專(zhuān)利名稱(chēng)：一種雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)生物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的培育方法。
背景技術(shù)：
鮭鱒魚(yú)是目前世界上主要養(yǎng)殖的魚(yú)類(lèi)之一，自然條件下它們多生長(zhǎng)于常年水溫不超過(guò)20°C、水質(zhì)為貧營(yíng)養(yǎng)性、沒(méi)有化學(xué)污染和有機(jī)污染的低溫泉水或清澈的溪流中，因此又稱(chēng)之為冷水性魚(yú)類(lèi)。由于鮭科魚(yú)類(lèi)對(duì)生存水質(zhì)有非常高的要求，略有污染即無(wú)法生存，所以鮭鱒魚(yú)體干凈，無(wú)任何污染，是名副其實(shí)的無(wú)公害綠色食品，吃起來(lái)放心。另外，鮭鱒魚(yú)是一種高蛋白、高脂肪、低膽固醇(膽固醇含量微乎其微)的魚(yú)類(lèi)。和其它魚(yú)相比，鮭鱒魚(yú)含有一般魚(yú)類(lèi)所缺乏的甘氨酸，維生素A、B的含量也高于其它魚(yú)類(lèi)，微量元素鐵的含量更是 其它魚(yú)類(lèi)所不及。鮭鱒魚(yú)肉質(zhì)鮮嫩，無(wú)邪味，無(wú)腥味，無(wú)需刮鱗，人每周吃?xún)纱熙q鱒魚(yú)就可以預(yù)防血栓病的發(fā)生。意大利專(zhuān)家一項(xiàng)最新的研究結(jié)果表明，吃含有鮭鱒魚(yú)的保健品能夠大幅度減少心臟病患者突然死亡的風(fēng)險(xiǎn)。每天吃I克用鮭鱒魚(yú)魚(yú)油提煉的DHA，將會(huì)減少心臟病發(fā)作時(shí)突然死亡的風(fēng)險(xiǎn)。因此，鮭鱒魚(yú)是一種肉質(zhì)鮮美且具有保健價(jià)值的魚(yú)類(lèi)。由于其自身的品質(zhì)和對(duì)生活環(huán)境的特殊要求，決定了它綠色、環(huán)保營(yíng)養(yǎng)食品的性質(zhì)，因此頗受消費(fèi)者的青睞。鮭鱒魚(yú)是我國(guó)目前主要的冷水性養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，由于長(zhǎng)期近親繁殖、缺乏系統(tǒng)選育等原因，導(dǎo)致養(yǎng)殖個(gè)體出現(xiàn)了性早熟、個(gè)體小型化、病害滋生等問(wèn)題，不能滿足消費(fèi)者對(duì)大規(guī)格鮭鱒魚(yú)的需求，造成養(yǎng)殖效益下降。研究表明雜交能夠急劇的動(dòng)搖遺傳的保守性，使雜種的遺傳性富于游動(dòng)性，具有更大的可塑性，從而能迅速和顯著地提高雜種的生活力，進(jìn)而獲得雜種優(yōu)勢(shì)；雜種能豐富遺傳結(jié)構(gòu)，通過(guò)雜交將兩個(gè)以上遺傳基礎(chǔ)不同的品種或種以上個(gè)體的基因自由組合，出現(xiàn)新的遺傳類(lèi)型，繼而人們可以選擇優(yōu)良的個(gè)體，培育成新品種。正常情況下，雌魚(yú)的性成熟比雄魚(yú)晚I年，由于性成熟又引起生產(chǎn)停滯、肉質(zhì)下降，為了避免因性成熟早而影響魚(yú)的產(chǎn)量和質(zhì)量，進(jìn)行雜交全雌性養(yǎng)殖是一個(gè)有效提高養(yǎng)殖效益的途徑。國(guó)內(nèi)對(duì)鮭鱒魚(yú)雜交苗種制備的研究主要集中在虹鱒與溪紅點(diǎn)鮭的雜交苗種制備、虹鱒與山女鱒的雜交苗種制備、虹鱒與金鱒的雜交苗種制備等，對(duì)鮭鱒魚(yú)全雌苗種制備的研究主要集中在虹鱒純種全雌苗種的制備方面，其方法為用人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育技術(shù)獲得全雌二倍體苗種，再通過(guò)投喂雄性激素誘導(dǎo)全雌二倍體苗種成為偽雄魚(yú)，培育至性成熟后利用原雌魚(yú)與假雄魚(yú)進(jìn)行人工繁殖。該方法操作相對(duì)繁瑣，需要先獲得全雌二倍體苗種，再對(duì)苗種進(jìn)行雄激素誘導(dǎo)，培育至性成熟，待偽雄魚(yú)性腺發(fā)育成熟后再進(jìn)行后續(xù)受精工作，整個(gè)過(guò)程耗時(shí)將近3年，因此該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且由于是純種繁育，故培育的種苗缺少雜交優(yōu)勢(shì)。金鱒(Oncorhynchus mykiss)體呈金黃色,是虹鱒的一個(gè)體色分離種，為常見(jiàn)的冷水性養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)。目前對(duì)雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的制備技術(shù)的研究尚未見(jiàn)有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種雜交全雌金鱒魚(yú)苗種培育方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的培育方法，包括以下步驟I)用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)；2)使硬頭鱒親魚(yú)卵子與金鱒偽雄魚(yú)精子受精；3)受精卵孵化。其中，步驟I)所述性成熟期的金鱒親魚(yú)為3齡以上，體重彡2kg。
其中，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)的方法為，將含雄性激素40-100mg/kg的魚(yú)飼料投喂金鱒親魚(yú)70-100d ;之后，改用不含雄性激素的魚(yú)飼料投喂4-6個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)。進(jìn)一步地，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)的方法為，將含雄性激素40-50mg/kg的魚(yú)飼料投喂金鱒親魚(yú)85-90d ;之后，改用不含雄性激素的魚(yú)飼料投喂5個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)。優(yōu)選地，上述將含雄性激素40-50mg/kg的魚(yú)飼料投喂金鱒親魚(yú)的飼喂時(shí)間為90d。其中，步驟I)的雄性激素為17 a甲基睪丸酮(17 a-methyltestosterone)。進(jìn)一步地，所述17 a甲基睪丸酮添加入飼料前，用濃度> 60%的酒精進(jìn)行溶解，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :1 4ml。將溶解后的17 a甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后均勻噴灑于親魚(yú)飼料上，攪動(dòng)，使混合均勻，備用。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的培育方法中，步驟2)所述金鱒偽雄魚(yú)精子是通過(guò)以下方法獲得的機(jī)械破碎偽雄魚(yú)精巢，獲得精液后，將精子激活液與偽雄魚(yú)精液按照體積比20-30 1混合進(jìn)行激活，所述精子激活液IL配方為NaCl 7. 