第 18 版或其他版的“Remington，s Pharmaceutical Sciences”中進行了描述，在此通過引用作為參考。
[0048]“1-脫氧半乳糖野尻霉素” (DGJ)是指(2R, 3S, 4R, 5S)_2_(羥甲基)哌啶_3，4，5-三醇。如在此使用，全篇對“1-脫氧半乳糖野尻霉素”或“DGJ”的引用包括游離堿以及任何其藥學上可接受的鹽形式。DGJ的鹽酸鹽已知為米加司他鹽酸鹽。[0049]術語“佐劑”或“輔助療法”是指用于增加主要物質、治療或過程的療效、安全性或以其他方式促進或增強其性能的任何另外的物質、治療或過程。
[0050]術語“聯(lián)合治療”是指與每種療法單獨進行時的效果相比其結果被增強的任何治療。在聯(lián)合治療中的單獨療法可以同時給藥或連續(xù)給藥。
[0051]增強可以包括，與單獨進行這些療法時達到的結果相比，可能帶來有利結果的不同療法的任何效果改進。增強的效果和增強的效果的確定可以通過不同的參數(shù)來測量，例如但不限于:時間參數(shù)(例如治療的長度、恢復時間、治療的長期效果或治療的可逆性)；生物學參數(shù)(例如細胞數(shù)、細胞體積、細胞組成、組織體積、組織大小、組織組成)；空間參數(shù)(例如組織強度、組織大小或組織可及性)，以及生理參數(shù)(例如身體輪廓、疼痛、不適、恢復時間或可見標記)。增強效果可以包括協(xié)同增強，其中增強效果高于當單獨進行每種療法時的相加效果。增強效果可以包括相加增強，其中增強效果基本上等于當單獨進行每種療法時的相加效果。增強效果可以包括小于協(xié)同效應，其中增強效果低于當單獨進行每種療法時的相加效果，但是仍然好于當單獨進行每種療法時的效果。
[0052]術語“大約”和“大致”一般表示在給定的測量的性質或準確性下測得的數(shù)量的可接受的誤差程度。典型地，示例性的誤差程度是在給定的數(shù)值或數(shù)值范圍的20%以內、優(yōu)選在10%以內、并且更優(yōu)選在5%以內?？商娲兀⑶姨貏e是在生物系統(tǒng)中，術語“大約”和“大致”表示在一個數(shù)量級之內的 平均值、優(yōu)選在一個給定數(shù)值的5倍并且更優(yōu)選在2倍之內。在此給出的數(shù)值的數(shù)量是近似值，除非另外說明。
[0053]配制和給藥
[0054]1-脫氧半乳糖野尻霉素可以作為游離堿或作為藥理學上可接受的鹽形式給藥，包括1-脫氧半乳糖野尻霉素鹽酸鹽(另外的名字是米加司他鹽酸鹽)?？梢砸赃m合于任何給藥途徑的形式給藥，包括例如以口服片劑、膠囊、或液體、或無菌注射水溶液的形式。可以以片劑、膠囊、胚珠制劑(ovule)、酏劑、溶液或混懸液、凝膠類、糖漿類、口腔洗劑、或使用之前用水或其他適合的媒介物構造的干粉的形式給藥，任選地用調味劑和著色劑用于即時、延遲、改進、持續(xù)、脈沖或控制釋放應用。還可以使用固體組合物，如片劑、膠囊、錠劑、軟錠劑、丸劑、推注劑(bolus)、粉末、糊劑、顆粒劑、栓劑(bullet)、或預混制劑?？诜褂玫墓腆w和液體組合物可以根據(jù)本領域熟知的方法制備。這些組合物還可以含有一種或多種藥學上可接受的可處于固體或液體形式的載體和賦形劑。當化合物被配制為供口服給藥時，可以通過常規(guī)手段制備片劑或膠囊，其中使用藥學上可接受的賦形劑，如粘合劑(例如預膠凝淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉羥乙酸鈉)；或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉)?？梢酝ㄟ^本領域熟知的方法將片劑包衣。
[0055]藥學上可接受的賦形劑還包括但不限于:微晶纖維素、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣和甘氨酸，崩解劑如淀粉(優(yōu)選玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、淀粉羥乙酸鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和某些復合硅酸鹽類，以及顆粒粘合劑如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基乙基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、明膠、以及阿拉伯膠。另外，可以包括潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、山崳酸甘油酯、以及滑石。
