乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，它包括三大步驟，液體菌液的培養(yǎng)、固體基料的配制、固體基料與液體菌液的混勻，具體制備步驟為：把固體基料與液體菌液按重量百分比為1：1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養(yǎng)室，恒溫40℃，通風(fēng)，淺盤發(fā)酵36小時，可見淺盤表面和內(nèi)層均長滿白色菌體，提高溫度至60℃，加大風(fēng)量，干燥出料，測得活菌濃度1×109cfu/g，粉碎分裝，即得產(chǎn)品。本發(fā)明的制備工藝簡單并易于控制，不易染雜菌，菌株濃度高，后加工成本低，生產(chǎn)環(huán)境友好。
【專利說明】乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于微生態(tài)制劑的制備方法，具體涉及一種乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法。
[0003]【背景技術(shù)】
[0004]微生態(tài)產(chǎn)品具有無毒、無副作用，無殘留、無污染，不產(chǎn)生抗藥性，成本較低等特點(diǎn)，是理想的抗生素替代品。目前市售的微生態(tài)制劑有液態(tài)和固態(tài)兩種。固態(tài)微生態(tài)制劑特別是乳酸桿菌和酵母菌的復(fù)合固態(tài)微生態(tài)的制劑方法通常有兩種工藝技術(shù)方案，一種是先進(jìn)性液態(tài)深層發(fā)酵，最后加入固態(tài)載體吸附，干燥而成；而液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)雖可得到較純菌體，但成本高，發(fā)酵易受產(chǎn)物反饋控制，難以得到高濃度菌株，所以該方法有效菌數(shù)含量較低；另一種是常規(guī)固態(tài)發(fā)酵的模式；但現(xiàn)有的這些技術(shù)工藝方法普遍存在著工藝步驟復(fù)雜，制備成本高，產(chǎn)品收率低、雜菌含量高等缺點(diǎn)。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于，提供一種乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，解決目前的乳酸桿菌和酵母菌的復(fù)合固態(tài)微生態(tài)的制劑方法工藝步驟復(fù)雜，制備成本高，產(chǎn)品收率低的問題。
[0007]本發(fā)明提供的乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，它包括三大步驟，液體菌液的培養(yǎng)、固體基料的配制`、固體基料與液體菌液的混勻，具體制備步驟為:把固體基料與液體菌液按重量百分比為1:1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養(yǎng)室，恒溫40°C，通風(fēng)，淺盤發(fā)酵36小時，可見淺盤表面和內(nèi)層均長滿白色菌體，提高溫度至600C，加大風(fēng)量，干燥出料，測得活菌濃度I X 109cfu/g,粉碎分裝，即得產(chǎn)品。
[0008]所述液體菌液的培養(yǎng)具體步驟為:
一、平板培養(yǎng):乳酸桿菌和酵母菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配料為葡萄糖IOg,蛋白胨2g,牛肉膏3g,酵母浸膏5g,氯化鈉5g,硫酸猛5mg,瓊脂15g,蒸懼水1000ml，PH 值為 7，121°C滅菌，32°C培養(yǎng) 30h ；
二、試管接種:取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，其培養(yǎng)基配料為葡萄糖10g，蛋白胨2g，牛肉膏3g，酵母浸膏5g，氯化鈉5g，硫酸錳5mg，蒸餾水1000ml，PH值為7，121°C滅菌，35 °C培養(yǎng)24h ；
三、分別用三角瓶接種100ml，其培養(yǎng)基同步驟二，121°C滅菌，35°C培養(yǎng)24h；
四、分別用三角瓶接種1000ml，其培養(yǎng)基同步驟三；
五、用IOL種子發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)液為7L，培養(yǎng)基同步驟三，PH值為6，121°C滅菌30分鐘，培養(yǎng)溫度為37°C,轉(zhuǎn)速150r/min,通氣量2vvm,指每分鐘通入單位發(fā)酵體積m3的空氣體積m3,培養(yǎng)18h,再厭氧培養(yǎng)18h ；