60g, KCl 2. 98g，CaCl2 2H20 0. 37g, MgCl2 6H20 0. 31g, NaHCO3 0. 21g，加蒸餾水至 1000ml，調(diào)節(jié) pH 值為8. 0-10. 0 ;激活條件為2-6°C激活3-4h。優(yōu)選地，將精子激活液與偽雄魚(yú)精液按照體積比25 1混合進(jìn)行激活，所述精子激活液PH值為9. 0 ;激活條件為4°C激活3h。干法受精法，取硬頭鱒雌魚(yú)卵與激活后的金鱒偽雄魚(yú)精液進(jìn)行受精。本發(fā)明方法中，步驟3)所述孵化條件為受精卵在8_10°C養(yǎng)殖用水中孵化45-65d。本發(fā)明方法中，所述金鱒為紅眼金鱒。本發(fā)明提供了上述方法在雜交全雌金鱒魚(yú)苗種育種工作中的應(yīng)用。本發(fā)明使用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)；使硬頭鱒親魚(yú)卵子與金鱒偽雄魚(yú)精子受精，孵化，獲得雜交全雌金鱒魚(yú)苗種。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明方法制備的雜交全雌金鱒魚(yú)孵化期間受精卵發(fā)眼率為81%以上，苗種孵化率達(dá)到92%以上，得到的魚(yú)苗經(jīng)檢測(cè)，雌性率為100%，苗種金鱒率(體色為金黃色)達(dá)到90%以上，苗種培養(yǎng)30天增重率為122%以上，成活率達(dá)到98%以上。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚(yú)苗種培育方法與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種相比，既保持金鱒率不變，又獲得了具備雜交和全雌雙重優(yōu)勢(shì)的金鱒苗種，且制苗時(shí)間短，僅9個(gè)月左右，大大縮短了養(yǎng)殖周期，降低了養(yǎng)殖成本，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)價(jià)值。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。本發(fā)明的硬頭鱒親魚(yú)和紅眼金鱒親魚(yú)均為北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所由北歐瑪生物科技有限公司購(gòu)買(mǎi)的發(fā)眼卵培育而成。17a甲基睪丸酮購(gòu)自德國(guó)SIGMA公司，純度98%以上。本發(fā)明使用的精子激活液IL 配方為 NaCl 7. 60g，KCl 2. 98g，CaCl2 2H20 0. 37g，MgCl2 6H20 0. 31g, NaHCO3 0. 21g，加蒸餾水至 1000ml。實(shí)施例I雜交全雌苗種培育方法(I)
I、用純度為65%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :2ml，溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后，用噴壺均勻的噴于親魚(yú)飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為60mg/kg。反復(fù)攪動(dòng)，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚(yú)放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)100d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚(yú)飼料繼續(xù)飼喂4個(gè)月。在經(jīng)過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長(zhǎng)于下頜，下頜前端向上突起的投喂過(guò)17a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚(yú)即為假性雄魚(yú)(偽雄魚(yú))。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚(yú)后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，偽雄魚(yú)的出現(xiàn)率為95%。取出偽雄魚(yú)的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過(guò)濾，精液用pH值為8. 5的精子激活液稀釋(V/V=l: 20)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3h。魚(yú)卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚(yú)采用擠壓法將魚(yú)卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚(yú)為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚(yú)精液倒入有魚(yú)卵的水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比150:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)3次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入8°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)45天受精卵孵化出魚(yú)苗。孵化出的魚(yú)苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚(yú)受精卵發(fā)眼率達(dá)到82%，苗種孵化率達(dá)到95%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到93%。本發(fā)明方法說(shuō)明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例2雜交全雌苗種培育方法(2)I、用純度為70%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :1ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后，用噴壺均勻的噴于親魚(yú)飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為20mg/kg。反復(fù)攪動(dòng)，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. Ikg,性成熟的雌性紅眼金鱒親魚(yú)放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)120d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚(yú)飼料繼續(xù)飼喂5個(gè)月。