[0056]在一個具體的實施方案中，用硬脂酸鎂和預膠凝淀粉將米加司他鹽酸鹽配制在白色的硬明膠膠囊中。在另一個實施方案中，固體劑型包括大約75%-80%的米加司他鹽酸鹽、大約0.1%-2%的硬脂酸鎂、以及大約20%-25%的預膠凝淀粉。在另一個具體的實施方案中，膠囊包括大約76.5%的米加司他鹽酸鹽、大約0.5%的硬脂酸鎂、以及大約23%的預膠凝淀粉。
[0057]酶替代療法
[0058]目前認可的法布里病的治療方法為酶替代療法。目前有兩種產品用于治療法布里病:阿加糖酶 α ( Replagal1?，Shire Human Genetic Therapies)和阿加糖酶β ( Fabrazyme?, Genzyme Corporation),全球都已上市。這兩種形式的ERT旨在用靜脈內給藥的重組形式的酶來補償患者不足的a-Gal A活性。已經證實ERT能減少在腎臟的毛細血管內皮和某些其他細胞類型中的GL-3沉積。雖然ERT在許多情況下有效，但是這種治療還存在局限性。尚未證明ERT能減少中風的風險，心肌反應緩慢，并且GL-3從腎臟的一些細胞類型中的消除受到限制。一些患者對ERT產生免疫反應。
[0059]阿加糖酶α的推薦劑量是0.2mg/kg體重，作為靜脈輸注每2周輸注一次。在未使用過ERT的成年男性法布里病患者中進行了一個10周的研究來評估阿加糖酶α的藥代動力學和藥效學。給藥從0.1至0.4mg/kg劑量范圍的阿加糖酶α之后的平均半衰期是56-76分鐘，在劑量與半衰期、清除率或分布容積之間沒有顯著的關聯(lián)。在這個劑量范圍內AUC與劑量成線性比例。在所有劑量組中的血漿GL-3水平降低大約50% ;該降低不依賴于劑量和給藥頻率。在本研究過程中，18位患者中的兩位成為IgG陽性。在本研究過程中，在任何患者中均未檢測到IgE抗體。
[0060]阿加糖酶β的推薦劑量是lmg/kg體重，作為靜脈輸注每2周輸注一次。阿加糖酶β的生產商已經宣布了藥品短缺，這是唯一在美國批準用于法布里病的ERT。作為結果，阿加糖酶β目前被定量配給并且患者典型地接受減少的酶劑量和/或延長的給藥間隔(即，劑量之間超過2周)。阿 加糖酶β顯示出非線性藥代動力學，其中隨著劑量的增加，暴露(AUC)值增加并且清除率不成比例地降低。當劑量分別從0.3mg/kg增加至lmg/kg以及從lmg/kg增加至3mg/kg時,AUC值分別增加大約6倍和8倍。在從0.3mg/kg至3mg/kg范圍內給藥之后，成年患者中的阿加糖酶β的消除半衰期是劑量依賴性的并且在從45至100分鐘的范圍。
[0061]在臨床研究中，用阿加糖酶治療的79%的成年患者和69%的兒科患者產生了針對阿加糖酶β的IgG抗體；產生了 IgG抗體的大多數(shù)患者在暴露的前3個月之內如此。男性，特別是那些具有低殘留a-Gal A水平的男性，比那些具有更高殘留水平的男性或比女性更有可能產生IgG抗體。兒科患者中的IgG血清轉化與延長的阿加糖酶半衰期有關。然而，在成年患者中，在一個試驗中在血清轉化之前和之后觀察到相同的阿加糖酶藥代動力學性質；在另一個試驗中，在具有最高IgG滴度的患者中，最大阿加糖酶濃度和AUC值降低達基線值的26%。已經報道針對阿加糖酶的IgG抗體的存在會降低酶的活性。
[0062]在體外以及在體內，米加司他鹽酸鹽使野生型a-Gal A穩(wěn)定。已經在體外證明米加司他鹽酸鹽結合至rha-Gal A導致對在中性pH的rha_Gal A的穩(wěn)定產生顯著的時間和濃度依賴性增加，正如通過熱變性和通過活性所測量的。在一種中性PH緩沖劑中，rha-GalA顯示出活性損失，具有大致3小時的半衰期；與米加司他鹽酸鹽共孵育將rha-Gal A活性損失的半衰期增加至大致40小時。
[0063]在大鼠中，口服給藥3mg/kg米加司他鹽酸鹽、隨后在30分鐘后注射10mg/kg阿加糖酶β， 導致rha-Gal A的血漿半衰期增加2.6倍，并且在60和240分鐘時血漿a -Gal A水平分別增加2.5和1.5倍。在GLA缺乏的小鼠中，在注射rha-Gal A之前30分鐘和注射rha-Gal A之后2小時口服給藥30、100或300mg/kg劑量的米加司他鹽酸鹽，與單獨給藥rha-Gal A相比，導致在組織a_Gal A水平上的劑量依賴性增加以及在皮膚、心臟、腎臟和血漿中的GL-3水平的劑量依賴性降低。
[0064]在體外和在體內都已經顯示米加司他鹽酸鹽使阿加糖酶α穩(wěn)定。用在體外熱變性測定評估了米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶α的物理穩(wěn)定性的作用。使用這個測定，在ρΗ7.4時阿加糖酶α顯示出大致51 °C的熔化溫度(Tm)。然而，當在變性反應中包括10 μ M的米加司他鹽酸鹽時，阿加糖酶α的Tm大幅增加至59°C。如針對溶酶體酶所預期的，阿加糖酶α在低pH時更加穩(wěn)定(Tm在pH5.2時為58°C)并且在10 μ M米加司他鹽酸鹽存在時顯示出對熱變性的進一步抵抗(Tm為68°C )。這些數(shù)據(jù)表明米加司他鹽酸鹽的結合賦予了阿加糖酶α高水平的物理穩(wěn)定性。