六、用IOOL種子發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)液為100L，培養(yǎng)基按豆柏粉lg，魚粉lg，120目的玉米粉0.5g,葡萄糖2g,氯化鈉0.2g,硫酸猛0.3g，增效劑0.1g,水IOOOml的比例配制,按步驟五的方法培養(yǎng)，所選增效劑為硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鐵和硫酸銅按等量配比而成；
七、用1000L發(fā)酵罐，培養(yǎng)基分別以步驟六中100L種子發(fā)酵罐的配比乘以七倍，發(fā)酵方法同步驟五，培養(yǎng)24h。
[0009]所述固體基料按以下成分配制:花生殼或棉籽殼500kg，玉米粉150kg，豆柏粉200kg,麩皮100kg,葡萄糖5kg,總重量為1000kg,攪拌混勻后加200kg水潤濕后蒸煮滅菌，待冷卻至35°C時，加入液體菌液的培養(yǎng)的步驟七中的發(fā)酵液700kg。
[0010]本發(fā)明提供的乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，其有益效果在于，本發(fā)明的制備工藝簡單并易于控制，不易染雜菌，菌株濃度高，后加工成本低，生產(chǎn)環(huán)境友好。乳酸桿菌是厭氧菌，酵母菌是兼性菌，兩者均可在厭氧條件下生長，又可在好氧條件下產(chǎn)生，所以微生態(tài)產(chǎn)品不僅能有效補(bǔ)充畜禽消化道內(nèi)的有益微生物，改善消化道菌群平衡、而且其有益次級代謝產(chǎn)物，如乳酸、抗菌肽等能增強(qiáng)機(jī)體抗病性、提高代謝以及飼料的吸收利用，從而達(dá)到防治消化道疾病和促進(jìn)生長等多重作用。
[0011]
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明提供的乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，進(jìn)行詳細(xì)的說明。
實(shí)施例
[0013]本實(shí)施例的乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，它包括三大步驟，液體菌液的培養(yǎng)、固體基料的配制、固體基料與液體菌液的混勻，具體制備步驟為:把固體基料與液體菌液按重量百分比為1:1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養(yǎng)室，恒溫40°C，通風(fēng)，淺盤發(fā)酵36小時，可見淺盤表面和內(nèi)層均長滿白色菌體，提高溫度至60°C，加大風(fēng)量，干燥出料，測得活菌濃度I X 109cfu/g,粉碎分裝，即得產(chǎn)品。
[0014]所述液體菌液的培養(yǎng)具體步驟為:
一、平板培養(yǎng):乳酸桿菌和酵母菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配料為葡萄糖IOg,蛋白胨2g,牛肉膏3g,酵母浸膏5g,氯化鈉5g,硫酸猛5mg,瓊脂15g,蒸懼水1000ml，PH 值為 7，121°C滅菌，32°C培養(yǎng) 30h ；
二、試管接種:取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，其培養(yǎng)基配料為葡萄糖10g，蛋白胨2g，牛肉膏3g，酵母浸膏5g，氯化鈉5g，硫酸錳5mg，蒸餾水1000ml，PH值為7，121°C滅菌，35 °C培養(yǎng)24h ；
三、分別用三角瓶接種100ml，其培養(yǎng)基同步驟二，121°C滅菌，35°C培養(yǎng)24h；
四、分別用三角瓶接種1000ml，其培養(yǎng)基同步驟三；
五、用IOL種子發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)液為7L，培養(yǎng)基同步驟三，PH值為6，121°C滅菌30分鐘，培養(yǎng)溫度為37°C,轉(zhuǎn)速150r/min,通氣量2vvm,指每分鐘通入單位發(fā)酵體積m3的空氣體積m3,培養(yǎng)18h,再厭氧培養(yǎng)18h ；