在經(jīng)過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長(zhǎng)于下頜，下頜前端向上突起的投喂過(guò)17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚(yú)即為假性雄魚(yú)(偽雄魚(yú))。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)17a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚(yú)后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，偽雄魚(yú)的出現(xiàn)率為74%。取出偽雄魚(yú)的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過(guò)濾，精液用pH值為8. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 20)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3h。魚(yú)卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚(yú)采用擠壓法將魚(yú)卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚(yú)為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚(yú)精液倒入同一個(gè)水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比140:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)4 次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入8°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)55天受精卵孵化出魚(yú)苗。孵化出的魚(yú)苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚(yú)受精卵發(fā)眼率達(dá)到85%，苗種孵化率達(dá)到94%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到94%。本發(fā)明方法說(shuō)明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例3雜交全雌苗種培育方法(3)I、用純度為60%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img 2ml溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚(yú)飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為40mg/kg。反復(fù)攪動(dòng)，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. 15kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚(yú)放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)93d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚(yú)飼料繼續(xù)飼喂5個(gè)月。在經(jīng)過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長(zhǎng)于下頜，下頜前端向上突起的投喂過(guò)17a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚(yú)即為假性雄魚(yú)(偽雄魚(yú))。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚(yú)后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，偽雄魚(yú)的出現(xiàn)率為99%。取出偽雄魚(yú)的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過(guò)濾，精液用pH值為9. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 25)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3. 5h。魚(yú)卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚(yú)采用擠壓法將魚(yú)卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚(yú)為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚(yú)精液倒入同一個(gè)水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比145:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)4次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入9°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)53天受精卵孵化出魚(yú)苗。孵化出的魚(yú)苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚(yú)受精卵發(fā)眼率達(dá)到90%，苗種孵化率達(dá)到96%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到98%。本發(fā)明方法說(shuō)明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例4雜交全雌苗種培育方法(4)I、用純度為70%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :3ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚(yú)飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為50mg/kg。反復(fù)攪動(dòng)，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。 2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. Ikg,性成熟的雌性紅眼金鱒親魚(yú)放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)90d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚(yú)飼料繼續(xù)飼喂5個(gè)月。