[0065]還研究了米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶α從雄性Sprague-Dawley大鼠血液中的清除率的作用。動物接受媒介物(水)或單一口服管飼的1、3、10或30mg/kg米加司他鹽酸鹽，接著在30分鐘后通過尾靜脈推注注射而靜脈給藥0.2mg/kg阿加糖酶α。作為時間的函數(shù)收集血液，并測量在血漿中的α-Gal A活性。在缺乏米加司他鹽酸鹽時，a-Gal A活性迅速下降；預先給藥米加司他鹽酸鹽，在給藥3mg/kg和30mg/kg米加司他鹽酸鹽之后，導致阿加糖酶α的半衰期的分別大致2倍和3倍的劑量依賴性增加(如通過α-Gal A活性測量的)，在60和240分鐘時血漿a -Gal A水平分別增加大致2.5倍和1.5倍。米加司他鹽酸鹽對于阿加糖酶α的體外和體內作用都與觀察到的米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶β的作用相當。
[0066]已經在GLA缺乏的小鼠中進行了一項初步研究來評估共同給藥米加司他鹽酸鹽和Fabrazyme?的安全性。米加司他鹽酸鹽一周給藥三次，共給藥四周，劑量為3和30mg/kg,與一周一次的劑量為lmg/kg的靜脈給藥的Fabrazyme?聯(lián)合給藥。在共同給藥米加司他鹽酸鹽和Fabmzyme?的雄性GLA-缺乏的大鼠中所觀察的在存活、臨床狀況或血液學以及在臨床化學參數(shù)方面沒有顯示出直接的藥物相關變化。
實施例
[0067]實施例1:使用米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶治療法布里病的給藥方案
[0068]本研究的一個目的是評估包括共同給藥米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶的給藥方案在患有法布里病的患者中的安全性、有效性以及藥效學。
[0069]本研究的另一個目的是評定150mg和450mg劑量的米加司他鹽酸鹽對a-Gal A分布的影響。這將通過單獨給藥阿加糖酶以及阿加糖酶與米加司他鹽酸鹽聯(lián)合給藥之后，在給藥之后24小時和7天通過測量α-Gal A水平和蛋白質水平來測量皮膚中的阿加糖酶分布來進行評價。
[0070]將要評估的其他測量為:
[0071].在每次給藥阿加糖酶之前和之后14天的尿GL-3排泄；
[0072].在單獨給藥阿加糖酶和阿加糖酶與米加司他鹽酸鹽聯(lián)合給藥之后，在給藥之后24小時和7天在皮膚中的GL-3 ；[0073].在阿加糖酶開始輸注之前以及在給藥之后2、4和24小時以及7天和14天測定的WBC a -Gal A酶水平；
[0074].在開始輸注阿加糖酶之前的抗體滴度(IgG)；
[0075].在每次給藥阿加糖酶之前和每次給藥阿加糖酶之后14天的血漿球丙糖?；拾贝?globotriaosyisphingosine)(溶解-GB3)濃度和溶解-GB3的尿排泄。
[0076]所有的a -Gal A酶水平的血漿、WBC以及皮膚測量在有和沒有Con A捕獲下進行并且通過蛋白質印跡法測定蛋白質水平。
[0077]研究設計。這是一個2期臨床、兩階段、開放標簽研究，用來評定共同給藥米加司他鹽酸鹽和阿加糖酶的安全性和有效性。本研究將在18和65歲之間的男性受試者中進行，他們在納入研究之前至少一個月已經接受穩(wěn)定劑量(0.3-1.0mg/kg)的阿加糖酶β (Fabrazyme?)或(≥0.2mg/kg)的阿加糖酶a (Raplagal?)。大致將納入IS位受試者。 [0078]這個標簽開放研究將由兩個階段組成。階段I將由篩選和一個三時期研究組成，以評估150mg的米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶的藥代動力學和安全性的影響以及阿加糖酶對150mg米加司他鹽酸鹽的藥代動力學和安全性的影響。階段2將由篩選和一個兩時期研究組成，以評估450mg的米加司他鹽酸鹽對阿加糖酶的藥代動力學和安全性的影響。在階段2中，將不評估阿加糖酶對450mg劑量的米加司他鹽酸鹽的藥代動力學和安全性的影響。當米加司他鹽酸鹽與阿加糖酶一起給藥僅僅為了證實達到足夠的米加司他鹽酸鹽血漿濃度時，將表征米加司他鹽酸鹽的血漿暴露。
[0079]每個受試者將接受按以下順序描述的下列治療中的每一種。階段I將由以下時期組成:
