專利名稱：足莖毛蘭組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蘭科植物的生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種足莖毛蘭組培快繁方法。
背景技術(shù)：
足莖毛蘭〔Eria coronaria (Lindl. ) Rchb. f.〕屬蘭科毛蘭屬附生植物，假鱗莖密集，圓柱形，葉長(zhǎng)橢圓形或倒卵狀橢圓形?；ㄐ蝽斏ǔＩ习氩客鈴?，總狀，略短于葉，具數(shù)花；花白色，唇瓣側(cè)裂片有褐色脈，中裂片黃色；中萼片橢圓狀披針形，側(cè)萼片三角狀披針形；花瓣矩圓狀披針形，唇瓣矩圓形?；ㄆ?0 —11月。生于林中樹干或巖石上；海拔1300— 2000米。全世界共370種，我國(guó)有43種，貴州有8種，分布于海南、廣西、貴州、云南南部至西北部和西藏東南部；貴州、云南和廣西是我國(guó)野生足莖毛蘭的自然分布中心。足莖毛蘭花瓣潔白，清秀而唇瓣極富色彩變化，可作盆栽，供室內(nèi)外裝飾或插花材料，在毛蘭屬中極具重要的觀賞價(jià)值，是一個(gè)正待開發(fā)的蘭花種?！?br> 由于人類對(duì)蘭花資源的過度索取及生態(tài)環(huán)境的不斷惡化，造成其野生種群數(shù)量下降，極具觀賞開發(fā)價(jià)值的蘭花幾乎瀕臨滅絕，基于此，蘭科植物所有野生種都在《瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約》(CITES)附錄I和II的保護(hù)范圍之內(nèi)，受到國(guó)際保護(hù)。野生狀態(tài)的足莖毛蘭繁殖困難，因其種子無胚乳，在野外需與真菌共生才能萌發(fā)，種子萌發(fā)率極低；傳統(tǒng)的分株繁殖法，周期長(zhǎng)，繁殖系數(shù)低，每年只能增殖I 3倍。采用組培快繁技術(shù)通常有利于解決其繁殖困難和種苗的不足，并在短期內(nèi)提供大量種苗，以保護(hù)其野生種質(zhì)資源和野生種群，為足莖毛蘭的有效保護(hù)、產(chǎn)業(yè)開發(fā)，優(yōu)良品種的培育及種源基地培育建設(shè)提供技術(shù)支撐。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在專門配制的培養(yǎng)基上，通過人工無菌播種的方法，經(jīng)過原球莖體的獲得、誘導(dǎo)分化、壯苗生根和試管苗移栽等繁殖步驟，獲得原球莖及芽混合體，利用分化的小苗進(jìn)行增殖，在短時(shí)間內(nèi)獲得大量整齊劃一的試管苗，通過壯苗生根培養(yǎng)能形成完整植株。通過發(fā)明人的努力，完成了足莖毛蘭組培快繁方法的研究工作。本發(fā)明足莖毛蘭的組培快繁方法，其過程包括以下步驟
(I)外植體的建立選取生長(zhǎng)健壯的足莖毛蘭母株，在開花時(shí)進(jìn)行人工授粉，選取人工授粉120天左右發(fā)育至基本成熟而未開裂的果實(shí)作為外植。(2)原球莖萌發(fā)階段選用飽滿的果實(shí)用75%的酒精浸泡30秒，置于O. 1%的升汞溶液中消毒20分種，無菌水沖洗4-5次，切開果實(shí)，用接種針將乳白色粉末狀胚接種到1/2MS添加10%椰子乳的培養(yǎng)基上，20天左右形成原球莖。(3)增殖培養(yǎng)階段為獲得更多的種苗，利用原球莖接種在1/2MS附加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)2毫克/升及α-奈乙酸(NAA)O. I毫克/升培養(yǎng)基上，經(jīng)90天培養(yǎng)，形成芽的叢生植株。(4)壯苗生根階段將長(zhǎng)成的叢生植株分開，接種到添加吲哚乙酸(IBA) O. 2毫克/升的1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，60天后長(zhǎng)成具2-3條根、2-3片葉的完整植株。(5)練苗及移栽當(dāng)足莖毛蘭試管苗長(zhǎng)至3-4厘米時(shí)，移栽前在溫室中自然光照下煉苗10天左右，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入碎樹皮基質(zhì)中。溫室保持15-25°c的溫度、70%以上的濕度、78-80%的遮陰并通風(fēng)，足莖毛蘭即可正常生長(zhǎng)，種苗的移栽成活率可達(dá)93%以上。通常15天澆一次有機(jī)肥(發(fā)酵的油枯水)或葉面肥，其濃度為水稀釋1000倍質(zhì)量比，薄肥勤施，并加強(qiáng)病蟲害管護(hù)措施即可建立足莖毛蘭種苗的規(guī)?；嘤夹g(shù)體系。本發(fā)明的有益效果是通過足莖毛蘭組培快繁技術(shù)研究，可大大提高種苗的繁殖系數(shù)，獲得品相高度一致的種苗，便于大規(guī)模的工廠化種植，此項(xiàng)技術(shù)可用于其它蘭科植物的研究和開發(fā)，但必須具體情況具體分析，充分發(fā)掘研究各特種特殊情況，才能為其它珍稀植物的研究提供技術(shù)支撐，在珍稀植物的保護(hù)開發(fā)及可持續(xù)利用方面具有十分重要的意 義。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