在經(jīng)過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長(zhǎng)于下頜，下頜前端向上突起的投喂過(guò)17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚(yú)即為假性雄魚(yú)(偽雄魚(yú))。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)17a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚(yú)后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，偽雄魚(yú)的出現(xiàn)率為100%。取出偽雄魚(yú)的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過(guò)濾，精液用pH值為9. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 25)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為3. 5h。魚(yú)卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚(yú)采用擠壓法將魚(yú)卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚(yú)為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚(yú)精液倒入同一個(gè)水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比150:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)4次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入10°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)55天受精卵孵化出魚(yú)苗。孵化出的魚(yú)苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚(yú)受精卵發(fā)眼率達(dá)到88%，苗種孵化率達(dá)到95%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到97%。本發(fā)明方法說(shuō)明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例5雜交全雌苗種培育方法(5)I、用純度為75%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :4ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚(yú)飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為100mg/kg。反復(fù)攪動(dòng)，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚(yú)放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)70d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚(yú)飼料繼續(xù)飼喂6個(gè)月。在經(jīng)過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長(zhǎng)于下頜，下頜前端向上突起的投喂過(guò)17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚(yú)即為假性雄魚(yú)(偽雄魚(yú))。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚(yú)后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，偽雄魚(yú)的出現(xiàn)率為85%。取出偽雄魚(yú)的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過(guò)濾，精液用pH值為10. 0的精子激活液稀釋(v/v=l 25)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為4h。魚(yú)卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚(yú)采用擠壓法將魚(yú)卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚(yú)為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚(yú)精液倒入有魚(yú)卵的水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比130:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)5次，清洗。
·
3、將受精卵清洗干凈后即可放入9°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)52天受精卵孵化出魚(yú)苗。孵化出的魚(yú)苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。采用該方法處理得到的雜交全雌魚(yú)受精卵發(fā)眼率達(dá)到81%，苗種孵化率達(dá)到92%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到90%。本發(fā)明方法說(shuō)明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例6雜交全雌苗種培育方法(6)I、用純度為65%的酒精溶解17 a甲基睪丸酮，17 a甲基睪丸酮與酒精的質(zhì)量體積比為Img :2ml。溶解后的甲基睪丸酮溶液用清水稀釋10倍后用噴壺均勻的噴于親魚(yú)飼料上，使飼料中17a甲基睪丸酮的含量為80mg/kg。反復(fù)攪動(dòng)，使其混合均勻，在通風(fēng)處陰干備用。2、挑選3齡以上，規(guī)格達(dá)到2. 2kg，性成熟的雌性紅眼金鱒親魚(yú)放入單獨(dú)的養(yǎng)殖池中，投喂步驟I中已配好的含有17 a甲基睪丸酮的飼料，按照常規(guī)的飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)80d，之后改投正常的不含17 a甲基睪丸酮的親魚(yú)飼料繼續(xù)飼喂6個(gè)月。