專利名稱：羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物遺傳育種領(lǐng)域，涉及誘導(dǎo)植物多倍體的方法，尤其是一種羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
多倍體(polyploid)是指體細(xì)胞具有2個(gè)以上染色體組的植物。自1937年發(fā)現(xiàn)秋水仙素(colchicine)可誘導(dǎo)染色體加倍后，人們開始植物多倍體誘導(dǎo)的研究。目前，采用秋水仙素離體誘導(dǎo)同源四倍體是獲得多倍體植株的主要途徑。羅漢果(葫蘆科(Cucurbitaceae)羅漢果屬(Siraitia)植物羅漢果(Siraitia grosvenorii))選育中，蔣水元等也主要采用一定濃度的秋水仙素處理離體組培苗獲得 多倍體(無籽羅漢果選育的初步研究[J].廣西植物，2009，29 (4) :506-509)。然而，采用秋水仙素處理毒性大；在離體條件進(jìn)行處理，需要具備較高的組織培養(yǎng)條件；組培苗處理后普遍存在嵌合體，需要多代鑒定和倍性純化，操作程序復(fù)雜，工作量大。微管抑制劑Oryzalin (氨磺靈)是誘導(dǎo)四倍體的新型化學(xué)誘導(dǎo)劑，誘導(dǎo)機(jī)理與秋水仙素相似，具有植物多倍體誘導(dǎo)效率高、毒性小的特點(diǎn)，是替代秋水仙素的新產(chǎn)品，現(xiàn)已用于百合、西瓜等植物多倍體誘導(dǎo)中。然而，不同植物特性不同，采用Oryzalin處理的方式和效果也存在很大差異。未見Oryzalin在誘導(dǎo)羅漢果多倍體方面的研究和報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種操作程序簡(jiǎn)便、誘導(dǎo)效率高、不產(chǎn)生嵌合體的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，采用Oryzalin浸泡處理授粉后的羅漢果雌花，然后用清水清洗解除。授粉是羅漢果雌花開放的第I天，采用新鮮開放雄花花粉進(jìn)行。授粉后是羅漢果雌花授粉后24h 48h。Oryzalin浸泡處理使用30 U M的Oryzalin水溶液。Oryzalin浸泡處理持續(xù)24h。該方法還包括收獲處理果實(shí)、播種育苗及染色體鑒定步驟。收獲處理果實(shí)是待雌花膨大形成果實(shí)且果實(shí)顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時(shí)采摘果實(shí)。播種育苗及染色體鑒定是剝?nèi)」麑?shí)中的種子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。羅漢果生殖生物研究表明，受精后48小時(shí)內(nèi)，花粉管伸長(zhǎng)通過花柱進(jìn)入胚囊(薛妙男，楊小華.羅漢果雙受精過程的細(xì)胞學(xué)觀察[J].廣西植物，1995，15 (4) :358-362)。由此，發(fā)明人通過采用微管抑制劑Oryzalin田間浸泡處理授粉后一定時(shí)間的羅漢果雌花，再用清水清洗解除及收獲處理果實(shí)、播種育苗、染色體鑒定等步驟，誘導(dǎo)合子染色體加倍，從而獲得多倍體。本發(fā)明解決了羅漢果多倍體的嵌合體問題，簡(jiǎn)化了誘導(dǎo)的操作程序，提高了羅漢果多倍體誘導(dǎo)效率，便于實(shí)際應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例中30iiM Oryzalin水溶液按照如下方法事先配制首先采用少量DMSO(二甲基亞砜)溶解所需質(zhì)量的Oryzalin藥劑，然后將DMSO溶液滴加入蒸餾水中，滴加過程中不斷搖勻蒸餾水，保證無藥劑析出，液體為黃色，DMSO用量為最終配制水溶液的1%。實(shí)施例I<1>田間選擇羅漢果品種類型“青皮果”無病蟲害發(fā)生、生長(zhǎng)健壯的雌株為誘導(dǎo)植 株。<2>進(jìn)入開花期，雌花開放的第I天，采用開放雄花花粉進(jìn)行授粉。<3>羅漢果雌花授粉后24h，將雌花放入裝有30 ii M Oryzalin水溶液的離心管中進(jìn)行浸泡處理24h。<4>處理結(jié)束后,取出雌花,用清水清洗,去除Oryzalin。<5>收獲處理果實(shí)待雌花膨大形成果實(shí)且果實(shí)顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時(shí)，采摘果實(shí)。與對(duì)照相比，處理后，雌花正常膨大，形成果實(shí)的比率明顯下降，授粉后24h處理，果實(shí)成熟率下降41. 11%?！?>播種育苗及染色體鑒定剝?nèi)」麑?shí)中的種子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。授粉后24h處理獲得的122個(gè)后代植株中，四倍體比率為10. 66%,無嵌合體發(fā)生。實(shí)施例2<1>田間選擇羅漢果品種類型“青皮果”無病蟲害發(fā)生、生長(zhǎng)健壯的雌株為誘導(dǎo)植株。<2>進(jìn)入開花期，雌花開放的第I天，采用開放雄花花粉進(jìn)行授粉?！?>羅漢果雌花授粉后48h，將雌花放入裝有30iiM Oryzalin水溶液的離心管中進(jìn)行浸泡處理24h。<4>處理結(jié)束后,取出雌花,用清水清洗,去除Oryzalin。<5>收獲處理果實(shí)待雌花膨大形成果實(shí)且果實(shí)顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時(shí)，采摘果實(shí)。與對(duì)照相比，處理后，雌花正常膨大，形成果實(shí)的比率明顯下降，授粉后48h處理，果實(shí)成熟率下降9. 17%?！?>播種育苗及染色體鑒定剝?nèi)」麑?shí)中的種子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。授粉后48h處理獲得的490個(gè)后代植株中，四倍體比率為2. 45%,無嵌合體發(fā)生。
權(quán)利要求
1.一種羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于采用Oryzalin浸泡處理授粉后的羅漢果雌花，然后用清水清洗解除。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于所述授粉是羅漢果雌花開放的第I天，采用新鮮開放雄花花粉進(jìn)行。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于所述授粉后是羅漢果雌花授粉后24h 48h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于所述Oryzalin浸泡處理使用30 u M的Oryzalin水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于所述Oryzalin浸泡處理持續(xù)24h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于該方法還包括收獲處理果實(shí)、播種育苗及染色體鑒定步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于所述收獲處理果實(shí)是待雌花膨大形成果實(shí)且果實(shí)顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時(shí)采摘果實(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于所述播種育苗及染色體鑒定是剝?nèi)」麑?shí)中的種子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羅漢果多倍體的誘導(dǎo)方法，采用Oryzalin浸泡處理授粉后的羅漢果雌花，然后用清水清洗解除，通過新型化學(xué)誘導(dǎo)劑Oryzalin誘導(dǎo)合子染色體加倍，從而獲得多倍體。本發(fā)明解決了羅漢果多倍體的嵌合體問題，簡(jiǎn)化了誘導(dǎo)的操作程序，提高了羅漢果多倍體誘導(dǎo)效率，便于實(shí)際應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01H1/08GK102668978SQ20121017870
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者馮世鑫, 潘麗梅, 白隆華, 繆劍華, 莫長(zhǎng)明, 董志淵, 馬小軍 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園