一種牡丹組織培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種牡丹組織培育方法，涉及一種花卉組培方法，屬于植物組織培養(yǎng)領域。其特征在于：將牡丹外植體消毒清洗，經過愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖，不定根誘導，煉苗。有益效果在于：可獲得大批組培苗滿足種植需要，成活率達95.5％，既可成批培育又可全面積種植組培苗，并且提早二年獲得無公害藥材，具有實用價值。
【專利說明】一種牡丹組織培育方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種花卉組培方法，屬于植物組織培養(yǎng)領域，具體的說是一種牡丹組織培育方法。
【背景技術】
[0002]牡丹原產于中國西部秦嶺和大巴山一帶山區(qū)，為多年生落葉小灌木，生長緩慢，株型小。牡丹是我國特有的木本名貴花卉，素有“國色天香”、“花中之王”的美稱，長期以來被人們當做富貴吉祥、繁榮興旺的象征。牡丹以洛陽牡丹、菏澤牡丹最富盛名。牡丹根皮入藥，名曰“丹皮”，可作為盆景植物觀賞，花朵顏色眾多，有粉色，紅色，白色等等，粉色以粉中冠，白色以景玉較為出名。牡丹不僅有觀賞價值，而且還具有很高的藥用價值。將牡丹的根加工制成“丹皮”，是名貴的中草藥。
[0003]目前公知的就牡丹栽培方法是采用扦插法、壓條法、分株和播種法進行繁殖，在歐美及日本等地區(qū)對桅子屬植物的分類、栽培及育種等方面有較為系統(tǒng)深入的研究，而我國對桅子屬種質資源的利用和開發(fā)力度尚顯不足。在國內各類文獻資料中只有少量的關于芍藥屬種質資源及園林應用、觀賞用桅子品種的組織培養(yǎng)等方面的報到，而關于牡丹的組織培養(yǎng)及種植的全套種植方法則未見報道。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種牡丹組織培育方法，針對現(xiàn)有技術沒有牡丹全套種植方法，從而設計研究出操作簡單，繁殖率高，可大量生產牡丹試管苗的培育方法。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述一種牡丹組織培育方法，其特征在于:將牡丹外植體消毒清洗，經過愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖，不定根誘導，煉苗；其具體技術方案如下:`
[0006]a.外植體的選擇和消毒:選用當年新發(fā)的莖尖，剪下莖尖經水洗，在超凈工作臺上用70%的乙醇處理IOs,再用0.1 %升萊消毒,浸泡并振蕩6~8min,無菌水清洗4~6次，用濾水紙吸干水分備用；
[0007]b.培養(yǎng):將消毒后的牡丹莖尖剪成小塊，形成愈傷組織接種在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天，培養(yǎng)溫度為20~25°C，光照強度2000LUX，每天光照14h，進行愈傷組織誘導與分化；分化形成叢芽，培養(yǎng)的不定芽單個切開轉接在培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)，形成增殖體的幼苗轉接到1/2MS+IAA 0.2mg/L的培養(yǎng)基中，25~30天即有愈傷組織分化形成的芽叢；
[0008]c.生根培養(yǎng):將大而健壯的芽轉接至生根培養(yǎng)基MS+IBA 0~0.05mg/L 15~21天生根；
[0009]d.煉苗:是將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5~7天，取出幼苗洗凈培養(yǎng)基后移植在裝有腐質土和泥炭1:1并加少許腐質葉為基質的營養(yǎng)袋內，澆水，在1000~2000LX中光照8~12h，濕度大于70%條件下練苗I個月，當葉達6~10片，高達6~8cm時移栽種植；[0010]e.天然條件下進行種植，選擇海拔800~2500m，滿足日照年平均6h/日、年平均最高溫度不高于18°C、月平均最高溫度在11~23°C、最低可達0°C的條件；滿足地下5cm土溫年平均最高溫度不高于16°C、月平均最高溫度在9~20°C、最低可達9°C以下的條件。[0011 ] 所述愈傷組織誘導接種在MS培養(yǎng)基加含NAA0.2~0.3mg/L培養(yǎng)基上，光照10~16h，濕度大于70%條件下直接誘導產生叢芽，25~30天開始萌動；再經8~14天有叢芽出現(xiàn);7~15天叢芽長葉。