六、用IOOL種子發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)液為100L，培養(yǎng)基按豆柏粉lg，魚粉lg，120目的玉米粉0.5g,葡萄糖2g,氯化鈉0.2g,硫酸猛0.3g，增效劑0.1g,水IOOOml的比例配制,按步驟五的方法培養(yǎng)，所選增效劑為硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鐵和硫酸銅按等量配比而成；
七、用1000L發(fā)酵罐，培養(yǎng)基分別以步驟六中100L種子發(fā)酵罐的配比乘以七倍，發(fā)酵方法同步驟五，培養(yǎng)24h。
[0015]所述固體基料按以下成分配制:花生殼或棉籽殼500kg，玉米粉150kg，豆柏粉200kg,麩皮100kg,葡萄糖5kg,總重量為1000kg,攪拌混勻后加200kg水潤濕后蒸煮滅菌，待冷卻至35°C時，加入液體菌液的培養(yǎng)的步驟七中的發(fā)酵液700kg。
【權(quán)利要求】
1.一種乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合培養(yǎng)固態(tài)微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于:(一)、液體菌液的培養(yǎng)具體步驟為: 一、平板培養(yǎng):乳酸桿菌和酵母菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配料為葡萄糖IOg,蛋白胨2g,牛肉膏3g,酵母浸膏5g,氯化鈉5g,硫酸猛5mg,瓊脂15g,蒸懼水1000ml，PH 值為 7，121°C滅菌，32°C培養(yǎng) 30h ； 二、試管接種:取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，其培養(yǎng)基配料為葡萄糖10g，蛋白胨2g，牛肉膏3g，酵母浸膏5g，氯化鈉5g，硫酸錳5mg，蒸餾水1000ml，PH值為7，121°C滅菌，35 °C培養(yǎng)24h ； 三、分別用三角瓶接種100ml，其培養(yǎng)基同步驟二，121°C滅菌，35°C培養(yǎng)24h； 四、分別用三角瓶接種1000ml，其培養(yǎng)基同步驟三； 五、用IOL種子發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)液為7L，培養(yǎng)基同步驟三，PH值為6，121°C滅菌30分鐘，培養(yǎng)溫度為37°C,轉(zhuǎn)速150r/min,通氣量2vvm,指每分鐘通入單位發(fā)酵體積m3的空氣體積m3,培養(yǎng)18h,再厭氧培養(yǎng)18h ； 六、用100L種子發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)液為100L，培養(yǎng)基按豆柏粉lg，魚粉lg，120目的玉米粉0.5g,葡萄糖2g,氯化鈉0.2g,硫酸猛0.3g，增效劑0.1g,水IOOOml的比例配制,按步驟五的方法培養(yǎng)，所選增效劑為硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鐵和硫酸銅按等量配比而成； 七、用1000L發(fā)酵罐，培養(yǎng)基分別以步驟六中100L種子發(fā)酵罐的配比乘以七倍，發(fā)酵方法同步驟五，培養(yǎng)24h ； (二)固體基料配制，按以下成分配制:花生殼或棉籽殼500kg，玉米粉150kg，豆柏粉200kg,麩皮100kg,葡萄糖5kg,總重量為1000kg,攪拌混勻后加200kg水潤濕后蒸煮滅菌，待冷卻至35°C時，加入液體菌液的培養(yǎng)的步驟七中的發(fā)酵液700kg ； (三)固體基料與液體菌液的混勻，具體制備步驟為:把固體基料與液體菌液按重量百分比為1:1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養(yǎng)室，恒溫40°C，通風(fēng)，淺盤發(fā)酵36小時，可見淺盤表面和內(nèi)層均長滿白色菌體，提高溫度至60°C，加大風(fēng)量，干燥出料，測得活菌濃度IX 109cfu/g，粉碎分裝，即得產(chǎn)品。
【文檔編號】A23K1/16GK103875912SQ201210555758
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月20日
【發(fā)明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權(quán)汗, 李之詳, 許團(tuán)輝 申請人:青島中仁藥業(yè)有限公司