專利名稱：一種尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法。
背景技術(shù)：
也門鐵為龍舌蘭科龍血樹(shù)屬，屬常綠小喬木，又名香龍血樹(shù)、千年木等，原產(chǎn)于熱帶幾內(nèi)亞和埃塞俄比亞等。它株形美觀，葉片挺拔，葉色濃綠有光澤，四季常青，管理簡(jiǎn)便， 具有較高的觀賞價(jià)值，適合于室內(nèi)擺設(shè)和園林綠化。由于也門鐵需經(jīng)數(shù)年才能開(kāi)花結(jié)實(shí)，且分枝極少，因此使用種子和扦插繁殖難以滿足生產(chǎn)需求，其大規(guī)模育苗只可能通過(guò)離體培養(yǎng)途徑來(lái)獲得。目前，對(duì)影響也門鐵葉片愈傷組織誘導(dǎo)的植物激素的研究并不充分、全面，對(duì)也門鐵進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)不成熟，利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)也門鐵進(jìn)行快速、大規(guī)模繁殖受到了極大地限制，不利于也門鐵種苗的工廠化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法，旨在解決目前對(duì)影響也門鐵葉片愈傷組織誘導(dǎo)的植物激素的研究并不充分、全面，對(duì)也門鐵進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)不成熟，利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)也門鐵葉片進(jìn)行快速、大規(guī)模繁殖受到了極大地限制，不利于也門鐵種苗的工廠化生產(chǎn)的問(wèn)題。本發(fā)明的目的在于提供一種尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法，所述方法包括以下步驟取也門鐵無(wú)菌苗植株葉片作為外植體材料；在MS培養(yǎng)基中，加入不同濃度的NAA、2，4_D、KT，高壓滅菌；接種后進(jìn)行暗培養(yǎng)；觀察愈傷組織生長(zhǎng)情況，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。本發(fā)明提供的尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法，以普通也門鐵無(wú)菌苗葉片為外植體，在MS基本培養(yǎng)基上，分別添加不同濃度的NAA、2，4-D及KT，配置成觀種激素組合的配方，通過(guò)離體培養(yǎng)，探索不同激素配比對(duì)也門鐵葉片愈傷組織的誘導(dǎo)作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)影響也門鐵葉片愈傷組織誘導(dǎo)的植物激素充分、全面的研究，使得對(duì)也門鐵進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)更加成熟，極大地促進(jìn)了利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)也門鐵進(jìn)行快速、 大規(guī)模繁殖，利于也門鐵種苗的工廠化生產(chǎn)，為探索高效的也門鐵組培快繁新方法提供科學(xué)依據(jù)，方法簡(jiǎn)單可行，可操作性強(qiáng)，為建立也門鐵組培再生體系奠定了基礎(chǔ)。


圖1示出了本發(fā)明實(shí)施例提供的尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法的實(shí)現(xiàn)流程圖。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明， 并不用于限定發(fā)明。圖1示出了本發(fā)明實(shí)施例提供的尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法的實(shí)現(xiàn)流程。 2. 0%Ε

該方法包括以下步驟
在步驟SlOl中，取也門鐵無(wú)菌苗植株葉片作為外植體材料；
在步驟S102中，在MS培養(yǎng)基中，加入不同濃度的NAA、2，4-D、KT，高壓滅菌；
在步驟S103中，接種后進(jìn)行暗培養(yǎng)；
在步驟S104中，觀察愈傷組織生長(zhǎng)情況，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
在本發(fā)明實(shí)施例中，MS培養(yǎng)基的pH值為5. 8，瓊脂濃度為0. 55%，蔗糖濃度為
在本發(fā)明實(shí)施例中，不同激素NAA、2，4-D、KT的配比如下所示 配比 1 :0mg/L NAA, 1. 0mg/L2，4-D，0. 5mg/L KT 配比 2 :0mg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，1. Omg/L KT 配比 3 Omg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，2. Omg/L KT 配比 4 Omg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，3. Omg/L KT 配比 5 Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4_D，0. 5mg/L KT 配比 6 Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4_D，1. Omg/L KT 配比 7 Omg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，Omg/L KT ； 配比 8 Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4_D，3. Omg/L KT ； 配比 9 Omg/L NAA, 3. 0mg/L2，4_D，0. 5mg/L KT ； 配比10 配比11 配比12 配比13 配比14 配比15 配比16 配比17 配比18 配比19 配比20 配比21 配比22 配比23 配比24
Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4-D, 1.Omg/L KT；Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4-D，2.Omg/L KT；0.5mg/LNAA，0mg/L2，4-D, 1.Omg/L KT ；0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,1.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,2.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,3.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT0.5mg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,3.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT0.5mg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,1.Omg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,1.Omg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,2.Omg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,3.Omg/L KT