[0012]所述不定芽增殖接種在1/2MS+IBA 0.2mg/L的培養(yǎng)基中，25~30天便可形成幼苗；增殖培養(yǎng)產生的新叢芽，葉變綠，2~3cm時，進一步轉接進行增殖培養(yǎng)或繼代培養(yǎng)。
[0013]所述生根培養(yǎng)是接至生根培養(yǎng)基MS+NAA 0~0.05mg/L 15~21天生根，練苗后移栽。
[0014]本發(fā)明所述的一種牡丹組織培育方法，有益效果在于:可獲得大批組培苗滿足種植需要，成活率達95.5 %，既可成批培育又可全面積種植組培苗，并且提早二年獲得無公害藥材，具有實用價值。
【具體實施方式】
[0015]通過本發(fā)明的實施例，對本發(fā)明的上述內容再做進一步的詳細說明
[0016]實施例1:
[0017]1.外植體材料的采取和處理:
[0018]選擇牡丹6月生長茂盛無病的母株新發(fā)幼嫩莖尖葉為外殖體材料，采集野生或家種牡丹全株移種在花盒中，用清水洗葉，待新葉長出，從母株上剪下活莖尖用自來水沖洗15min，除去葉表面的塵土和絨毛，將莖尖放入70%的乙醇中翻轉20s，除去葉表面的蠟質物后用清水沖洗葉面除去乙醇，放入0.1%升汞液中浸泡15min消毒，無菌水洗凈后剪成Icm2小方塊，葉背面平放于培養(yǎng)基中，每瓶放4塊外植體，蓋緊瓶蓋，用保鮮袋封好瓶口，在無菌操作臺上完成接種；
[0019]2.愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖和不定根誘導:
[0020]①愈傷組織誘導與分化:在無菌條件下，從消毒后莖尖上剪下lcm2小葉塊，接種在MS培養(yǎng)基加含6-BA 0.25mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基上，在25°C，光照lOOOLx，光照12h，濕度大于70%條件下:直接誘導產生叢芽，30天開始萌動；再經14天有叢芽出現(xiàn)，15天叢芽長葉；
[0021]②不定芽增殖:取出已長葉叢芽單個切開，在MS培養(yǎng)基加含6-BA0.5mg/L+NAA
0.3mg/L培養(yǎng)基上，進行增殖培養(yǎng)；40~60天便可形成幼苗，取其高4~5cm的幼苗進行生根培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)產生的新叢芽，葉變綠，2~3cm，可一進轉接進行增殖培養(yǎng)或繼代培養(yǎng)；
[0022]③不定根誘導:取出增殖培養(yǎng)長出高4cm的幼苗，單個切開，轉接到1/2MS+IBA
0.2mg/L培養(yǎng)中，轉接后151天，開始生根，40天根達3條以上，葉6片，高6cm的試菅苗可取出練苗；
[0023]3.煉苗:
[0024]將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5天，取出幼苗用清水洗凈培養(yǎng)基移植在營養(yǎng)袋中，營養(yǎng)袋內裝有腐質土和紅土 1:1混均，加少許腐質葉為基質，繞清水，保濕控制光照2000Lx，光照12h，濕度大于70%條件下，練苗I月成活達92.5%，葉10片，高6cm移栽在大田中；
[0025]4.天然條件下種植:
[0026]選擇海 拔800m，氣溫18°C，濕度在75%，滿足日照要求:0.8h/日，株行間距20cm。
【權利要求】
1.一種牡丹組織培育方法，包括外植體消毒清洗，經過愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖，不定根誘導，煉苗，其特征在于:外植體為當年新發(fā)的莖尖，使其成為愈傷組織后，在進行培養(yǎng)形成芽叢，在轉接至生根培養(yǎng)基后煉苗。
2.如權利要求1所述一種牡丹組織培育方法，其特征在于:所述煉苗是將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5~7天，取出幼苗洗凈培養(yǎng)基后移植在裝有腐質土和泥炭I: I并加少許腐質葉為基 質的營養(yǎng)袋內，澆水，在1000~2000Lx中光照8~12h，濕度大于70%條件下練苗I個月，當葉達6~10片，高達6~8cm時移栽種植。
【文檔編號】A01H4/00GK103621399SQ201210297136
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2012年8月20日 優(yōu)先權日:2012年8月20日
【發(fā)明者】閻立燕 申請人:閻立燕