[0080]時期1:阿加糖酶單獨靜脈輸注；
[0081]時期2:在開始靜脈輸注阿加糖酶之前兩個小時口服150mg劑量的米加司他鹽酸鹽；
[0082]時期3: 口服150mg劑量的米加司他鹽酸鹽。
[0083]在時期I和2中給藥的阿加糖酶的劑量將是相等的。阿加糖酶α將以40分鐘靜脈輸注給藥，而阿加糖酶β以2小時靜脈輸注給藥。
[0084]對于時期1，在下次計劃的阿加糖酶輸注之前，將對受試者進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯(lián)ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)、皮膚活組織檢查(鉆取活組織檢查，用于測量α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還將測定皮膚GL-3)。
[0085]在第I天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3測定，之后使用輸注泵以輸注的形式對受試者給藥目前的阿加糖酶劑量。剛好在開始輸注阿加糖酶之前以及在開始輸注阿加糖酶之后24小時期間收集用于藥代動力學和藥效學分析的血樣。在表2中總結的阿加糖酶β和在表4中總結的阿加糖酶α的時間點從收集的血樣測定血漿和WBCa-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3以及血漿抗體滴度。在輸注阿加糖酶結束時,在輸注后血樣收集之后立即進行12-導聯(lián)ECG。
[0086]在第2天，在前一天的輸注開始之后24小時收集鉆取皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還將測定皮膚GL-3。在收集最后的藥代動力學樣品之后，進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0087]在第7天，對受試者進行以下評定:體格檢查、生命體征、伴隨用藥以及不良事件評定。收集皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還將測定皮膚GL-3。還收集用于WBCa-Gal A和血漿酶水平測定的血樣。在第14天，收集用于尿GL-3和溶解-GB3排泄測定的尿樣。還收集用于WBC a -Gal A和血漿酶水平測定的血樣并且評定生命體征。
[0088]對于時期2，在下次計劃的阿加糖酶輸注之前，將對受試者進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯(lián)ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0089]在第I天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3測定，之后在計劃的阿加糖酶輸注之前2小時口服給藥劑量為150mg的米加司他鹽酸鹽。受試者在給藥米加司他鹽酸鹽之前至少2小時和之后2小時禁食。在時期2中，每位受試者將接受與時期I中使用輸注泵以輸注的形式給藥的相等劑量的阿加糖酶。在給藥該米加司他鹽酸鹽劑量之后2小時開始輸注阿加糖酶。
[0090]在給藥米加司他鹽酸鹽之前和給藥米加司他鹽酸鹽之后I小時收集用于藥代動力學和藥效學分析的血樣。剛好在開始輸注阿加糖酶之前和輸注阿加糖酶開始之后24小時期間收集另外的血樣。在表2中總結的阿加糖酶β和在表4中總結的阿加糖酶α的時間點從收集的血樣測定血漿和WBC α-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3以及血漿抗體滴度。在輸注阿加糖酶結束時，在輸注后血樣收集之后立即進行12-導聯(lián)ECG。
[0091]在第2天，在前一天的輸注開始之后24小時收集鉆取皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還可以測定皮膚GL-3。在收集最后的藥代動力學樣品之后，進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0092]在第7天，對受試者進行以下評定:體格檢查、生命體征、伴隨用藥以及不良事件評定。收集皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還可以測定皮膚GL-3。還收集用于WBC α-Gal A和血漿酶水平測量的血樣。
[0093]在第14天，收集用于尿GL-3和溶解-GB3排泄測定的尿樣。還收集用于WBCa -GalA和血漿酶水平測定的血樣并且評定生命體征。