(I)外植體的建立選取生長(zhǎng)健壯的足莖毛蘭母株，在開花時(shí)進(jìn)行人工授粉，選取人工授粉120天左右發(fā)育至基本成熟而未開裂的果實(shí)做為外植體。(2)原球莖萌發(fā)階段選用飽滿的果實(shí)用75%的酒精浸泡30秒，置于0.1%的升汞溶液中消毒20分種，無菌水沖洗4-5次，切開果實(shí)，用接種針將乳白色粉末狀胚接種到1/2MS添加10%椰子乳的培養(yǎng)基上，20天左右形成原球莖。(3)增殖培養(yǎng)階段為獲得更多的種苗，利用原球莖接種在1/2MS附加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)2毫克/升及α-奈乙酸(NAA)O. I毫克/升培養(yǎng)基上，經(jīng)90天培養(yǎng)，形成芽的叢生植株，繁殖系數(shù)可達(dá)3-4。(4)壯苗生根階段將長(zhǎng)成的叢生植株分開，接種到添加吲哚乙酸(IBA) O. 2毫克/升的1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，50天后長(zhǎng)成具2-3條根、2-3片葉的完整植株。(5)練苗及移栽當(dāng)足莖毛蘭試管苗長(zhǎng)至3-4厘米時(shí)，移栽前在溫室中自然光照下煉苗10天左右，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入碎樹皮基質(zhì)中。溫室保持15-25°c的溫度、70%以上的濕度、78-80%的遮陰并通風(fēng)，足莖毛蘭即可正常生長(zhǎng)，種苗的移栽成活率可達(dá)93%以上。通常15天澆一次有機(jī)肥(發(fā)酵的油枯水)或葉面肥1000倍，薄肥勤施，并加強(qiáng)病蟲害管護(hù)措施即可建立足莖毛蘭種苗的規(guī)模化培育技術(shù)體系，目前栽種足莖毛蘭種苗I萬株。本發(fā)明的有益效果是通過足莖毛蘭組培快繁技術(shù)研究，可大大提高種苗的繁殖系數(shù)，獲得品相高度一致的種苗，便于大規(guī)模的工廠化種植，此項(xiàng)技術(shù)可廣泛用于其它蘭科植物的研究和開發(fā)，并為其它珍稀植物的開發(fā)提供技術(shù)支撐，在珍稀植物的保護(hù)及可持續(xù)利用方面具有十分重要的意義。
權(quán)利要求
1.足莖毛蘭的組培快繁方法，其特征是方法包括以下步驟 ①外植體的建立選取生長(zhǎng)健壯的足莖毛蘭母株，在開花時(shí)進(jìn)行人工授粉，選取人工授粉120天左右發(fā)育至基本成熟而未開裂的果實(shí)作為外植； ②原球莖萌發(fā)階段選用飽滿的果實(shí)用75%的酒精浸泡30秒，置于O.1%的升汞溶液中消毒20分種，無菌水沖洗4-5次，切開果實(shí)，用接種針將乳白色粉末狀胚接種到1/2MS添加10%椰子乳的培養(yǎng)基上，20天左右形成原球莖； ③增殖培養(yǎng)階段為獲得更多的種苗，利用原球莖接種在1/2MS附加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)2毫克/升及α-奈乙酸(NAA)O. I毫克/升培養(yǎng)基上，經(jīng)90天培養(yǎng)，形成芽的叢生植株； ④壯苗生根階段將長(zhǎng)成的叢生植株分開，接種到添加吲哚乙酸(IBA)O. 2毫克/升的1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，60天后長(zhǎng)成具2-3條根、2-3片葉的完整植株； ⑤練苗及移栽當(dāng)足莖毛蘭試管苗長(zhǎng)至3-4厘米時(shí)，移栽前在溫室中自然光照下煉苗10天左右，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入碎樹皮基質(zhì)中；溫室保持15-25°C的溫度、70%以上的濕度、78-80%的遮陰并通風(fēng)，足莖毛蘭即可正常生長(zhǎng)，種苗的移栽成活率可達(dá)93%以上；通常15天澆一次有機(jī)肥(發(fā)酵的油枯水)或葉面肥，其濃度為水稀釋1000倍質(zhì)量比，薄肥勤施，并加強(qiáng)病蟲害管護(hù)措施即可建立足莖毛蘭種苗的規(guī)模化培育方法。
全文摘要
本發(fā)明公開了足莖毛蘭組培快繁方法，方法包括以下步驟(1)外植體的建立，(2)原球莖萌發(fā)階段，(3)增殖培養(yǎng)階段，(4)壯苗生根階段和(5)練苗及移栽；當(dāng)足莖毛蘭試管苗長(zhǎng)至3-4厘米時(shí)，移栽前在溫室中自然光照下煉苗10天左右后，溫室保持15-25℃的溫度、70%以上的濕度、78-80%的遮陰并通風(fēng)，足莖毛蘭即可正常生長(zhǎng)，種苗的移栽成活率可達(dá)93％以上；本發(fā)明的有益效果是通過足莖毛蘭組培快繁方法，可大大提高種苗的繁殖系數(shù)，獲得品相高度一致的種苗，便于大規(guī)模的工廠化種植；對(duì)蘭科植物的研究和開發(fā)，注意品種具體屬性研究，再選用具體方法，在珍稀植物保護(hù)開發(fā)及可持續(xù)利用方面具有十分重要的意義。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102884979SQ20121034343
公開日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2012年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月17日
發(fā)明者王蓮輝, 姜運(yùn)力, 馮育才, 潘德權(quán), 李叢瑞 申請(qǐng)人:貴州省林業(yè)科學(xué)研究院