配比25 1. Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4-D，0. 5mg/L KT ；配比26 :1. Omg/L ΝΑΑ，2· 0mg/L2，4_D，3. Omg/L KT ；配比27 :1. Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4_D，0. 5mg/L KT ；配比28 :1. Omg/L NAA, 3. 0mg/L2，4_D，1. Omg/L KT ；在本發(fā)明實(shí)施例中，滅菌處理的實(shí)現(xiàn)方法為在115°C下高壓蒸汽滅菌20min。在本發(fā)明實(shí)施例中，接種后黑暗培養(yǎng)的溫度設(shè)置為25 27V。在本發(fā)明實(shí)施例中，愈傷組織誘導(dǎo)率的計(jì)算方法為誘導(dǎo)率％ =(形成愈傷組織的塊數(shù)/接種的塊數(shù))X 100。本發(fā)明實(shí)施例提供的尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法，以普通也門鐵無(wú)菌苗葉片為外植體，在MS基本培養(yǎng)基上，分別添加不同濃度的NAA、2，4-D及KT， 配置成觀種激素組合的配方，通過(guò)離體培養(yǎng)，探索不同激素配比對(duì)也門鐵葉片愈傷組織的誘導(dǎo)作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)影響也門鐵葉片愈傷組織誘導(dǎo)的植物激素充分、全面的研究，使得對(duì)也門鐵進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)更加成熟，極大地促進(jìn)了利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)也門鐵進(jìn)行快速、大規(guī)模繁殖，利于也門鐵種苗的工廠化生產(chǎn)，為探索高效的也門鐵組培快繁新方法提供科學(xué)依據(jù)，方法簡(jiǎn)單可行，可操作性強(qiáng)，為建立也門鐵組培再生體系奠定了基礎(chǔ)。以上僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟取也門鐵無(wú)菌苗植株葉片作為外植體材料； 在MS培養(yǎng)基中，加入不同濃度的NAA、2，4-D、KT，高壓滅菌； 接種后進(jìn)行暗培養(yǎng)；觀察愈傷組織生長(zhǎng)情況，計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述MS培養(yǎng)基的pH值為5.8，瓊脂濃度為 0. 55%，蔗糖濃度為2.0%。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述不同激素NAA、2，4-D、KT的配比如下所示配比1:0mg/LNAA, 1.0mg/L2"1-D，0.5mg/L KT配比2:0mg/LNAA, 1.0mg/L2"I-D,1.Omg/L KT配比3:0mg/LNAA, 1.0mg/L2"1-D，2.Omg/L KT配比4:0mg/LNAA, 1.0mg/L2"1-D，3.Omg/L KT配比5:0mg/LNAA, 2.0mg/L2"1-D，0.5mg/L KT配比6:0mg/LNAA, 2.0mg/L2"I-D,1.Omg/L KT配比7:0mg/LNAA, 1.0mg/L2"1-D，0mg/L KT ；配比8:0mg/LNAA, 2.0mg/L2"1-D,3. Omg/L KT配比9:0mg/LNAA, 3.0mg/L2"I-D，0.5mg/L KT配比100mg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4-D, 1.Omg/L KT ；配比11Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4-D，2.Omg/L KT ；配比12:0.5mg/LNAA，0mg/L2，4-D, 1.Omg/L KT ；配比13:0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,0.5mg/LKT配比14:0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,1.Omg/LKT配比15:0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,2.Omg/LKT配比16:0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,3.Omg/LKT配比17:0.5mg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,0.5mg/LKT配比18:0.5mg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,3.Omg/LKT配比19:0.5mg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,0.5mg/LKT配比20:0.5mg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,1.Omg/LKT配比21:1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,0.5mg/LKT配比22:1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,1.Omg/LKT配比23:1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,2.Omg/LKT配比24:1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,3.Omg/LKT配比25:1.Omg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,0.5mg/LKT配比26:1.Omg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,3.Omg/LKT配比27:1.Omg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,0.5mg/LKT配比28:1.Omg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,1.Omg/LKTo
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述滅菌處理的實(shí)現(xiàn)方法為在115°C下高壓蒸汽滅菌20min。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述接種后暗培養(yǎng)的溫度設(shè)置為25 27 V。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷組織誘導(dǎo)率的計(jì)算方法為 誘導(dǎo)率=(形成愈傷組織的塊數(shù)/接種的塊數(shù))X100。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，提供了一種尋求誘導(dǎo)也門鐵葉片愈傷組織的最佳激素配方的方法，以普通也門鐵無(wú)菌苗葉片為外植體，在MS基本培養(yǎng)基上，分別添加不同濃度的NAA、2，4-D及KT，配置成28種激素組合的配方，通過(guò)離體培養(yǎng)，探索不同激素配比對(duì)也門鐵葉片愈傷組織的誘導(dǎo)作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)影響也門鐵葉片愈傷組織誘導(dǎo)的植物激素充分、全面的研究，使得對(duì)也門鐵進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)更加成熟，極大地促進(jìn)了利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)也門鐵進(jìn)行快速、大規(guī)模繁殖，利于也門鐵種苗的工廠化生產(chǎn)，為探索高效的也門鐵組培快繁新方法提供科學(xué)依據(jù)，方法簡(jiǎn)單可行，可操作性強(qiáng)，為建立也門鐵組培再生體系奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102524078SQ20121005728
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月7日
發(fā)明者岑裕添, 徐根娣, 徐龍乾, 羅紅梅, 蔣海玲, 馬英川 申請(qǐng)人:浙江師范大學(xué)