[0094]在時期2之后完成所有評定之后，受試者開始時期3。所有的受試者在通常的給藥計劃之后的第I天接受下一次阿加糖酶輸注。在第6天，對所有受試者進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯(lián)ECG、以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0095]在第7天，給藥口服劑量為150mg的米加司他鹽酸鹽。受試者在米加司他鹽酸鹽給藥之前至少2小時和之后2小時禁食。在給藥之前和給藥米加司他鹽酸鹽之后24小時期間收集血樣。測量所有血漿樣品中的米加司他鹽酸鹽濃度(參見表2的接受阿加糖酶β的受試者和表4的接受阿加糖酶α的受試者的樣品收集時間)。
[0096]在第8天，在收集最后的藥代動力學樣品之后，進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、生命體征以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。[0097]時期3的隨訪在時期3之后的28天通過電話聯(lián)系。進行以下評定:伴隨用藥以及不良事件。
[0098]對于階段2，每位受試者接受按以下描述順序的下列治療中的每一種:
[0099]時期1:阿加糖酶單獨輸注；
[0100]時期2:在開始靜脈輸注阿加糖酶之前兩個小時口服450mg劑量的米加司他鹽酸鹽。
[0101]在時期I和2中給藥的阿加糖酶的劑量是相等的。阿加糖酶α將以40分鐘靜脈輸注給藥，而阿加糖酶β將以2小時靜脈輸注給藥。
[0102]對于時期1，滿足所有合格標準的受試者，在下次計劃的阿加糖酶輸注之前，將進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯(lián)ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)、皮膚活組織檢查(鉆取活組織檢查，用于測量a -Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還將測定皮膚GL_3)。
[0103]在第I天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3測定，之后使用輸注泵以輸注的形式對受試者給藥目前的阿加糖酶劑量。剛好在開始輸注阿加糖酶之前以及在開始輸注阿加糖酶之后24小時期間收集用于藥代動力學和藥效學分析的血樣。在表3中總結的阿加糖酶β和在表5中總結的阿加糖酶α的時間點從收集的血樣測定血漿和WBC α-Gal A酶水平、血漿溶解-GB3以及血漿抗體滴度。在輸注阿加糖酶結束時，剛好在收集輸注后血樣之后進行12-導聯(lián)ECG。 [0104]在第2天，在前一天的輸注開始之后24小時收集鉆取皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還將測定皮膚GL-3。在收集最后的藥代動力學樣品之后，進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0105]在第7天，對受試者進行以下評定:生命體征、伴隨用藥以及不良事件評定。收集皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還可以測定皮膚GL-3。還收集用于WBC a -Gal A和血漿酶水平測量的血樣。
[0106]在第14天，收集用于尿GL-3和溶解-GB3排泄測定的尿樣。還收集用于WBC a -GalA和血漿酶水平測定的血樣并且評定生命體征。
[0107]對于時期2，在下次計劃的輸注阿加糖酶之前，對受試者進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征、12-導聯(lián)ECG、臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0108]在第I天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3測定，之后在計劃的阿加糖酶輸注之前2小時口服給藥劑量為450mg的米加司他鹽酸鹽。受試者在米加司他鹽酸鹽給藥之前至少2小時和之后2小時禁食。在時期2中，每位受試者將接受與時期I中使用輸注泵以輸注的形式給藥的相等劑量的阿加糖酶。在給藥米加司他鹽酸鹽劑量之后2小時開始輸注阿加糖酶。