在經(jīng)過(guò)17 a甲基睪丸酮誘導(dǎo)后又正常飼喂的雌性紅眼金鱒中，挑選在形態(tài)上上頜稍長(zhǎng)于下頜，下頜前端向上突起的投喂過(guò)17 a甲基睪丸酮飼料的紅眼金鱒親魚(yú)即為假性雄魚(yú)(偽雄魚(yú))。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明通過(guò)17a甲基睪丸酮誘導(dǎo)雌性紅眼金鱒親魚(yú)后，獲得預(yù)期的性腺逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，偽雄魚(yú)的出現(xiàn)率為86%。取出偽雄魚(yú)的精巢，用研缽磨碎精巢，紗布過(guò)濾，精液用pH值為9. 0的精子激活液稀釋(V/V=l: 30)，存放于冰箱4°C條件下將精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活時(shí)間為4h。魚(yú)卵采用干法受精。先將發(fā)育成熟的硬頭鱒雌魚(yú)采用擠壓法將魚(yú)卵擠入干凈的水盆內(nèi)，每4尾雌魚(yú)為I組。再將經(jīng)激活的紅眼金鱒偽雄魚(yú)精液倒入有魚(yú)卵的水盆內(nèi)，立即攪拌均勻，按與激活精液的體積比130:1加入孵化用水，輕輕攪拌，Imin后將水倒出，如此反復(fù)3次，清洗。3、將受精卵清洗干凈后即可放入8°C的孵化用水的孵化桶中正常孵化。經(jīng)55天受精卵孵化出魚(yú)苗。孵化出的魚(yú)苗即為體色為金黃色的雜交全雌金鱒。
采用該方法處理得到的雜交全雌魚(yú)受精卵發(fā)眼率達(dá)到85%，苗種孵化率達(dá)到95%，苗種雌性比率為100%，苗種金鱒率(即體色為金黃色)達(dá)到93%。本發(fā)明方法說(shuō)明與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種金鱒率相比，本發(fā)明方法獲得的雜交全雌金鱒苗種的金鱒率不變，同時(shí)雜交全雌金鱒苗種又具有雜交和全雌苗種的雙重優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例7本發(fā)明培育的雜交全雌苗種生長(zhǎng)速度和成活率實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用魚(yú)取實(shí)施例1-6培育得到的雜交全雌金鱒苗種，每個(gè)實(shí)施例取6000尾。純種硬頭鱒和純種金鱒各6000尾。平均規(guī)格為I. 5 I. 8g/尾魚(yú)苗。2、方法在水溫8°C條件下，將上述魚(yú)苗按品種不同和制備批次不同，分別放養(yǎng)在8個(gè)養(yǎng)殖池中，放養(yǎng)密度為3000尾/m2。投喂北京漢業(yè)科技有限公司的苗種料，每天投喂5次，投餌量為5%，水交換量為I次/2h。觀察并記錄30天各魚(yú)苗的體重和增長(zhǎng)情況。結(jié)果見(jiàn)表I。
表I不同魚(yú)苗飼喂30天增長(zhǎng)速度比較(X土SD)
權(quán)利要求
1.一種雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的培育方法，其特征在于，包括以下步驟 1)用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)； 2)使硬頭鱒雌魚(yú)親魚(yú)卵子與金鱒偽雄魚(yú)精子受精； 3)受精卵孵化。
2.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟I)所述性成熟期的金鱒親魚(yú)為3齡以上，體重彡2kg。
3.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)的方法為，將含雄性激素40-100mg/kg的魚(yú)飼料投喂金鱒親魚(yú)70-100d ;之后，改用不含雄性激素的魚(yú)飼料投喂4-6個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)。
4.如權(quán)利要求3所述的培育方法，其特征在于，步驟I)所述雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的雌性金鱒親魚(yú)的方法為，將含雄性激素40-50mg/kg的魚(yú)飼料投喂金鱒親魚(yú)85-95d ;之后，改用不含雄性激素的魚(yú)飼料投喂5個(gè)月，獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)。
5.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟I)的雄性激素為17α甲基睪丸酮。
6.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟2)所述金鱒偽雄魚(yú)精子是通過(guò)以下方法獲得的機(jī)械破碎偽雄魚(yú)精巢，獲得精液后，將精子激活液與偽雄魚(yú)精液按照體積比20-30 :1 進(jìn)行激活，所述精子激活液 IL 配方為 NaCl 7. 60g，KCl 2. 98g，CaCl2 ·2Η20 O. 37g，MgCl2 · 6H20 0. 31g，NaHCO3 0. 21g 加蒸餾水至 1000ml，調(diào)節(jié) pH 值為 8. 0-10. 0 ;激活條件為2_6°C 激活 3-4h。
7.如權(quán)利要求6所述的培育方法，其特征在于，將精子激活液與偽雄魚(yú)精液按照體積比25 1進(jìn)行激活，所述精子激活液pH值為9. O ;激活條件為4°C激活3h。
8.如權(quán)利要求I所述的培育方法，其特征在于，步驟3)所述孵化條件為受精卵在8-10°C養(yǎng)殖用水中孵化45-65d。
9.如權(quán)利要求1-8任一所述的培育方法，其特征在于，所述金鱒為紅眼金鱒。
10.權(quán)利要求1-9任一所述方法在雜交全雌金鱒魚(yú)苗種育種工作中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種雜交全雌金鱒魚(yú)苗種的培育方法。本發(fā)明使用雄性激素誘導(dǎo)性成熟期的金鱒親魚(yú)獲得具有雄性功能的金鱒偽雄魚(yú)；使硬頭鱒親魚(yú)卵子與金鱒偽雄魚(yú)精子受精，孵化，獲得雜交全雌金鱒魚(yú)苗種。孵化期間受精卵發(fā)眼率為81%以上，苗種孵化率達(dá)到92%以上，得到的魚(yú)苗經(jīng)檢測(cè)，雌性率為100%，苗種金鱒率(體色為金黃色)達(dá)到90%以上，苗種培養(yǎng)30天增重率為122%以上，成活率達(dá)到98%以上。本發(fā)明提供的雜交全雌金鱒魚(yú)苗種培育方法與純種金鱒交配產(chǎn)生的苗種相比，既保持金鱒率不變，又獲得了具備雜交和全雌雙重優(yōu)勢(shì)的金鱒苗種，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)價(jià)值。
文檔編號(hào)A01K61/00GK102812913SQ20121032075
公開(kāi)日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月31日
發(fā)明者徐紹剛 申請(qǐng)人:北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所