[0109]在給藥米加司他鹽酸鹽劑量之前和給藥米加司他鹽酸鹽之后I小時收集用于藥代動力學和藥效學分析的血樣。剛好在開始輸注阿加糖酶之前和輸注阿加糖酶開始后24小時期間收集另外的血樣。在表3中總結的阿加糖酶β和在表5中總結的阿加糖酶α的時間點從收集的血樣測定血漿和WBC a -Gal A酶水平、血漿溶解-GB3以及血漿抗體滴度。在輸注阿加糖酶結束時，剛好在收集輸注后血樣之后進行12-導聯(lián)ECG。
[0110]在第2天，在前一天的輸注開始之后24小時收集鉆取皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平；如果有足夠的樣品可用，還可以測定皮膚GL-3。在收集最后的藥代動力學樣品之后，進行以下評定:不良事件評定、伴隨用藥、體格檢查、體重、生命體征以及臨床實驗室試驗(血清化學、血液學以及尿分析)。
[0111]在第7天，對受試者進行以下評定:生命體征、伴隨用藥以及不良事件評定。收集皮膚活組織檢查切片，由此測定α-Gal A酶水平。還收集用于WBC a-Gal A和血漿酶水平測量的血樣。
[0112]在第14天，收集用于尿GL-3和溶解-GB3排泄測定的尿樣。還收集用于WBC a -GalA和血漿酶水平測定的血樣并且評定生命體征。
[0113]隨訪在時期2之后的28天進行。進行以下評定:伴隨用藥以及不良事件。
[0114]評定和樣品收集的計劃。表1顯示了階段I和2的評定計劃。用于米加司他鹽酸鹽與Fabrazyme?共同給藥的樣品收集時間和分析物顯示在表2和3中。用于米加司他鹽酸鹽」;z'Replagal?.共同給藥的樣品收集時間和分析物顯示在表4和5中。
[0115]表1:評定計劃(階段I和2)
[0116]
【權利要求】
1.一種在受試者中治療法布里病的方法，該方法包括將從大約50mg到大約600mg的1-脫氧半乳糖野尻霉素以及有效量的α-Gal A酶替代療法給藥對其有需要的患者。
2.如權利要求1所述的方法，其中所給藥的1-脫氧半乳糖野尻霉素的量是大約150mg至大約450mg。
3.如權利要求1所述的方法，其中所給藥的1-脫氧半乳糖野尻霉素的量選自大約150mg、大約300mg以及大約450mg。
4.如權利要求1所述的方法，其中患者禁食一段時間，該段時間開始于1-脫氧半乳糖野尻霉素的給藥之前大約0.5至大約4小時并且結束于給藥之后大約0.5至大約4小時。
5.如權利要求4所述的方法，其中患者在1-脫氧半乳糖野尻霉素的給藥之前至少大約2小時并在給藥之后至少大約2小時禁食。
6.如權利要求1所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素與該a-GalA酶替代療法的給藥同時至該a -Gal A酶替代療法給藥之前大約4小時給藥。
7.如權利要求6所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素在該a-GalA酶替代療法的給藥之前大約2小時給藥。
8.如權利要求1所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素是米加司他鹽酸鹽。
9.如權利要求1所述的方法，其中該α-GalA酶替代療法選自阿加糖酶α和阿加糖酶β。
10.如權利要求1所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素是作為對于該α-GalA酶替代療法的佐劑而給藥的。
11.如權利要求1所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素以及α-GalA酶替代療法是作為聯(lián)合療法而給藥的。
12.如權利要求6所述的方法，其中在該α-GalA酶替代療法的給藥與其后大約4小時之間給藥第二劑量的1-脫氧半乳糖野尻霉素。
13.如權利要求7所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素以及a-GalA酶替代療法每1至4周給藥一次。
14.如權利要求13所述的方法，其中該1-脫氧半乳糖野尻霉素以及α-GalA酶替代療法每2周給藥一次。
15.一種用于在受試者中治療法布里病的試劑盒，該試劑盒包含從大約50mg至大約600mg的1-脫氧半乳糖野尻霉素以及有效量的α-Gal A酶替代療法。
16.如權利要求15所述的試劑盒，其中1-脫氧半乳糖野尻霉素的量選自大約150mg、大約300mg以及大約450mg。
【文檔編號】A01N43/40GK103974619SQ201280021877
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2012年3月8日 優(yōu)先權日:2011年3月11日
【發(fā)明者】D.S.格林, K.J.瓦倫扎諾 申請人:阿米庫斯醫(yī)療股份有限公司